检索结果-南通市图书馆

基于转录组学分析大肠杆菌中purR基因缺失对胞苷合成代谢的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2023年第8期43卷 52-62页

作者：马聪张想军叶彤柳凤敏张皓杰刘慧燕方海田宁夏大学食品与葡萄酒学院银川750021 宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室银川750021

胞苷可作为功能营养化学品与药物合成原料,具有重要的应用价值。大肠杆菌中由purR基因编码的DNA结合转录抑制因子对胞苷合成代谢有重要调控作用。采用CRISPR/Cas9技术敲除大肠杆菌purR基因,并通过转录组学分析突变菌株基因表达的差异。... 详细信息

胞苷可作为功能营养化学品与药物合成原料,具有重要的应用价值。大肠杆菌中由purR基因编码的DNA结合转录抑制因子对胞苷合成代谢有重要调控作用。采用CRISPR/Cas9技术敲除大肠杆菌purR基因,并通过转录组学分析突变菌株基因表达的差异。结果表明,从出发菌株E.coli NXBG-12基因组上成功敲除了purR基因,获得了突变菌株E.coli NXBG-17P。对突变菌株E.coli NXBG-17P与E.coli NXBG-12的转录组学结果进行对比分析,发现有534个差异基因,其中上调基因302个、下调基因232个;GO分析显示,差异表达基因(DEGs)主要富集于细胞膜、ATP结合、DNA结合和水解酶活性的代谢过程;KEGG分析表明,上调基因主要富集在果糖和甘露糖代谢、嘧啶代谢和磷酸转移酶系统,下调基因主要富集在氧化磷酸化、半乳糖代谢和肽聚糖的生物合成。同时,突变菌株E.coli NXBG-17P在37℃摇瓶发酵40 h,测定胞苷浓度为(3.21±0.01)g/L,是出发菌株E.coli NXBG-12的1.58倍。这表明突变菌株E.coli NXBG-17P胞苷产量升高,可能是purR基因缺失导致葡萄糖磷酸转移酶系统(PTS)转运和磷酸戊糖途径中关键基因表达上调,合成了大量胞苷所需能量NADPH和前体物质PRPP。

关键词：大肠杆菌胞苷 purR基因基因敲除转录组分析

重组大肠杆菌NXDX-BG16胞苷发酵条件优化及提取工艺研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重组大肠杆菌NXDX-BG16胞苷发酵条件优化及提取工艺研究

作者：李一鸣宁夏大学

学位级别：硕士

胞苷是一种嘧啶核苷,在食品和医药领域有着非常重要的作用和广泛的应用前景,目前主要通过微生物发酵方法获得,但菌株胞苷合成能力不高、发酵水平低、分离提取难度大等因素,限制了胞苷的规模化生产和应用。为进一步提高大肠杆菌的胞苷合... 详细信息

