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胎猪胰岛源胰腺干细胞分离培养与诱导分化试验

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中国农业科学 2007年第3期40卷 582-587页

作者：冯若鹏张慧茹窦忠英西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西省分中心西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西省分中心杨凌712100

目的分离培养胎猪胰腺干细胞对其进行功能检测。方法用先悬浮后贴壁的方法从胎猪胰岛获得胰腺干细胞,用免疫组化方法鉴定该细胞,以MTT法测定其不同代次的生长活性,诱导该细胞成为胰腺内分泌细胞并检测其功能。结果分离得到的细胞不表达n... 详细信息

目的分离培养胎猪胰腺干细胞对其进行功能检测。方法用先悬浮后贴壁的方法从胎猪胰岛获得胰腺干细胞,用免疫组化方法鉴定该细胞,以MTT法测定其不同代次的生长活性,诱导该细胞成为胰腺内分泌细胞并检测其功能。结果分离得到的细胞不表达nestin,而表达导管上皮细胞标志ck-19、平滑肌标志α-actin,其在体外的生长行为有类似胚胎干细胞样生长形态,细胞体外增殖活力很强,现已传至18代,细胞经诱导后分化为分泌胰岛素的胰腺内分泌细胞,并且伴随着细胞超微结构的改变。结论通过本方法可以分离到胎猪胰腺干/祖细胞,经诱导分化可形成有功能的胰岛样细胞团并释放胰岛素。

关键词：胎猪胰岛胰腺干细胞培养诱导分化

胎猪胰腺干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌细胞及其移植治疗裸鼠糖尿病的研究

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农业生物技术学报 2011年第1期19卷 9-17页

作者：楚元奎曹晖王赟张翊华窦忠英西北农林科技大学国家干细胞研究中心陕西省分中心

缺乏供体细胞制约着胰岛替代疗法在Ⅰ型糖尿病治疗过程中的应用。本研究对实验室分离保存的胎猪胰腺干细胞(fetal porcine pancreatic stem cells,FPPSCs),体外诱导分化为胰岛素分泌细胞以及移植治疗裸鼠糖尿病的能力进行了深入研究,以... 详细信息

缺乏供体细胞制约着胰岛替代疗法在Ⅰ型糖尿病治疗过程中的应用。本研究对实验室分离保存的胎猪胰腺干细胞(fetal porcine pancreatic stem cells,FPPSCs),体外诱导分化为胰岛素分泌细胞以及移植治疗裸鼠糖尿病的能力进行了深入研究,以探讨该细胞株作为异种供体细胞的潜力。研究结果表明,该细胞体外增殖活力旺盛,其形态及表面抗原表达特征与间充质干细胞极其相似,除表达胰腺干细胞相关标志外,FPPSCs还表达一些胚胎干细胞的相关标志。采用无血清诱导方案诱导2周后,FPPSCs形成DTZ染色阳性的胰岛样细胞团(islet-like cell cluster,ICC),该细胞团表达胰岛素、Glut-2等胰岛素分泌细胞功能相关的蛋白。RT-PCR结果显示,诱导后,胰腺干细胞相关标志表达减弱,而成熟胰岛素分泌细胞相关标志表达增强。葡萄糖刺激实验结果显示,诱导后,FPPSCs合成、分泌胰岛素和C-肽的能力显著增强(P<0.05)。将诱导2周后的细胞移植到糖尿病裸鼠腹腔内,可缓解其高血糖状况。结果提示,FPPSCs具有间充质干细胞的特性,体外能够诱导分化为胰岛素分泌细胞,并具有改善糖尿病裸鼠高血糖症状的能力,有望为进一步研究异种胰腺干细胞移植治疗糖尿病提供种子细胞。

关键词：胎猪胰腺干细胞诱导分化细胞移植糖尿病

Conophylline联合Betacellulin-δ4对胎猪导管源胰腺干细胞体外诱导分化的促进作用

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世界华人消化杂志 2011年第20期19卷 2109-2115页

作者：黄跃南郭欣哈尔滨医科大学附属二院普外三科黑龙江省哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学附属一院普外五科黑龙江省哈尔滨市150001

目的:研究Conophylline(CnP)联合Betacellulin-δ4(BTCδ4)对胎猪导管源胰腺干细胞的体外诱导分化作用.方法:在培养基中加入CnP、BTCδ4等诱导因子诱导胎猪导管源胰腺干细胞分化,台盼蓝检测CnP对胰岛样细胞团(islet-like cell cluster,I... 详细信息

