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双重套式PCR对不同取样胚胎性别鉴定灵敏度测试

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中国生物工程杂志 2005年第3期25卷 17-22页

作者：赵学明朱士恩侯云鹏周光斌中国农业大学动物科技学院北京100094

目的 :测定双重套式PCR微量扩增体系的灵敏度 ,为附植前遗传学诊断 (PGD)、家畜胚胎性别鉴定等提供技术保障。方法 :以桑椹胚卵裂球为模板进行扩增 ,建立昆明白小鼠特异的SRY ZFX双重套式PCR性别鉴定体系。按卵裂球数量的不同分为五组 ... 详细信息

目的 :测定双重套式PCR微量扩增体系的灵敏度 ,为附植前遗传学诊断 (PGD)、家畜胚胎性别鉴定等提供技术保障。方法 :以桑椹胚卵裂球为模板进行扩增 ,建立昆明白小鼠特异的SRY ZFX双重套式PCR性别鉴定体系。按卵裂球数量的不同分为五组 ,对应的卵裂球个数分别为 1、2、3、4、5及以上。根据有效扩增结果得出双重套式PCR的灵敏度。结果 :第 1组 (卵裂球个数为 1 ) ,有效检出率为 85 % ( 34 /40 ) ,污染率为 7 5 % ( 3 /40 ) ,漏检率为 7 .5 % ( 3 /40 )。随着卵裂球个数的增多 ,有效检出率逐渐升高 ,而污染率和漏检率则呈逐渐下降趋势。第 5组 (卵裂球达到 5及以上 ) ,有效检出率达到 1 0 0 % ,漏检率为 0。对于第 2、3、4、5组而言 ,有效检出率及漏检率各组间并无显著差异 (P >0 . 0 5 ) ;而第一组与其它各组间 ,有效检出率及漏检率存在显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :双重套式PCR可以有效扩增基因组DNA量约为 1 2pg的模板 ,且扩增片段为单拷贝片段。

关键词：套式PCR 检出率扩增片段卵裂球 PGD 遗传学诊断升高胚胎性别鉴定桑椹胚污染率

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牛冷冻试管胚胎性别鉴定的应用

动物学杂志 2002年第2期37卷 42-45页

作者：张锁链布赫仓明旭日干内蒙古大学实验动物研究中心呼和浩特010021

利用双引物PCR技术对优质良种牛体外受精的冷冻胚胎进行性别鉴定 ,并对分割后的半胚分别进行PCR扩增和染色体分析 ,两种方法的判定结果相吻合。在本实验条件下 ,利用减少PCR体系中细胞的数量来确立最低的模板DNA的检出量 ,2 细胞不能检... 详细信息

利用双引物PCR技术对优质良种牛体外受精的冷冻胚胎进行性别鉴定 ,并对分割后的半胚分别进行PCR扩增和染色体分析 ,两种方法的判定结果相吻合。在本实验条件下 ,利用减少PCR体系中细胞的数量来确立最低的模板DNA的检出量 ,2 细胞不能检测 ,4 细胞检出率为 6 2 .5 % ,8 细胞为 90 % ,1 6 细胞以上为 1 0 0 %。对 2 3枚经过性别鉴定后的胚胎进行移植 ,获得 5头纯种试管牛 ,产犊率为 2 1 7% ,与正常的胚胎移植结果 2 7 3% ( 3 1 1 )无显著差异 ,预测性比为 1 0 0 %符合。

关键词：牛体外受精 PCR 冷冻试管胚胎胚胎性别鉴定

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PCR法进行胚胎性别鉴定的研究进展

西北农业学报 2005年第2期14卷 5-8页

作者：王晗窦忠英西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心陕西杨凌712100

通过胚胎性别鉴定,可控制家畜后代性别比例,获得巨大经济效益。早期胚胎性别鉴定的方法有,核型分析法,H-Y抗原法,X-连接酶检测法和PCR扩增法等。PCR法因其简单、快速、准确等优点,成为目前比较理想的胚胎性别鉴定方法。笔者对性别决定... 详细信息

通过胚胎性别鉴定,可控制家畜后代性别比例,获得巨大经济效益。早期胚胎性别鉴定的方法有,核型分析法,H-Y抗原法,X-连接酶检测法和PCR扩增法等。PCR法因其简单、快速、准确等优点,成为目前比较理想的胚胎性别鉴定方法。笔者对性别决定基因、PCR法胚胎性别鉴定的几个关键环节进行了综述,并对其前景进行了展望。