胞苷是一种嘧啶核苷,在食品和医药领域有着非常重要的作用和广泛的应用前景,目前主要通过微生物发酵方法获得,但菌株胞苷合成能力不高、发酵水平低、分离提取难度大等因素,限制了胞苷的规模化生产和应用。为进一步提高大肠杆菌的胞苷合成能力、发酵单位和胞苷提取效率,本文以大肠杆菌NXDX-BG15为出发菌株,采用常压室温等离子（Atmospheric Room Temperature,ARTP）技术对其进行诱变选育,筛选出高产菌株;通过响应面法对获得的突变菌株进行发酵条件优化,得到最佳发酵条件;最后,利用结晶分离等技术对发酵液中胞苷的提取进行了研究,确定了分离提取工艺。主要研究内容与结果如下:（1）ARTP诱变筛选组氨酸营养缺陷型突变菌株及其对胞苷发酵的影响。组氨酸合成与嘧啶合成途径共同竞争PRPP的分流量,阻断组氨酸合成可能会增加PRPP向胞苷合成途径的代谢分流。以大肠杆菌NXDX-BG15作为出发菌株,通过ARTP诱变处理并进行遗传稳定性试验,筛选出1株组氨酸营养缺陷型突变菌株NXDX-BG16,并用20 L发酵罐进行发酵实验,发酵周期为34h。研究结果表明,突变菌株NXDX-BG16在组氨酸补充培养基上生长良好,斜面传代20代,在基本培养基依旧不生长,葡萄糖消耗量是（37.76±0.61）g/L,胞苷含量是（24.05±0.71）g/L,分别是出发菌株的0.92倍和1.13倍。ARTP诱变技术可以高效获得生长良好、葡萄糖消耗量低、胞苷含量高且遗传稳定性良好的组氨酸营养缺陷菌株。（2）重组大肠杆菌NXDX-BG16胞苷发酵条件优化研究。以大肠杆菌NXDX-BG16作为发酵菌株,利用正交实验对氮源组分进行优化,利用单因素实验和响应面实验对碳源种类及添加量、生物素（B7）添加量、磷酸盐种类及添加量、锰离子添加量进行优化,利用单因素实验和响应面实验对溶氧浓度、搅拌转速、通气方式和补料方式进行优化,确定了最佳的发酵培养基组分及发酵工艺参数。研究结果表明:优化后的发酵培养基组分为酵母粉10 g/L、玉米浆干粉20 g/L、硫酸铵7.5 g/L、蛋白胨5g/L、葡萄糖118g/L、生物素（B7）0.04 g/L、磷酸二氢钾4g/L,硫酸锰0.006g/L（6.0mg/L）;优化后的发酵条件为:溶氧浓度范围为60%～80%、搅拌转速300rpm、分阶段通气量（1 wm/3 vvm/2 vvm）、采用葡萄糖反馈补料方式进行补料,优化后胞苷含量为（35.68±0.53）g/L,优化前的胞苷含量为（24.05±0.71）g/L,提高了 48%。（3）发酵液中胞苷分离提取工艺研究。在味精（食品级）和氨基酸提取工艺基础上,对调酸、纯化、脱色、结晶这4个关键工艺环节的参数进行了优化,研究结果表明:树脂吸附纯化工艺,选择使用001·7离子交换树脂材料;调酸处理工艺,pH值的范围设置为1～2;活性炭脱色工艺,搅拌转速150 rpm,脱色温度53℃,脱色时间50 min,活性炭用量0.8%,脱色率可达到83.86%;醇沉结晶工艺,（乙醇）体积倍数为1.8,温度为15℃,搅拌转速为116rpm,比优化前析晶时间提前28%;工艺优化之后的胞苷总收率为75.14%,经过HPLC纯度检测为94.88%（大于90%）,胞苷含量为97.44%,比胞苷优化前工艺总收率提高了 15.88%。

关键词：大肠杆菌胞苷 ARTP 诱变筛选发酵优化分离提取

胞苷合成途径改造对大肠杆菌嘧啶核苷发酵的影响

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与发酵工业 2021年第12期47卷 10-16页

作者：刘益宁秦臻李旋蒋帅吴鹤云谢希贤天津科技大学生物工程学院天津300457 天津科技大学食品科学与工程学院天津300457 代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室天津300457

嘧啶核苷包括尿苷和胞苷,是生产抗病毒和抗肿瘤药物的重要中间体。为获得胞苷高产菌,该研究以高产尿苷的大肠杆菌UR6为出发菌株,利用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术对其进行了一系列的代谢工程改造。结果显示,cdd、cmk和ygdH 3个基因... 详细信息

嘧啶核苷包括尿苷和胞苷,是生产抗病毒和抗肿瘤药物的重要中间体。为获得胞苷高产菌,该研究以高产尿苷的大肠杆菌UR6为出发菌株,利用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术对其进行了一系列的代谢工程改造。结果显示,cdd、cmk和ygdH 3个基因的敲除阻断了胞苷及其前体物的主要降解途径,使胞苷产量达到了2.8 g/L,而尿苷产量基本无变化;突变体PyrH ecj(D93A)和PyrG cgl(D160E、E162、E168K)的引入结合nudG基因的双拷贝有效增强了胞苷合成途径,使胞苷产量提高至5.6 g/L,尿苷产量降低至9.3 g/L;引入酵母菌的5′-核苷酸酶PHM8使尿苷的产量提高至11.5 g/L,而对胞苷的积累影响不大;乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶和尿苷酸激酶的融合表达,增强了尿苷酸到胞苷的合成通量,使胞苷产量进一步提升至7.2 g/L,尿苷产量降低至8.2 g/L。最终所得菌株可用于胞苷和尿苷联产,具有较好的工业化应用前景。

