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适用于蛋白质双向电泳的棉花胚性培养物蛋白质提取技术

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棉花学报 2009年第1期21卷 3-9页

作者：曹景林朱龙付谭家福邓锋林李允静郝娟徐士成张献龙华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室武汉430070

以陆地棉品种Coker 201为材料,对与甲醇/醋酸铵丙酮沉淀结合的酚抽提法和裂解液配方进行了优化,建立了适用于蛋白质双向电泳体系的棉花胚性培养物蛋白质样品制备技术。对胚性培养物,通过添加PVPP研磨和丙酮、TCA/丙酮、甲醇/醋酸铵等有... 详细信息

以陆地棉品种Coker 201为材料,对与甲醇/醋酸铵丙酮沉淀结合的酚抽提法和裂解液配方进行了优化,建立了适用于蛋白质双向电泳体系的棉花胚性培养物蛋白质样品制备技术。对胚性培养物,通过添加PVPP研磨和丙酮、TCA/丙酮、甲醇/醋酸铵等有机溶剂的系列洗涤,然后再进行酚抽提,蛋白质质量得到显著改善,获得的2-DE图谱质量高、可分辨的蛋白质点数多。比较分析3种裂解液对蛋白质的溶解效果发现,在裂解液中混合采用7 mol.L-1尿素2、mol.L-1硫脲以及4%CHAPS是最有效的配方。

关键词：棉花胚性培养物蛋白质双向电泳

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龙眼胚性培养物高分辨率蛋白质双向电泳技术

福建农林大学学报（自然科学版） 2008年第1期37卷 37-41页

作者：赖呈纯赖钟雄何园方智振欧阳建树福建农林大学园艺植物生物工程研究所；亚热带果树研究所福建福州350002

试验以龙眼胚性培养物为材料,通过对小型垂直板双向电泳和固相pH梯度凝胶双向电泳比较分析,进行龙眼胚性培养物高分辨率蛋白质双向电泳技术方法的研究.结果表明,采用固相pH梯度凝胶双向电泳可以极大地提高分辨率,相同龙眼胚性培养物的... 详细信息

试验以龙眼胚性培养物为材料,通过对小型垂直板双向电泳和固相pH梯度凝胶双向电泳比较分析,进行龙眼胚性培养物高分辨率蛋白质双向电泳技术方法的研究.结果表明,采用固相pH梯度凝胶双向电泳可以极大地提高分辨率,相同龙眼胚性培养物的蛋白样品染色后所得的蛋白质谱点数从334左右增加到810左右;由于龙眼胚性培养物的蛋白等电点集中在3.5-7.0之间,采用13 cm的IPG胶条时,以pH 4-7的IPG胶条分离蛋白的效果佳.

关键词：龙眼胚性培养物蛋白质双向电泳高分辨率蛋白质组学

龙眼胚性培养物蛋白质水平双向电泳技术体系的建立

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福建农林大学学报（自然科学版） 2003年第2期32卷 196-200页

作者：王凤华赖钟雄郭志雄车建美郑金贵吕柳新福建农林大学亚热带果树研究所福建福州350002 福建农林大学园艺学院福建福州350002 福建农林大学作物科学学院福建福州350002

以龙眼胚性培养物为材料,使用Pharmacia多功能水平电泳仪(Multiphor ),采用滤纸半干电泳与梯度凝胶技术,建立了适合于龙眼胚性培养物的蛋白质水平双向电泳技术体系.使用该技术有望对龙眼体细胞胚胎发生过程中特异蛋白进行研究.

关键词：龙眼胚性培养物蛋白质水平双向电泳技术体系体细胞胚胎发生滤纸半干电泳梯度凝胶技术

荔枝体细胞胚性培养物的DNA提取方法和RAPD分析

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热带作物学报 2006年第4期27卷 56-59页

作者：黄素华赖钟雄福建农林大学亚热带果树研究所福州350002 福建省龙岩学院生物科学与工程系福建龙岩364000

采用补加PVP的SDS法,提取得到高质量的荔枝(Litchi chinensis Sonn)胚性培养物基因组DNA。对荔枝胚性培养物的RAPD分析结果表明:荔枝胚性和非胚性愈伤组织、玻璃化胚和白色胚、不同染色体数目的细胞系类型之间在DNA分子标记上存在差异,... 详细信息

采用补加PVP的SDS法,提取得到高质量的荔枝(Litchi chinensis Sonn)胚性培养物基因组DNA。对荔枝胚性培养物的RAPD分析结果表明:荔枝胚性和非胚性愈伤组织、玻璃化胚和白色胚、不同染色体数目的细胞系类型之间在DNA分子标记上存在差异,证实荔枝胚性愈伤组织继代及再分化过程中存在遗传物质的变异。

关键词：荔枝胚性培养物体胚发生 DNA提取 RAPD 遗传变异

马尾松胚性培养物增殖与成熟DNA甲基化多态性研究

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马尾松胚性培养物增殖与成熟DNA甲基化多态性研究

作者：王茜中南林业科技大学

学位级别：硕士

马尾松体细胞胚胎发生体系虽已经建立,但仍存在胚性培养物胚性难以保持、成熟分化率低等诸多问题。本试验针对马尾松胚性培养物在增殖过程中出现的生长衰弱现象,通过复生调控处理使胚性培养物重获增殖能力,胚性细胞生长状态的转变与其... 详细信息

