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人IL-23R胞内区基因的克隆与原核表达

中国生物制品学杂志 2009年第6期22卷 571-573,582页

作者：车昌燕张国华刘力山西医科大学汾阳学院检验系山西汾阳032200 北京协和医学院基础学院病原生物学系北京100005

目的克隆人IL-23R(hIL-23R)胞内区基因,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法通过PCR获得hIL-23R基因的胞内区片段,克隆至载体pGEX-4T-1中,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-hIL-23R(I),转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经... 详细信息

目的克隆人IL-23R(hIL-23R)胞内区基因,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法通过PCR获得hIL-23R基因的胞内区片段,克隆至载体pGEX-4T-1中,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-hIL-23R(I),转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot进行鉴定。结果hIL-23R胞内区基因的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析可见约760bp的目的片段。重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约为55000,在低温(20℃)、低IPTG浓度(0.5mmol/L)诱导条件下能以可溶形式表达,可溶性蛋白的表达量约占菌体可溶性蛋白总量的16.1%,且可被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功克隆了hIL-23R胞内区基因,并在大肠杆菌中表达了可溶性的GST融合蛋白。

关键词：人IL-23受体胞内区基因克隆原核表达

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TLR4胞内区的同源模建

免疫学杂志 2002年第2期18卷 95-98页

作者：顾长国胡远东李松李磊第三军医大学大坪医院野战外科研所一室重庆400042 军事医学科学院六所北京100850

目的为进一步研究新发现的ＴＬＲ４蛋白在ＬＰＳ对机体细胞产生作用的机制，分析其Ｑ结构上的功能区域。方法同源模建，通过计算机模拟从理论上对ＴＬＲ４胞内区的功能区域进行探讨。结果Ｐｒｏ７１２Ｈｉｓ突变体溶液可及表面的亲疏... 详细信息

目的为进一步研究新发现的ＴＬＲ４蛋白在ＬＰＳ对机体细胞产生作用的机制，分析其Ｑ结构上的功能区域。方法同源模建，通过计算机模拟从理论上对ＴＬＲ４胞内区的功能区域进行探讨。结果Ｐｒｏ７１２Ｈｉｓ突变体溶液可及表面的亲疏水性质有明显变化，且相应位置所带的电荷从中性变为正电荷。结论ＴＬＲ４胞内区在发生作用时，起主要作用的是疏水性作用，下一个接头蛋白ＭｙＤ８８与ＴＬＲ４胞内区相互作用的部位应当是一个有较强疏水作用的区域。这样当Ｐｒｏ７１２Ｈｉｓ突变体出现时，由于电荷的排斥，疏水作用无法达到点突变以前的强度，２个蛋白的结合不能得以实现，信号无法继续传递。从而出现对ＬＰＳ的耐受现象。

关键词： TLR4 胞内区同源模建疏水性作用 LPS耐受

猪流行性腹泻病毒S蛋白胞内区线性B细胞表位最小基序鉴定

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微生物学通报 2021年第12期48卷 4828-4835页

作者：张政中董世娟司伏生陈冰清谢春芳李震李家奎于瑞嵩西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 上海种猪工程技术研究中心上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

【背景】S蛋白是猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)的主要结构蛋白和免疫原性蛋白,在前期的研究中,本课题组在S蛋白的胞内区鉴定到2个包含线性B细胞表位的短肽。【目的】鉴定PEDV S蛋白胞内区线性B细胞表位的最... 详细信息

【背景】S蛋白是猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)的主要结构蛋白和免疫原性蛋白,在前期的研究中,本课题组在S蛋白的胞内区鉴定到2个包含线性B细胞表位的短肽。【目的】鉴定PEDV S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序。【方法】原核表达2个短肽的每次后移1个氨基酸的系列8肽,以兔抗S蛋白血清为一抗,通过Western Blot筛选阳性反应8肽,鉴定S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序。【结果】S蛋白胞内区的2个包含线性B细胞表位的短肽共享一个表位,该表位的最小基序为^(1371)QPYE^(1374)。同源性分析显示该B细胞表位基序为保守性表位。【结论】确定了S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序为^(1371)QPYE^(1374);S蛋白抗原表位的鉴定有助于提高对其结构和功能的理解。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白胞内区线性B细胞表位最小基序鉴定