关键词：胞苷尿苷代谢工程大肠杆菌发酵

整体毛细管电色谱测定冬虫夏草中胞苷与腺苷的含量

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国中药杂志 2009年第5期34卷 587-590页

作者：郭怀忠毕开顺孙毓庆河北大学药学院河北保定071002 河北省药物质量研究重点实验室河北保定071002 沈阳药科大学药学院辽宁沈阳110016

目的:采用聚甲基丙烯酸丁酯(PBMA)整体柱毛细管电色谱法测定冬虫夏草中胞苷和腺苷的含量。方法:采用自制的PBMA电色谱整体柱(总长为34.5 cm,有效长度26.0 cm),流动相20 mmol.L-1硼砂水溶液(pH 3.5),运行电压15kV,压力进样(6×105)Pa×0.... 详细信息

目的:采用聚甲基丙烯酸丁酯(PBMA)整体柱毛细管电色谱法测定冬虫夏草中胞苷和腺苷的含量。方法:采用自制的PBMA电色谱整体柱(总长为34.5 cm,有效长度26.0 cm),流动相20 mmol.L-1硼砂水溶液(pH 3.5),运行电压15kV,压力进样(6×105)Pa×0.1 m in;柱温30℃,检测波长214 nm,内标溶液100μg.mL-1甲氧苄啶(TMP)溶液(乙醇-流动相1∶1为溶剂)。结果:两核苷的在12.5~125 mg.L-1线性关系良好。检测限(S/N=3)及定量限(S/N=10)分别为:胞苷2.14,7.14 mg.L-1;腺苷1.88,6.25 mg.L-1。两核苷加样回收率在97.2%~103.5%,RSD在0.9%~2.6%。结论:该方法可用于冬虫夏草中胞苷和腺苷的含量测定。

关键词：整体毛细管电色谱法冬虫夏草胞苷腺苷含量测定

ARTP诱变筛选组氨酸营养缺陷型突变菌株及其对胞苷发酵的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业科学研究 2022年第3期43卷 16-21页

作者：李一鸣方海田王红燕柳凤敏艾治宇宁夏大学食品与葡萄酒学院宁夏银川750021 宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室宁夏银川750021

组氨酸合成与嘧啶合成途径共同竞争PRPP分流量,阻断组氨酸合成可能会增加PRPP向胞苷合成途径的代谢分流,为了提升高产胞苷工业化育种效率,将出发菌株大肠杆菌K-12进行多轮ARTP诱变处理,并结合传统筛菌手段,筛选出1株组氨酸营养缺陷型突... 详细信息

组氨酸合成与嘧啶合成途径共同竞争PRPP分流量,阻断组氨酸合成可能会增加PRPP向胞苷合成途径的代谢分流,为了提升高产胞苷工业化育种效率,将出发菌株大肠杆菌K-12进行多轮ARTP诱变处理,并结合传统筛菌手段,筛选出1株组氨酸营养缺陷型突变菌株。对其经过20 L发酵罐发酵32 h,突变菌株生长良好,葡萄糖消耗量是(37.76±0.61)g/L,胞苷产量是(24.05±0.71)g/L,分别是出发菌株的92%和1.13倍。结果表明:ARTP诱变可以有效获得生长良好、葡萄糖消耗量低、遗传稳定性好的高产胞苷工业菌株。

关键词：大肠杆菌 ARTP 组氨酸营养缺陷发酵胞苷

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

添加不同表面活性剂对胞苷发酵的影响

食品与发酵工业 2019年第4期45卷 48-54页

作者：赵贝贝方海田刘慧燕马若霜王茹刘予煊李金娜宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室宁夏银川750021 宁夏大学农学院宁夏银川750021

研究4种不同表面活性剂对大肠杆菌BG-12的胞苷合成和菌体生长的影响。在胞苷产生菌大肠杆菌BG-12发酵10 h时,添加Tween-80、Triton X-100、CTAB (hexadecyl trimethyl ammonium bromide)和EMB(ethambutol dihydrochloride) 4种表面活性剂,进行对比试验,分析菌体生长、耗糖速率和胞苷浓度等的变化。Tween-80的添加量为1～4 g/L时,对胞苷的产量呈现促进作用,添加3 g/L时的产量达到最大为1.696 g/L,是对照组的2.42倍,且对菌体生长、耗糖速率无明显影响;添加Triton X-100时实验组的胞苷产量均低于对照组,但添加量为0.4～0.8 g/L时会促进菌体生长和耗糖速率;添加CTAB和EMB时,胞苷产量明显下降,但对菌体生长及耗糖速率影响不大。Tween-80在发酵10 h时添加、且在低于4 g/L时对胞苷产量有促进作用,添加Triton X-100、CTAB和EMB对菌体生长表现为促进或无影响,但对胞苷产量无促进作用。

