检索结果-南通市图书馆

生物工程学报 2023年第1期39卷 347-358页

作者：朱兆成夏爱鸿曹兆立李昕陈祥徐正中焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏扬州225009

本研究旨在建立一种基于流式细胞术的牛多细胞因子检测方法。对前期制备并筛选出的针对牛细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α、IP-10和MCP-1的单克隆抗体进行荧光标记,与细胞表面分子抗体组合搭配,进行牛多细胞因子流式检测方法的建立和优化... 详细信息

本研究旨在建立一种基于流式细胞术的牛多细胞因子检测方法。对前期制备并筛选出的针对牛细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α、IP-10和MCP-1的单克隆抗体进行荧光标记,与细胞表面分子抗体组合搭配,进行牛多细胞因子流式检测方法的建立和优化。随后利用建立的方法进行BCG体外感染牛外周血单个核细胞的细胞因子表达规律测定,并结合CFP10-ESAT6蛋白刺激剂评价上述细胞因子作为牛结核诊断标识的潜力。建立的牛多细胞因子流式检测方法可以有效测定BCG感染牛外周血T淋巴细胞的细胞因子表达,其中IFN-γ、IL-2、TNF-α在感染40h后持续上升,而IP-10和MCP-1表达水平呈现下降趋势;对于牛外周血CD4^(+)T淋巴细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α的联合检测能有效区分牛结核阳性和阴性样品。这一方法为牛病原菌感染、疫苗注射后细胞免疫应答水平评价以及疫病诊断提供了重要技术手段。

关键词：牛细胞因子胞内染色流式细胞术细胞免疫应答疫病诊断

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

小鼠galectin-9可通过分泌形式诱导Tim-3^-T细胞凋亡

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2010年第2期30卷 144-149页

作者：何文涛袁劲徐逸周鸿敏蔡兰军郭晖李超左利群宫念樵陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科

目的构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法常规分子克隆方法结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000... 详细信息

目的构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法常规分子克隆方法结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒pAd-gal-9.CsCI密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,AnnexinV/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3^＋ T细胞的比例.结果重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3^＋ T细胞的比例.结论重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pad-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达.

关键词：半乳糖凝集素-9 胞内染色凋亡 T细胞

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

炎症性关节病外周血Th17细胞检测及意义

炎症性关节病外周血Th17细胞检测及意义

引用

作者：芮金兵江苏大学

学位级别：硕士

引言：炎症性关节病包括类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)、强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis, AS)和感染性关节炎。RA是一种累及周围关节为主的全身性、炎症性自身免疫病,可累及心、肺、肾、血管、血液、神经及眼等组织或... 详细信息