马尾松体细胞胚胎发生体系虽已经建立,但仍存在胚性培养物胚性难以保持、成熟分化率低等诸多问题。本试验针对马尾松胚性培养物在增殖过程中出现的生长衰弱现象,通过复生调控处理使胚性培养物重获增殖能力,胚性细胞生长状态的转变与其基因表达的表观遗传调控密切相关,DNA甲基化作为表观遗传调控的重要方式可能参与了马尾松体细胞胚胎发生的各个阶段。本论文利用MSAP技术检测马尾松胚性培养物增殖和成熟分化过程中的DNA甲基化多样性变异模式,以复生调控过程的胚性培养物增殖初期、增殖旺盛期、衰亡期、复生调控期及稳定增殖期这5个时期和ABA处理后不同时间(0h.0.5h.6h.20h.2d.3d.5d.7d.15d.35d和50d)的马尾松胚性培养物为实验材料,研究增殖期的5个时期和分化期的11个时期的DNA甲基化水平及其变异模式,结果表明,马尾松胚性培养物在增殖和成熟过程中都存在着DNA甲基化水平及模式的变化,这为进一步揭示马尾松体胚发生过程中的分子机制提供理论依据。主要研究结果如下：1.在胚性培养物复生调控的5个时期中,DNA甲基化变异模式表现丰富。总甲基化率最高的是复生调控期;全甲基化水平最高的是复生调控期;半甲基化率最高的是增殖初期和增殖旺盛期。而复生调控期和稳定增殖期的处理1比处理2在总甲基化水平略高。对复生调控两相邻时期的DNA胞嘧啶甲基化变异模式进行分析,结果发现衰亡期至复生调控期超甲基化模式变化最大,发生的超甲基化事件最多;而复生调控期至稳定增殖期的去甲基化事件发生的最多。两个处理间不同时期的超甲基化变异模式与去甲基化变异模式均有所差异。2.成熟分化期的胚性培养物的体胚发生时间与其总甲基化率负对数有显著性的相关性,不同ABA处理时间,其DNA甲基化变异模式发生变化。经ABA处理后不同时间(3d-50d)每个时期总甲基化率的负对数值与处理天数之间的拟合函数为y=-3.8E-6x4+0.0004x3-0.0143x2+0.1901x+0.8321,R2=0.9545,接近1。利用MSAP技术结马尾松胚性培养物经ABA处理后的不同时间(Oh、0.5h、6h、20h、2d、3d、5d、7d、15d、35d和50d)的DNA甲基化的水平及变化模式进行检测,发现各时期总甲基化水平最高的是ABA处理后的50d,最低的是ABA处理后的2d;全甲基化率最高的是ABA处理后的3d,最低的是ABA处理后的15d;半甲基化率最高的是ABA处理后的50d,最低的是ABA处理后的2d。对每两个相邻时期的DNA甲基化模式变化进行分析得出：在经ABA诱导后的35d-50d发生的超甲基化事件最多,0.5h-6h发生的超甲基化事件最少;去甲基化事件发生最多的时期是3d-5d,发生最少的是0h-0.5h。

关键词：马尾松胚性培养物 DNA甲基化 MSAP

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芒果细胞超低温保存存活机理

植物生理学报 2016年第10期52卷 1474-1480页

作者：李运合李玉生张金梅陈晓玲赵艳华吴永杰中国热带农业科学院南亚热带作物研究所广东湛江524091 农业部热带果树生物学重点实验室广东湛江524091 河北农林科学院昌黎果树研究所河北昌黎066600 中国农业科学院作物科学研究所北京100081

超低温保存是一个复杂的过程,除了保存技术本身外,一些因素如材料的选择及细胞生理状态的调控等也直接影响着保存后细胞的存活与再生。本文以芒果子叶诱导的胚性培养物和愈伤组织细胞为试材,采用组织学观察、流式细胞分析和冷冻切片荧... 详细信息

超低温保存是一个复杂的过程,除了保存技术本身外,一些因素如材料的选择及细胞生理状态的调控等也直接影响着保存后细胞的存活与再生。本文以芒果子叶诱导的胚性培养物和愈伤组织细胞为试材,采用组织学观察、流式细胞分析和冷冻切片荧光观察等手段比较了其在超低温保存过程中的存活特性。结果表明胚性培养物细胞与愈伤组织细胞相比具有明显不同的细胞学特性,从而导致其在超低温保存过程中具有很强的耐脱水和低温能力,脱水处理30 min及超低温保存后存活率分别为96.7%和94.7%,而愈伤组织存活率则为0。利用二乙酸荧光素(FDA)荧光染色法和冷冻切片技术,观察到超低温保存后胚性培养物内存活细胞的分布。本研究结果证明试材细胞的生理状态对超低温保存的成功具有重要的影响,对未来如何更准确地评价超低温保存的效果和确定最佳的超低温保存程序也具有重要意义。

关键词：芒果超低温保存愈伤组织胚性培养物