关键词：胚胎性别鉴定 PCR法研究进展 PCR扩增法性别决定基因经济效益性别比例鉴定方法关键环节检测法连接酶分析法后代家畜抗原

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家畜胚胎性别鉴定的研究进展

中国畜牧杂志 2002年第4期38卷 48-50页

作者：陈从英黄路生江西农业大学江西省动物生物技术重点实验室南昌330045

家畜早期胚胎的性别鉴定是家畜胚胎移植的重要内容 ,对实现动物性别的人为控制具有重要意义。近年来随着性别鉴定技术的不断发展 ,出现了许多鉴定方法。本文对性别决定基因、动物性别决定机理和早期胚胎性别鉴定的方法作一简要综述。

关键词：家畜性别决定基因胚胎性别鉴定聚合酶链式反应分子机理

利用妊娠奶牛血液对不同发育阶段胚胎性别鉴定

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利用妊娠奶牛血液对不同发育阶段胚胎性别鉴定

作者：席继锋石河子大学

学位级别：硕士

性别控制在畜牧业生产中一直受到高度重视,性别鉴定又是性别控制的重要步骤和手段,主要有移植前结合胚胎移植对胚胎的性别鉴定和妊娠后对胎儿的性别鉴定。但在生产实践中奶牛胚胎移植的数量只占有很少的比例,主要还是以人工授精为主,因... 详细信息

性别控制在畜牧业生产中一直受到高度重视,性别鉴定又是性别控制的重要步骤和手段,主要有移植前结合胚胎移植对胚胎的性别鉴定和妊娠后对胎儿的性别鉴定。但在生产实践中奶牛胚胎移植的数量只占有很少的比例,主要还是以人工授精为主,因此,奶牛妊娠早期胚胎性别鉴定在奶牛性别控制中占有十分重要的地位。目前,奶牛妊娠后胚胎性别鉴定主要采用羊膜腔穿刺或绒毛膜取样,该方法为一种创伤性的方法,对母体尤其是对胎儿可能造成一定程度的损伤。从妊娠奶牛血浆中检测胎儿DNA的方法将使非创伤性的产前胚胎性别鉴定变成可能。本研究主要针对人工授精后的妊娠奶牛进行早期胚胎性别鉴定,探索奶牛早期胚胎性别鉴定无损伤的新方法,从而达到快速、无创伤、准确地鉴定早期胚胎性别,为奶牛性别控制奠定基础,从而提高奶牛生产的经济效益。而妊娠奶牛外周血的血浆中存在的胎儿游离DNA为进行超早期奶牛胚胎的性别诊断提供了理论依据。而且利用妊娠奶牛血液对胚胎进行性别鉴定可以避免或减少对母体及胎儿的损害,以保证早期胚胎的正常发育和生长。试验过程中还设计了牛牙釉蛋白(Amelogenin,AML)基因引物用于奶牛的性别鉴定,并将其与SRY基因特异性引物进行了比较,通过比较发现,用N-PCR扩增SRY基因引物比较烦琐,同时也容易污染,但是扩增效率较高;而PCR扩增AML基因引物操作方便。对于基因组DNA来说,PCR扩增AML基因引物效果较好,而对于本来就微量的血浆DNA来说,N-PCR扩增效果更好。故本试验采用N-PCR扩增SRY基因的方法对32头不同发育阶段的奶牛胚胎进行了性别鉴定。结果表明:不同妊娠期奶牛胚胎性别鉴定的平均准确率为80%,其中1月龄、2月龄、4月龄的性别鉴定准确率分别为60%、85.7%和92.3%。

关键词：妊娠奶牛胚胎性别鉴定 SRY基因

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胚胎性别鉴定实用配套技术的初步试验

黑龙江动物繁殖 1995年第4期3卷 11-13页

作者：刘云海朱化彬罗应荣孙淑芳宫云浩吴时友杨化玉迟吉义中国农业科学院畜牧研究所 100094 农业部动物检疫所胜利油田莱建奶牛场

胚胎性别鉴定PCR检测试剂盒和经切割取样性别鉴定后的胚胎冷冻保存,是达到胚胎性别鉴定实用化配套技术的主要关键技术。本试验结果证明:1.在实验室将Y-DNA特异片段引物、dNTP和Tag酶等反应物,按比例配合成试剂盒后,进行冷冻保存的试剂... 详细信息