目的:研究Conophylline(CnP)联合Betacellulin-δ4(BTCδ4)对胎猪导管源胰腺干细胞的体外诱导分化作用.方法:在培养基中加入CnP、BTCδ4等诱导因子诱导胎猪导管源胰腺干细胞分化,台盼蓝检测CnP对胰岛样细胞团(islet-like cell cluster,ICC)的毒性,ICC行ELISA、免疫组织化学检测,逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测胰岛素基因、PDX-1等在未诱导、诱导细胞中的表达,葡萄糖刺激实验检测ICC分泌胰岛素的功能.结果:用0.1g/LCnP诱导ICC不显示明显的细胞毒性.诱导培养4-6wk,ELISA和免疫组织化学显示CnP联合BTCδ4提高了胰岛素分泌细胞量和胰岛素含量;RT-PCR显示提高了PDX-1,neuroD/Beta2,胰岛素等在ICC中的表达.葡萄糖刺激实验结果显示,诱导后,ICC合成、分泌胰岛素的能力显著增强(P胎猪导管源胰腺干细胞分化为胰岛素分泌细胞,分化细胞表达β细胞表面标志并能分泌胰岛素.

关键词：胎猪胰腺干细胞 Conophylline Betacellulin-δ4 胰岛素

胎猪胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2012年第3期46卷 222-226页

作者：李云龙郭欣杨晓波黄跃南哈尔滨医科大学附属第二医院普外科黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第一医院普外科黑龙江哈尔滨150001

目的建立胎猪胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定的方法。方法采用胰酶和胶原酶Ⅳ、P消化法分离获得细胞,在含10%胎牛血清的M199培养基中行导管上皮细胞原代培养,而后将血清浓度提高到20%以上继续培养,3～4天后至每个小圆细胞... 详细信息

目的建立胎猪胰腺导管干细胞的体外分离、纯化、培养及鉴定的方法。方法采用胰酶和胶原酶Ⅳ、P消化法分离获得细胞,在含10%胎牛血清的M199培养基中行导管上皮细胞原代培养,而后将血清浓度提高到20%以上继续培养,3～4天后至每个小圆细胞形成一个集落;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)的方法对获得的细胞检测CK19、Pdx-1、NeuroD/Beta2、insulin、Glut-2等基因的表达。结果成功分离获得胎猪胰腺导管细胞,并证实该细胞为胎猪导管源胰腺干细胞。经检测,细胞表达CK19,Pdx-1,Glut-2,NeuroD/Beta2等胰腺干细胞的标志,而insulin、Neurogenin3阴性表达。结论该方法可较好地分离纯化出胎猪胰腺导管细胞,经鉴定获得细胞具有胰腺干细胞的特性。

关键词：胎猪导管细胞干细胞胰岛素

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胎猪胰腺干细胞的分离与鉴定

农业生物技术学报 2007年第4期15卷 622-627页

作者：王赟赵婷乔海杨春荣张翊华王华岩窦忠英西北农林科技大学国家干细胞生物技术中心陕西分中心西北农林科技大学国家干细胞生物技术中心陕西分中心杨凌712100

从胎猪胰腺分离得到1株细胞,该细胞经免疫组化检测表达胰肠同源域因子1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)、葡萄糖转运子2(glucose transporter-2,GLUT-2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、胰高血糖素(glucagon)、生长抑素(somatostatin)、胰多肽(pancreatic polypeptide)和弱表达巢蛋白(nestin),目前细胞已传至58代。其在体外生长类似神经样细胞生长形态,经诱导后可分化为具有三维立体结构的类胰岛细胞团(islet-like cell clusters,ICCs)。成团后细胞强表达胰岛素(insulin)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)等标志物,放免测定显示诱导成团后的细胞胰岛素分泌量增加,最高达30.3±7.5μIU/mL,显著高于未经诱导的细胞(6.3±1.2μIU/mL,P胎猪胰腺干细胞,经诱导分化可形成有功能的胰岛样细胞团并释放胰岛素,有望为进一步研究异种胰腺干细胞移植治疗糖尿病提供材料。