引言：炎症性关节病包括类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)、强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis, AS)和感染性关节炎。RA是一种累及周围关节为主的全身性、炎症性自身免疫病,可累及心、肺、肾、血管、血液、神经及眼等组织或器官。RA的发病机制尚未完全明确,目前认为可能是携带RA易感基因者被某种病原体感染后导致机体免疫系统紊乱,T细胞介导的免疫异常是其主要的发病机制,尤其是CD4+T细胞起着关键作用,CD4+T细胞参与了关节炎症的激发和延续。AS的临床特征是中轴关节的慢性炎症,其发病机制不明,可能是一种遗传因素(HLA-B27)占主导的多基因疾病。抗原提呈细胞表面HLA-B27分子将处理的抗原多肽提呈给免疫活性T细胞后启动了发病过程,其中T细胞免疫功能异常在其发病机制中起着重要作用。Th17细胞是近年新发现的一种辅助性T细胞,其各种特性与Thl和Th2细胞不同,产生的细胞因子包括IL-17、IL-21和IL-22等,可能在炎症性关节病(RA、AS)的致病机制中发挥重要作用。目的：检测炎症性关节病(RA、AS)外周血Th17细胞比例,及CD4+T细胞IL-17蛋白表达和IL-17、RORγtmRNA水平,并初步探讨其临床意义。方法：分离炎症性关节病(RA、AS)患者和健康人外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选CD4T细胞,经PMA/Ion刺激,固定／透膜剂处理,然后进行细胞内染色,流式细胞术(FCM)检测CD4T细胞IL-17、IFN-γ、IL-6水平。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17、RORγtmRNA水平。应用Pearson相关性检验分析IL-17与IFN-γ、IL-6、ESR和CRP之间的相关性。分组：①健康人对照组;②病情稳定组;③病情活动组。结果：(1)免疫磁珠阴选CD4T细胞纯度达90%以上。(2)RA和AS病情活动组IL-17表达水平显著高于病情稳定组(P胞IL-17表达水平较无刺激组显著增加(P0.05)。(3)RA和AS患者CD4+T细胞IL-17、RORγtmRNA水平病情活动组较稳定组和对照组显著增高(P胞IL-17、RORγtmRNA水平显著高于未刺激组(P胞IL-17蛋白水平与IFN-γ、IL-6无显著相关,与ESR、C反应蛋白(CRP)也未见明显相关性(P>0.05)。结论：(1)炎症性关节病(RA、AS)患者外周血CD4+T细胞中存在异常增高的Th17细胞,异常增高的Th17细胞、以及Th17/Th1/Th2三者的比例失调可能参与了RA和AS的发病过程。(2)RA和AS患者外周血CD4T细胞IL-17、RORγt表达水平显著增高,IL-17、RORγt异常表达可能与RA和AS的病情活动相关。

关键词： Th17细胞类风湿关节炎强直性脊柱炎 IL-17 RORγt 胞内染色

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

急性髓系白血病患者NPM1突变体特异性T细胞免疫应答的研究

急性髓系白血病患者NPM1突变体特异性T细胞免疫应答的研究

引用

作者：程珍苏州大学

学位级别：硕士

本论文包括两部分内容：(一)体外诱导突变型NPM1抗原肽特异性T淋巴细胞的研究;(二)急性髓系白血病患者突变型NPM1抗原肽特异性T淋巴细胞的检测。【目的】采用负载突变型NPM1(NPM1mut)抗原肽的树突状细胞(DCs)体外刺激健康供者自身的... 详细信息

