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为什么胚胎在-196℃条件下保存不会死亡——浅析胚胎冷冻保存的原理和方法

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中学生物教学 2013年第5期 33-34页

作者：胡文斌湖北省武汉市黄陂区第一中学

1问题提出人教版《现代生物科技专题》模块专题3“胚胎工程”P．77在描述胚胎移植的基本程序时提到，可以将胚胎“放入-196℃的液氮中保存”。学生和教师常常对此产生疑问：在-196℃的超低温条件下，胚胎细胞不会死亡吗？细胞内水分不... 详细信息

1问题提出人教版《现代生物科技专题》模块专题3“胚胎工程”P．77在描述胚胎移植的基本程序时提到，可以将胚胎“放入-196℃的液氮中保存”。学生和教师常常对此产生疑问：在-196℃的超低温条件下，胚胎细胞不会死亡吗？细胞内水分不会结冰吗？细胞内水分结冰后还能进行正常的新陈代谢吗？结冰发生反膨胀不会对细胞的结构造成损伤和破坏吗？要弄清以上问题，我们必须深入了解胚胎冷冻保存的原理和处理方法。下面就这些问题作简要分析。

关键词：胚胎冷冻保存原理死亡问题提出基本程序胚胎移植胚胎工程生物科技

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猪胚胎冷冻保存研究现状

国外畜牧学（猪与禽） 2004年第3期24卷 34-40页

作者：张德福覃矜 FrancoiseBerthelot 不详法国国立农业研究院

猪胚胎超低温冷冻对地方猪种的长期保存意义重大.长期以来,由于猪胚胎脂质含量较高等原因,进展一直较为缓慢(相对于牛、羊等动物).近年来,由于玻璃化冷冻技术(特别是OPS玻璃化冷冻技术)的突破,使胚胎超低温冷冻保存成功率大幅度提高.本... 详细信息

猪胚胎超低温冷冻对地方猪种的长期保存意义重大.长期以来,由于猪胚胎脂质含量较高等原因,进展一直较为缓慢(相对于牛、羊等动物).近年来,由于玻璃化冷冻技术(特别是OPS玻璃化冷冻技术)的突破,使胚胎超低温冷冻保存成功率大幅度提高.本文是法国国家农业科学院Francoise Berthelot教授对该领域的最新研究进展作的总结.

关键词：猪胚胎冷冻保存胚胎移植胚胎发育玻璃化冷冻慢速冷冻囊胚冷冻

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牛胚胎冷冻保存技术一步细管法

中国牛业科学 1990年第2期 87-89页

作者：铃木达行刘庆遂

一、冷冻保存技术的现状和课题 1982年,笔者们把甘油作为抗冻剂,冷冻牛胚胎,解冻后,移植给45头受体牛,每头移植一个胚胎,结果11头妊娠。这是根据1978年Bileon和Moore报道的方法(甘油6步添加、除去法)。添加甘油是以0.18、0.33、0.57、0... 详细信息

一、冷冻保存技术的现状和课题 1982年,笔者们把甘油作为抗冻剂,冷冻牛胚胎,解冻后,移植给45头受体牛,每头移植一个胚胎,结果11头妊娠。这是根据1978年Bileon和Moore报道的方法(甘油6步添加、除去法)。添加甘油是以0.18、0.33、0.57、0.88、1.0摩尔,由低浓度向高浓度分5步进行。除去甘油则以相反的顺序即:1.0、0.88、0.57、0.33、0.

关键词：胚胎冷冻保存甘油溶液冷冻胚胎摩尔浓度抗冻剂冷冻保存技术受体牛存活性小鼠胚胎保存液

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哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

河南畜牧兽医 2004年第3期25卷 9-10页

作者：丁志丽桑林华王杏龙扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分.1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成... 详细信息

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分.1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功.此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究.然而,在胚胎冷冻和解冻过程中都存在许多会使胚胎受到损伤的因素,如:抗冻保护剂的毒性,冷冻损伤,细胞内冰晶的形成,破裂损伤,渗透压引起的膨胀.因此,使用不同的冷冻和解冻法应避免或减少胚胎受到损伤,以提高胚胎解冻后的存活率.

关键词：哺乳动物胚胎冷冻保存抗冻保护剂冷冻溶液缓慢冷冻法快速冷冻法玻璃化冷冻法

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哺乳动物卵母细胞与胚胎冷冻保存的研究进展

国外畜牧学（猪与禽） 2006年第6期26卷 26-30页

作者：张德福吴华丽刘东王邵凯王少兵海市农业科学院畜牧兽医研究所南京农业大学动物科技学院南京252100

1 卵母细胞与胚胎冷冻保存的意义随着胚胎工程技术和低温生物学的不断进步,研究人员对哺乳动物的生殖细胞和组织的冷冻保存作了大量的研究.