G-CSF受体胞内区与AK017149的相互作用

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生命科学研究 2003年第2期7卷 147-150页

作者：苑晓玲从玉文冯彦斌善亚君王金惠赵振虎陈家佩军事医学科学院放射医学研究所中国北京100850

为研究G CSF受体胞内区与AK017149基因之间的相互作用,进而揭示G CSF受体信号转导通路的可能机制,采用高敏感性的酵母双杂交体系,筛选小鼠胎肝文库,在筛选过程中获得了1个功能未知的基因片段 AK017149,并在酵母和哺乳动物细胞体内验证... 详细信息

为研究G CSF受体胞内区与AK017149基因之间的相互作用,进而揭示G CSF受体信号转导通路的可能机制,采用高敏感性的酵母双杂交体系,筛选小鼠胎肝文库,在筛选过程中获得了1个功能未知的基因片段 AK017149,并在酵母和哺乳动物细胞体内验证了该基因片段的表达蛋白与G CSF受体间的相互作用.实验研究提示,G CSF受体作为胞内信号转导的起始点,可以与众多蛋白因子相结合,对其中未知蛋白的研究,可以为揭示G CSF受体信号转导通路起重要的提示作用.

关键词： G-CSF受体胞内区 AK017149 细胞双杂交信号转导通路粒细胞集落刺激因子

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ErbB2胞内区核定位信号的确定

ErbB2胞内区核定位信号的确定

LIF受体a亚基胞内区远膜端对HL-60细胞增殖分化的影响

中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

作者：陈俏俏陈晓莹蒋赟赟刘兢中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院

ErbB2是癌基因erbB-2编码的跨膜受体糖蛋白,属于受体酪氨酸激酶(RTK)家族,在多种肿瘤特别是乳腺癌中高表达。ErbB2在膜表面过表达时,其胞外区可以脱落进入血清,ErbB2胞外区的水解能使得ErbB2胞内酪氨酸激酶活化。最近的文献报道了ErbB2... 详细信息

ErbB2是癌基因erbB-2编码的跨膜受体糖蛋白,属于受体酪氨酸激酶(RTK)家族,在多种肿瘤特别是乳腺癌中高表达。ErbB2在膜表面过表达时,其胞外区可以脱落进入血清,ErbB2胞外区的水解能使得ErbB2胞内酪氨酸激酶活化。最近的文献报道了ErbB2在核内的定位,但是对ErbB2入核的详尽分子机制知之甚少。这里,我们用分子克隆和细胞免疫组化等方法对ErbB2的胞内区定位机制进行了研究,通过Mapping在胞内区内部找到了一段核定位序列(NLS;Nuclear Localization Signal), 该NLS对于ErbB2胞内区的入核是必需的,因为直接荧光观察和间接免疫荧光都显示删除NLS的 ErbB2胞内区因此失去核定位的现象,而仅定位于细胞质。这个核定位序列KRRQQKIRKYTMRR (aa655-668)本身足够将其与GFP的融合蛋白带入细胞核,并且该序列内包含有三个碱性氨基酸残基簇。任何一个碱性氨基酸残基簇的突变都能够极大的影响融合蛋白的核定位。以上结果证明ErbB2 可以通过核定位序列(NLS)介导的机制进入细胞核,并且提示了一个可能的机制即ErbB2胞外区水解后,其胞内区进入细胞核,从而调控相关的基因。关于ErbB2入核的详细机制还需要进行深入的研究。

关键词：胞内区核定位序列 ErbB2

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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解剖科学进展 2004年第B8期10卷 47-48页

作者：杨玲刘厚奇刘善荣汤淑萍王凤玫第二军医大学组织胚胎学教研室，上海200433

目的：探讨LIF受体a亚基胞内区远膜端对HL-150细胞增殖分化的影响。方法：构建LIF受体a亚基胞内区远膜端(gp190CT3)真核表达载体，利用脂质体转染HL-60细胞，G418筛选阳性细胞株，免疫组化检测其表达。倒置显微镜观察野生型HL-60细胞及... 详细信息