关键词：胎猪胰岛胰腺干细胞糖尿病

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低钙胁迫对胎猪脂质代谢的影响

畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3675-3684页

作者：张卓炜艾强云何洋张辉李英郭剑英唐兆新华南农业大学广州510642 云南农业大学昆明650500

猪群的钙磷代谢紊乱是影响猪场经济效益的长久问题之一。妊娠母猪缺钙易致猪群的生产性能下降,其仔猪出生后的育肥效果又相对较差,进一步造成生产利润的丢失。本文就妊娠母猪发生钙流失对胎猪脂质代谢方面的影响进行了深入地研究。试验... 详细信息

猪群的钙磷代谢紊乱是影响猪场经济效益的长久问题之一。妊娠母猪缺钙易致猪群的生产性能下降,其仔猪出生后的育肥效果又相对较差,进一步造成生产利润的丢失。本文就妊娠母猪发生钙流失对胎猪脂质代谢方面的影响进行了深入地研究。试验将20头健康的7~8胎龄母猪随机分为对照组(control,CON)和低钙组(low-calcium,LCa),每组10头作生物学重复。按不同钙磷比配置日粮,于母猪妊娠第85天连续饲喂至第114天分娩。仔猪出生后立即采集其血液和肝肾组织样本。运用代谢组学技术分析仔猪代谢通路的变化;生化仪检测血清中的脂类物质;ELISA方法检测脂质代谢指标;荧光定量检测脂质代谢相关基因的表达。结果表明:低钙胁迫主要影响了胎猪的甘油磷脂代谢通路,同时对脂肪酸代谢及棕榈酸的合成等也造成了一定的干扰;仔猪血清中脂类物质的含量无明显变化(P>0.05);低钙胁迫显著影响了胎猪体内FAS、Visfatin以及Resistin的分泌(P猪肝中SCD、LDLR,肾中SCD、FABP 4、HSD 17 B 12以及ABCC 4基因的mRNA表达量显著降低(P猪缺钙可致使胎猪脂质代谢受影响,可能会不利于其生长发育。

关键词：钙胎猪脂质代谢

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胎猪胰腺干细胞分离与克隆

胎猪胰腺干细胞分离与克隆

作者：冯若鹏西北农林科技大学

学位级别：硕士

糖尿病是危害人类健康的重大疾病之一,而传统的药物及胰岛素替代疗法却不能从根本上医治该病。近年来,随着免疫抑制剂的改进及细胞移植技术的不断成熟,移植胰岛细胞已成为治愈Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的有效途径。但是,由于每个临床胰岛移... 详细信息

糖尿病是危害人类健康的重大疾病之一,而传统的药物及胰岛素替代疗法却不能从根本上医治该病。近年来,随着免疫抑制剂的改进及细胞移植技术的不断成熟,移植胰岛细胞已成为治愈Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的有效途径。但是,由于每个临床胰岛移植受体通常需要2～4个新鲜尸体胰腺,胰岛供体短缺的矛盾亦更为突出,制约了利用胰岛细胞治疗糖尿病技术的应用。为进行胰岛移植,人们将移植的替代品转向异种动物-猪。猪繁殖性能强,组织来源充足,胰岛素结构和生物活性类似于人胰岛素,血糖调定点同人接近,猪胰腺细胞可在人血清中生存对人体无害,因此,胎猪胰腺干细胞可作为最佳的异种动物胰腺干细胞的供体细胞,对胎猪胰腺干细胞的研究是糖尿病治疗的新希望。本试验从胎猪胰腺不同部位分离得到干细胞并进行培养,生物学性能测定及诱导分化多能性等方面进行研究,为胎猪胰腺干细胞的临床应用提供基础资料。 1在本试验室先前的研究基础上,筛选出适合胎猪胰腺导管源胰腺干细胞贴壁、培养的基础培养基为M199,生长所需的细胞外基质为明胶。以分次消化分次贴壁的方法纯化出胎猪胰腺导管源胰腺干细胞,该细胞表达CK-19、PDX-1阳性。研究中还发现部分原代胰腺干细胞表达胚胎干细胞的标志OCT-4,但这些细胞在传代培养过程中消失。分离纯化的胎猪胰腺导管源胰腺干细胞体外培养条件下增殖能力很强,现已传至18代。经含Nic、HGF的培养基诱导后可分化为胰腺内分泌细胞并分泌胰岛素,胰岛素释放量在第12～15d达到最大,证明诱导细胞在12-15d成熟程度达到最高,增长诱导时间只会加剧分化的内分泌细胞死亡。胎猪胰腺导管源胰腺干细胞经诱导后未能分化为心肌、神经、成骨细胞,说明该细胞不具有横向分化的多潜能性或采用的诱导方法不合适。 2采用Zulewski等的方法从胎猪胰腺分离得到胎猪胰岛源胰腺干细胞,该细胞呈长梭形或成纤维样,生长时有聚集现象发生,可形成胚胎干细胞样集落。免疫组化鉴定该细胞表达CK-19、PDX-1、α-actin而不表达nestin。流式细胞仪检测细胞表面标志发现该细胞表达骨髓间充质干细胞的标志CD29、CD44、CD45、CD166说明该细胞可能具有和骨髓间充质细胞相类似的生物学特征。该细胞在体外具有较强的增殖能力第5、10、15代生长趋势相同。该细胞经诱导后可分化为胰腺内分泌细胞并释放胰岛素,不同于导管源胰腺干细胞的是该细胞在诱导第6d即可达到较好的分化效果。向成骨细胞、神经细胞分化试验的成功进一步说明本试验中分离到的胎猪胰岛源胰腺干细胞是一种存在于胰腺当中具有横向分化潜能的亚全能干细胞。