胚胎性别鉴定PCR检测试剂盒和经切割取样性别鉴定后的胚胎冷冻保存,是达到胚胎性别鉴定实用化配套技术的主要关键技术。本试验结果证明:1.在实验室将Y-DNA特异片段引物、dNTP和Tag酶等反应物,按比例配合成试剂盒后,进行冷冻保存的试剂盒,可取得与常规PCR检测操作技术方法的相同效果和准确率;2.采用快速冷冻的方法,冷冻保存切割取样性别鉴定后的胚胎,可取得57.1％(4/7)的移植成功率。

关键词：胚胎性别鉴定实用配套技术切割取样胚胎冷冻保存快速冷冻试剂盒胜利油田试验结果塑料细管 PCR技术

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胚胎性别鉴定技术在奶牛快速繁育中的应用

胚胎性别鉴定技术在奶牛快速繁育中的应用

影响牛PCR胚胎性别鉴定雌性准确率的因素分析

中国畜牧兽医学会2011年学术年会

作者：李树静毕江华冯春涛刘潇余文莉杨金峰石家庄天泉良种奶牛有限公司北京安伯胚胎生物技术中心内蒙古赤峰市克什克腾旗农牧业局改良站

奶牛PCR胚胎性别鉴定技术因其鉴定准确性高,对胚胎伤害小,可在生产现场应用,技术发展成熟等优点越来越受到人们的关注。在同一繁育周期中,使用性别鉴定胚胎不仅对移植妊娠率无显著影响,而且可明显提高产母犊的数量。性别鉴定胚胎移植后... 详细信息

奶牛PCR胚胎性别鉴定技术因其鉴定准确性高,对胚胎伤害小,可在生产现场应用,技术发展成熟等优点越来越受到人们的关注。在同一繁育周期中,使用性别鉴定胚胎不仅对移植妊娠率无显著影响,而且可明显提高产母犊的数量。性别鉴定胚胎移植后可扩繁奶牛群体数量是常规胚胎的2倍,是性别控制胚胎的1.2倍以上,实现了奶牛快速繁育的目标,并具有可观的经济效益。胚胎取样细胞的数量影响性别鉴定产犊准确率,取样数大于等于5个细胞组的产母犊准确率高于取样1～4个细胞组(98.47%vs88.10%),差异极显著(P胚胎和鲜胚的移植妊娠率和切取5-8个细胞胚胎的移植妊娠率均无显著差别(42.80 vs48.54)(49.72vs54.55)(P>0.05)。

关键词：胚胎性别鉴定取样细胞数妊娠率快速繁育奶牛

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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草食家畜 2007年第1期 22-25页

作者：余文莉崔利艳李树静白音北京安伯胚胎生物技术中心北京100107 河北农业大学动物科技学院河北保定071001

本试验对影响牛性别鉴定雌性胚胎产犊准确率的因素进行了研究.结果表明：胚胎质量对产犊准确率有显著影响.取样大于等于5个细胞组的产母犊准确率高于取样1～4个细胞组,二者差异极显著.取样细胞活性对胚胎性别鉴定的准确率有显著影响.电... 详细信息

本试验对影响牛性别鉴定雌性胚胎产犊准确率的因素进行了研究.结果表明：胚胎质量对产犊准确率有显著影响.取样大于等于5个细胞组的产母犊准确率高于取样1～4个细胞组,二者差异极显著.取样细胞活性对胚胎性别鉴定的准确率有显著影响.电泳条带清晰程度对性别鉴定准确率有极显著影响,而胚胎发育阶段和取样时有无透明带对产犊牛准确率无显著影响.

关键词：牛胚胎性别鉴定准确率

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PCR技术在家畜胚胎性别鉴定中的应用

丽水学院学报 1995年第5期20卷 40-42页

作者：吕碧文丽水师专化学系

聚合酶链反应(Polymerose chain reaction,PCR)是近年来发展起来的一项分子生物学新技术。由于该方法能在细胞外迅速将特异的DNA片段放大百万倍左右,而且具有敏感、特异、快速和操作简单等优点,自1985年首次应用以来,已广泛地应用于遗... 详细信息

聚合酶链反应(Polymerose chain reaction,PCR)是近年来发展起来的一项分子生物学新技术。由于该方法能在细胞外迅速将特异的DNA片段放大百万倍左右,而且具有敏感、特异、快速和操作简单等优点,自1985年首次应用以来,已广泛地应用于遗传性疾病的产前诊断、传染病的快速诊断,分子肿瘤学、分子克隆、法医学、考古学,器官移殖配型、性别鉴定等研究领域,本文主要对PCR在家畜胚胎性别鉴定中的应用现状作一简要概述。

关键词：胚胎性别鉴定 PCR技术 SRY基因家畜 Y染色体 DNA片段应用现状 PCR方法产前诊断分子克隆