关键词：胚胎冷冻保存卵母细胞哺乳动物胚胎工程技术胚胎生物技术精液冷冻保存濒危野生动物低温生物学

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牛胚胎冷冻保存技术一步细管法(续)

中国牛业科学 1990年第3期 88-90页

作者：铃木行达刘庆遂

三、一步细管的制作准备把回收的牛胚胎集中在含20%牛血清的修正PBS液内,洗2—3遍,然后,放到盛有10%甘油加PBS的小型培养皿里,用一步浸泡(铃木和下平The riogenslogy投稿中)。制作10%甘油加PBS时,在小试管里准备PBS9ml,再加1ml甘油。10... 详细信息

三、一步细管的制作准备把回收的牛胚胎集中在含20%牛血清的修正PBS液内,洗2—3遍,然后,放到盛有10%甘油加PBS的小型培养皿里,用一步浸泡(铃木和下平The riogenslogy投稿中)。制作10%甘油加PBS时,在小试管里准备PBS9ml,再加1ml甘油。10%甘油加PBS液用0.22mm滤器过滤到2枚小型培养皿里,然后,在小型培养皿盖上写上No.1、2。

关键词：胚胎冷冻保存下平铃木卵裂球冷冻胚胎胚胎移植液层蔗糖溶液层空间保存液

改良的胚胎冷冻保存法增加解冻后的存活率同时提高种植率

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世界核心医学期刊文摘（妇产科学分册） 2006年第3期2卷 36-37页

作者： Kattera S. 朱磊 Centre for Reproductive Medicine Gleneagles IVF Centre Gleneagles Hospital 6A Napier Road #04-38 Annexe Block Singapore 258500 Singapore Dr.

Objective: To achieve maximum post-thaw survival of frozen embryos. Design: Historical controlled study. Setting: Hospital-based fertility center. Patient(s): One hundred forty-five patients whose embryos were frozen and thawed according to the standard method, and 56 patients whose embryos were frozen and thawed according to a modified method. Intervention( s): Modifications were made to the various steps of cryopreservation: freezing and thawing solutions, loading of embryos into the straws, and warming rates. Main Outcome Measure(s): Post-thaw survival, implantation, and pregnancy rates. Result(s): With the modified method, 138 (93%) of the 149 embryos thawed for 56 patients survived freezing, and 79.8%had all their blastomeres intact, which is almost double the result obtained (41.8%) for patients whose embryos were thawed with the standard method. The implantation and pregnancy rates were also significantly higher with the modified method compared with the standard method. Conclusion(s) : Greater post-thaw embryo survival was achieved, with a concomitant increase in implantation and pregnancy rates, by modifying the various steps in the standard cryopreservation methodology. This has important implications in IVF practice.

关键词：种植率胚胎冷冻保存冷冻胚胎卵裂细胞改良方法生殖中心冷冻液升温速度

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猪胚胎冷冻保存的研究概况

黑龙江动物繁殖 2007年第2期15卷 12-14页

作者：徐妲金一延边大学农学院吉林龙井133400

我国地方猪品种丰富,这些地方品种对我国养猪业的发展起到了很大的作用,但由于外来猪和地方猪的杂交改良,造成原有品种数量的锐减和质量下降,保护我国珍贵的种质资源,对我国猪种种质资源的可持续性利用意义重大。因此,有必要建立猪“胚... 详细信息

我国地方猪品种丰富,这些地方品种对我国养猪业的发展起到了很大的作用,但由于外来猪和地方猪的杂交改良,造成原有品种数量的锐减和质量下降,保护我国珍贵的种质资源,对我国猪种种质资源的可持续性利用意义重大。因此,有必要建立猪“胚胎库”。猪的胚胎冷冻保存技术,相对其它动物来说进展一直较为缓慢,直到1989年才获得成功(-35℃),至1990年常规液氮冷冻保存(-196℃)也相继成功。

关键词：胚胎冷冻保存猪品种囊胚率玻璃化冷冻品种数量桑椹胚细胞松弛素液氮冷冻冷冻液冷冻保护剂

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绵羊胚胎冷冻保存及冻胚移植试验

畜牧与饲料科学 1989年第1期18卷 27-28页

作者：达来栾成祥王秀梅张海鹰内蒙古畜牧科学院

我们于1988年10至11月份,在本院进行了绵羊胚胎冷冻保存及冻胚移植试验。使用国产FSH和LH对5只母羊做了超数排卵处理,共排卵82枚(以黄体数计),平均每只排卵16.4±3.6枚,采用手术法收集胚胎38枚,采卵率为46.3％。其中可利用胚胎32枚,占... 详细信息

我们于1988年10至11月份,在本院进行了绵羊胚胎冷冻保存及冻胚移植试验。使用国产FSH和LH对5只母羊做了超数排卵处理,共排卵82枚(以黄体数计),平均每只排卵16.4±3.6枚,采用手术法收集胚胎38枚,采卵率为46.3％。其中可利用胚胎32枚,占回收胚胎数的84.2％。超排母羊头均采可用胚胎6.4枚。使用日本产计算机控制的胚胎冷冻装置冷冻胚胎22枚。解冻后存活胚胎12枚,存活率为54.5％。将10枚冻胚手术移植给5只受体母羊。现有2只受体母羊返情,情期不返回率为60％。

关键词：冻胚移植胚胎冷冻保存冷冻胚胎胚胎数手术移植采卵超数排卵处理子宫角计算机控制返情