本论文包括两部分内容：(一)体外诱导突变型NPM1抗原肽特异性T淋巴细胞的研究;(二)急性髓系白血病患者突变型NPM1抗原肽特异性T淋巴细胞的检测。【目的】采用负载突变型NPM1(NPM1mut)抗原肽的树突状细胞(DCs)体外刺激健康供者自身的淋巴细胞，以诱导针对此肽的特异性T细胞免疫应答;并且检测伴随NPM1mut急性髓系白血病(NPM1mut+AML)患者的外周血中是否存在NPM1mut抗原肽特异性T淋巴细胞。以期为白血病患者的免疫治疗提供理论依据。【方法】 1. NPM1基因突变检测：本院初诊AML患者常规行基因突变组套检测。基本方法是从患者骨髓或外周血的单个核细胞中提取基因组DNA，采用聚合酶链式反应(PCR)扩增NPM1基因的12号外显子，直接测序PCR产物。 2.人类白细胞抗原(HLA)基因分型：采用聚合酶链式反应-直接测序分型法(PCR-SBT)检测HLA-A、B、C、DRB1、DQB1五个基因座位。 3.样本的采集及保存：采集HLA-A*0201或A*1101阳性健康供者以及NPM1mut+AML患者缓解期的外周血。Ficoll密度梯度法分离外周血单个核细胞(PBMCs)，-80℃冰箱冻存24小时后，放入液态中冻存。 4. CD8+T细胞表位预测及表位肽合成：通过Net-CTL1.2、Rankpep及SYFPEITHI三种程序软件预测NPM1野生型(NPM1wild)及NPM1mut-A/D的氨基酸序列与HLA-A*0201、A*1101或A*2402分子结合的抗原肽。采用固相合成法合成得分最高的表位肽，纯度均>95%。 5. DCs的培养：取密度为3×106/ml新鲜或解冻复苏的健康供者PBMCs3ml接种于六孔板，采用贴壁法在37℃含5%CO2细胞培养箱中静置培养2h。吸掉上层培养基及未贴壁细胞，贴壁的单核细胞以含有GM-CSF、IL-4的无血清培养基进行培养，诱导单核细胞向未成熟DCs分化。培养5天后换用含有GM-CSF、IL-4、IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE2的无血清培养基继续培养2天，诱导DCs成熟。第7天收集DCs，作为抗原递呈细胞(APC)以及进行表型鉴定。 6.细胞毒性T细胞的活化与增殖：DCs分别负载NPM1野生型及突变型抗原肽后(同时设空载组)，用γ射线(40Gy)照射处理。然后与解冻复苏的自身PBMCs按照细胞数1:10的比例加入24孔板中混合培养。培养基为含有IL-2及IL-7的无血清培养基。于培养的第7天按上述方法进行重复刺激。 7. ELISPOT分析及流式胞内染色检测：混合淋巴细胞肽培养(MPLCs)的第7、14天采用酶联免疫斑点(ELISPOT)以及胞内染色的方法检测三组淋巴细胞IFN-γ的分泌。以T2细胞株作为靶细胞，设空白对照组(未负载肽组)、负载野生型表位肽组、负载突变型表位肽组，比较三组的差异。对于HLA-A*1101阳性的供者，采用自身的DCs作为靶细胞。AML患者外周血标本经解冻复苏、过夜休息后进行ELISPOT分析。【结果】 1.我国汉族人群中，HLA-A位点中A*1101、A*2402以及A*0201三种等位基因是最为常见的。 2.经过上述三种程序软件预测筛选，HLA-A*0201限制性NPM1wild九肽为DLWQWRKSL，NPM1mut-A/D九肽AIQDLCLAV。对于HLA-A*1101限制性的表位肽，野生型无合适的表位肽，突变型(A/D)九肽为AVEEVSLRK。未筛选到合适的HLA-A*2402限制性表位肽。 3. DCs培养7天后检测其细胞表面抗原的表达量：CD142.6%。CD8043.4%、CD8337.8%、CD8699.9%、HLA-DR67.1%，符合DCs的表型。 4. DCs与自身的PBMCs(健康供者)混合培养的第10天左右，淋巴细胞出现大量增殖，突变型肽组最为显著。第7天，所有样本的ELISPOT检测结果均为阴性，阳性质控孔均正常;第14天，有3例健康供者的ELISPOT突变肽型孔为阳性，而野生型肽孔为阴性;此时突变型肽孔中的NPM1mut抗原肽特异性的T淋巴细胞阳性率[=(突变型肽孔的平均斑点数-空白对照孔的平均斑点数)/每孔中加入的淋巴细胞]平均约为1/2000。胞内染色的流式结果显示(CD3+CD8+细胞群设门)：ELISPOT检测结果阳性的供者于第7、14天突变型肽组CD8+IFN-γ+细胞的阳性率高于空白对照组，而野生型肽组与空白对照组无没有明显差异。 5.6例NPM1mut+AML患者的外周血ELISPOT检测结果显示，只有1例(16.7%)患者样本的检测结果可疑阳性。【结论】健康人中，负载NPM1mut抗原肽的DCs可以刺激诱导自身的淋巴细胞，产生突变型NPM1抗原肽特异性T细胞免疫应答，有望用于AML患者的免疫治疗。在NPM1mut+AML患者外周血中，NPM1mut抗原肽特异性T细

关键词：白血病髓样 NPM1基因突变 T细胞酶链免疫斑点胞内染色

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

初步探讨甲肝疫苗诱导的细胞免疫

初步探讨甲肝疫苗诱导的细胞免疫

引用

作者：杨中楠北京生物制品研究所

学位级别：硕士

甲型肝炎疫苗在甲型肝炎的预防和控制中发挥了积极作用。目前，甲型肝炎全病毒灭活苗在国内外已广泛使用;甲型肝炎减毒苗在国内也已得到广泛使用。实验研究和临床应用效果显示两种疫苗均具有较好的免疫原性，其免疫接种后的抗体阳转率... 详细信息