关键词：胎猪胰腺干细胞分离培养诱导分化

母猪妊娠后期日粮能量、蛋白质及氨基酸水平对乳腺发育及胎猪生长的影响

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中国畜牧兽医 2017年第9期44卷 2656-2661页

作者：张军肖俊峰温庆琪柒启恩杨焕胜福建傲农生物科技集团股份有限公司厦门361000 江西农业大学动物科技学院南昌330045 湖南师范大学生命科学学院动物营养与人体健康实验室长沙410081

母猪妊娠后期是母猪乳腺及胎猪快速发育的重要时期,为处于这一时期的母猪配制营养水平适宜的日粮对提高母猪繁殖效率尤为重要。妊娠后期母猪乳腺发育及胎猪的生长对能量、蛋白质及氨基酸的需求不同,如何给妊娠母猪提供合理的营养,在满... 详细信息

母猪妊娠后期是母猪乳腺及胎猪快速发育的重要时期,为处于这一时期的母猪配制营养水平适宜的日粮对提高母猪繁殖效率尤为重要。妊娠后期母猪乳腺发育及胎猪的生长对能量、蛋白质及氨基酸的需求不同,如何给妊娠母猪提供合理的营养,在满足胎猪生长发育的同时满足乳腺发育的需要研究还比较少。作者主要介绍了母猪妊娠后期日粮中的能量、蛋白质及氨基酸水平对乳腺发育及胎猪生长的影响,同时提出母猪妊娠后期能量、蛋白质及氨基酸的需要量及合理比例,以期为养猪生产者提供参考。

关键词：母猪妊娠后期乳腺胎猪能量蛋白质氨基酸

妊娠期日粮蛋白限饲对胎猪及胎盘抗氧化能力的影响

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畜牧与兽医 2011年第2期43卷 34-37页

作者：陈军王金泉贾逸敏尚月丽黄瑞华赵茹茜南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095 江苏农林职业技术学院江苏句容212400 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

本研究旨在探索妊娠期饲喂不同蛋白水平日粮对胎盘抗氧化酶的活性和胎猪生长的影响。本试验以小梅山猪为动物模型,将20头纯种初产梅山母猪随机分为高蛋白组和低蛋白组。高蛋白组母猪在妊娠期给予粗蛋白含量为12%的日粮,低蛋白组给予粗... 详细信息

本研究旨在探索妊娠期饲喂不同蛋白水平日粮对胎盘抗氧化酶的活性和胎猪生长的影响。本试验以小梅山猪为动物模型,将20头纯种初产梅山母猪随机分为高蛋白组和低蛋白组。高蛋白组母猪在妊娠期给予粗蛋白含量为12%的日粮,低蛋白组给予粗蛋白含量为6%的日粮。在70胚龄时屠宰母猪,称量胎猪重和胎盘重,测定胎盘抗氧化主要指标:超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT);在出生时称量新生仔猪初生重。结果显示:低蛋白组胎猪重显著低于高蛋白组(P胎盘重差异不显著;胎盘T-AOC低蛋白组极显著低于高蛋白组(P胎盘蛋白含量和SOD、MDA、CAT含量两组差异不显著(P>0.05);新生仔猪初生重低蛋白组显著低于高蛋白组(P猪饲喂低蛋白日粮降低了胎盘抗氧化能力,导致胎猪重和新生仔猪重降低。

关键词：蛋白限饲胎盘抗氧化母猪胎猪