关键词：胞苷大肠杆菌BG-12 表面活性剂

注射用三磷酸胞苷二钠含量均匀度测定方法研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药业 2022年第8期31卷 72-75页

作者：张雪艳周长明赵璇北京市药品检验研究院·国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室·中药成分分析与生物评价北京市重点实验室北京102206

目的建立测定注射用三磷酸胞苷二钠含量均匀度的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.02 mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈(90∶10,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为271 nm,柱温为35℃,进样量... 详细信息

目的建立测定注射用三磷酸胞苷二钠含量均匀度的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.02 mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈(90∶10,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为271 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。以胞苷为对照品,折算系数为2.167,按外标法计算注射用三磷酸胞苷二钠的含量均匀度,以2020年版《中国药典(四部)》通则0941要求的A+2.2 S≤15.0为判定标准考察整体情况。结果三磷酸胞苷二钠质量浓度在0.01911~1.91095 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好;精密度试验的RSD胞苷为对照的HPLC法测定注射用三磷酸胞苷二钠含量均匀度方法更科学、更准确,能更好地控制产品质量。

关键词：注射用三磷酸胞苷二钠胞苷含量均匀度外标法高效液相色谱法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

胞苷发酵培养基的优化研究

河南农业大学学报 2007年第6期41卷 651-654页

作者：黄艳辉丰贵鹏杨晓娟漯河职业技术学院轻工系河南漯河462002 平原大学化学与环境工程学院河南新乡453003

采用响应面分析的方法对发酵生产胞苷的培养基进行优化,通过二水平正交试验考察葡萄糖、玉米蛋白粉、玉米浆、K2HPO4、尿素、起始pH值和发酵温度对发酵生产胞苷的影响,利用极差分析寻找发酵生产胞苷的主要影响因子,利用中心组合设计与... 详细信息

采用响应面分析的方法对发酵生产胞苷的培养基进行优化,通过二水平正交试验考察葡萄糖、玉米蛋白粉、玉米浆、K2HPO4、尿素、起始pH值和发酵温度对发酵生产胞苷的影响,利用极差分析寻找发酵生产胞苷的主要影响因子,利用中心组合设计与响应面分析进一步考察主要影响因子并确定了最佳培养基的组成.结果表明,发酵生产胞苷的主要影响因子分别为K2HPO4、玉米浆和葡萄糖.在优化培养基中,胞苷产量增加2倍,达到1.898 g.L-1,试验值与预测值基本相符.

关键词：胞苷枯草芽孢杆菌发酵培养基优化

利用抗CTP合成酶反馈抑制筛选胞苷高产突变株

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药科大学学报 2009年第5期40卷 455-459页

作者：李登奎徐晓莉黄雷鸣陈颖窦洁周长林中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

目的:通过解除对CTP合成酶的反馈抑制,得到胞苷高产突变株。方法:以胞苷脱氨酶缺失的枯草芽孢杆菌为出发菌株进行亚硝基胍(NTG)诱变,用6-氮杂尿嘧啶(6-AU)、5-氟胞苷(5-FCR)和3-脱杂氮尿嘧啶(3-DU)3种嘧啶结构类似物进行抗性筛选。结果... 详细信息

目的:通过解除对CTP合成酶的反馈抑制,得到胞苷高产突变株。方法:以胞苷脱氨酶缺失的枯草芽孢杆菌为出发菌株进行亚硝基胍(NTG)诱变,用6-氮杂尿嘧啶(6-AU)、5-氟胞苷(5-FCR)和3-脱杂氮尿嘧啶(3-DU)3种嘧啶结构类似物进行抗性筛选。结果:筛选得到突变株K-215,研究表明其抗6-AU、5-FCR和3-DU的浓度分别是0.9mg/mL,3.5mg/mL和4.5mg/mL;突变株CTP合成酶的活性为出发菌株的6.2倍,37℃培养80h积累胞苷可达6.2mg/mL。结论:突变株K-215能够累积胞苷且CTP合成酶的反馈抑制得到部分解除。

关键词：胞苷 CTP合成酶抗性筛选枯草芽孢杆菌