目的：探讨LIF受体a亚基胞内区远膜端对HL-150细胞增殖分化的影响。方法：构建LIF受体a亚基胞内区远膜端(gp190CT3)真核表达载体，利用脂质体转染HL-60细胞，G418筛选阳性细胞株，免疫组化检测其表达。倒置显微镜观察野生型HL-60细胞及转染有gp190CT3的HL-60细胞及转染有空载体的HL-60细胞的生长状态。

关键词： HL-60细胞受体胞内区 CT 增殖分化免疫组化检测影响 LIF 脂质体转染真核表达载体

CD2胞内区结合蛋白的分子克隆及其功能研究

维普期刊数据库评论

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中国病理生理杂志 2000年第10期16卷 183-183页

作者：郑德先邵源刘彦信刘士廉中国医学科学院血液学研究所!天津300020 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学研究所!北京100005

CD2分子分布于胸腺细胞、所有的成熟T淋巴细胞和大部分天然杀伤细胞的表面,是T细胞粘附和信号分子,在细胞分化成熟、识别、粘附、激活和凋亡等方面具有重要作用.

关键词：胞内区分子功能 CD2 细胞转化

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人淋巴细胞CD2胞内区结合蛋白的分子克隆

中国医学科学院学报 1999年第2期21卷 158-158页

作者：邵源肖声李董刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

ＣＤ２分子，又称Ｅ受体，分布于胸腺细胞及所有成熟Ｔ淋巴细胞和大部分ＮＫ细胞的表面，是Ｔ淋巴细胞的粘附和信号分子，在Ｔ淋巴细胞分化、成熟、识别、粘附、激活和凋亡等方面都具有重要作用。ＣＤ２分子的胞内区含有能调节细胞识别... 详细信息

ＣＤ２分子，又称Ｅ受体，分布于胸腺细胞及所有成熟Ｔ淋巴细胞和大部分ＮＫ细胞的表面，是Ｔ淋巴细胞的粘附和信号分子，在Ｔ淋巴细胞分化、成熟、识别、粘附、激活和凋亡等方面都具有重要作用。ＣＤ２分子的胞内区含有能调节细胞识别作用、粘附作用和细胞信号传递作用的...

关键词： CD2 胞内区酵母双杂交系统淋巴细胞 Fte-1

白血病抑制因子受体细胞内区对HL-60细胞表达CD14和CD15的影响

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第5期20卷 659-663页

作者：冀凯宏汤淑萍刘善荣陆海英刘厚奇第二军医大学组胚教研室上海200433

观察白血病抑制因子 (LIF)受体gp190亚基完整的细胞内区和gp190胞内区C末端片段(190CT)对人白血病系HL 6 0表达CD14、CD15的影响 ,进一步了解LIF引发白血病细胞增殖抑制和分化的关系 .用基因重组技术将LIF另一亚基gp130的细胞内区换成gp... 详细信息

观察白血病抑制因子 (LIF)受体gp190亚基完整的细胞内区和gp190胞内区C末端片段(190CT)对人白血病系HL 6 0表达CD14、CD15的影响 ,进一步了解LIF引发白血病细胞增殖抑制和分化的关系 .用基因重组技术将LIF另一亚基gp130的细胞内区换成gp190的细胞内区 ,用PCR技术扩增gp190细胞内区C末端的一个多肽的编码序列 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190CT片段 ,并分别在HL 6 0细胞表达 .用免疫组化和流式细胞术检测分析在LIF的诱导下 ,HL 6 0细胞表达CD14、CD15的水平 .转染pcDNA130 /190的HL 6 0细胞 ,CD15表达量明显增高 ;转染pcDNA190CT的细胞 ,CD15的表达量降低 ;但 2组细胞的CD14表达量均较低且水平接近 .LIF可能诱导HL 6 0细胞向粒细胞而不向单核细胞分化 ,该效应是由gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190C末端片段可干扰LIFα受体介导的信号传导效应 .

关键词： HL-60细胞细胞内 CD15 表达量 CD14 转染白血病抑制因子受体胞内区 CDl4 末端