甲型肝炎疫苗在甲型肝炎的预防和控制中发挥了积极作用。目前，甲型肝炎全病毒灭活苗在国内外已广泛使用;甲型肝炎减毒苗在国内也已得到广泛使用。实验研究和临床应用效果显示两种疫苗均具有较好的免疫原性，其免疫接种后的抗体阳转率、抗体滴度以及抗体保护的持久性等方面，已经得到充分的肯定。近年来随着对分子水平免疫反应认识的深入和基础研究的不断加强，以及方法学的进一步发展，人们评价一种疫苗的免疫应答效果，不再仅局限于体液免疫方面，而是越来越关注疫苗诱导的细胞免疫的重要作用。本研究主要评价目前国内普遍应用的两种甲肝疫苗，即甲肝减毒活疫苗与甲肝灭活疫苗，免疫接种后诱导的细胞免疫应答效果以及两者间差别，同时检测甲肝抗体滴度和抗体阳转率，探讨细胞免疫与体液免疫的关系及细胞免疫在早期抗甲肝病毒感染保护中的作用。我们从18～22岁的健康志愿者中，选择甲肝总抗体阴性者和既往甲肝疫苗接种者共18人为本次研究对象。随机分为4组，其中实验组分为2组，每组7人，分别接种甲肝减毒活疫苗和甲肝灭活疫苗;对照组中，设立阳性对照(既往有甲肝疫苗接种史，自愿加强一剂甲肝疫苗)和阴性对照(实验结束时，再接种甲肝疫苗)，每组2人。分别在0周(免疫接种前)和免疫接种后1周、2周、3周、4周、5周、6周、24周(6个月)、25周(灭活苗加强后1周)各采血一次，分离血清，以化学发光法对特异性甲肝抗体进行定性和定量检测;同时分离外周血单个核细胞PBMC，在体外将PBMC以特异性甲肝抗原刺激后，ELISPOT法检测效应T细胞分泌Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2情况，胞内染色法测定CD3／CD4T淋巴细胞、CD3／CD8T淋巴细胞中分泌IFN-γ的阳性细胞百分比，Luminex法检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等多种细胞因子水平。实验数据提示，应用ELISPOT、胞内染色、Luminex等检测方法，特异性好、灵敏度高，结果稳定、可靠，适用于疫苗接种后特异性细胞免疫应答的评价。实验结果显示，在免疫接种甲肝灭活疫苗、甲肝减毒活疫苗后，早期便可诱导产生病毒特异性T细胞的细胞免疫应答反应，并且伴随高水平的效应细胞因子IFN-γ产生。同时提示，在早期的某些时间点上，两种苗所诱导的病毒特异性细胞免疫反应强度存在差别，推测与两种疫苗的甲肝抗原含量以及减毒苗活病毒在体内复制增殖后产生大量内源性抗原有关。研究数据还显示，加强接种后激发免疫记忆性在甲肝疫苗接种者是存在的。在病毒特异性T细胞增殖反应的存在条件下，接种者受到病毒性抗原的刺激下会发生快速的免疫应答反应，结果导致快速高水平的抗体和IFN-γ等抗病毒细胞因子产生。本研究初步建立了甲型肝炎疫苗的细胞免疫评价方法，通过对甲肝疫苗在人体免疫应答效果的探讨和分析，补充和完善了甲肝疫苗的免疫效果评价资料;通过人体诱导的细胞免疫的相关研究，填补了国内外关于甲肝减毒活疫苗在人体诱导的细胞免疫相关研究的空缺，为今后更加全面的评价甲肝疫苗诱导的细胞免疫以及甲肝疫苗能否用于甲肝暴露后预防提供了一定的参考依据。

关键词：甲型肝炎疫苗细胞免疫 ELISPOT 胞内染色 Luminex技术细胞冻存

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：