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胎儿骨髓基质细胞与细胞因子支持人脐血单个核细胞体外扩增的研究

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中国实验血液学杂志 2005年第3期13卷 422-428页

作者：毛平王彩霞林秀梅杜庆华广州医学院附属广州市第一人民医院血液内科

为了探讨胎儿骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)体外扩增作用的影响及比较扩增前后脐血(CB)CD34+细胞上细胞表面趋化因子受体CXCR4和黏附分子CD49d+(VLA4)的表达情况,将从新鲜CB标本中分离出的MNC分别接种于已建立... 详细信息

为了探讨胎儿骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)体外扩增作用的影响及比较扩增前后脐血(CB)CD34+细胞上细胞表面趋化因子受体CXCR4和黏附分子CD49d+(VLA4)的表达情况,将从新鲜CB标本中分离出的MNC分别接种于已建立的无血清培养体系,该体系分4组:A组为培养过程中不加细胞因子和基质细胞;B组为单用胚胎骨髓基质细胞支持;C组为单用细胞因子支持;D组为细胞因子和胚胎骨髓基质细胞联合支持。在0、6、10及14天检测细胞总数、CD34+细胞数及集落形成单位(CFU)数,同时检测CD34+细胞上CD49d+及CXCR4的表达数。结果表明:在体外14天培养过程中,各时间点D组CD34+细胞、CFU数及CD34+CXCR4+细胞和CD34+CD49d+细胞扩增数均高于A、B、C组(P骨髓基质细胞联合外源性细胞因子不仅可以支持脐血MNC的有效扩增,而且扩增后与趋化作用和与粘附作用相关的造血细胞亦较扩增前明显增加。单用细胞因子扩增会造成造血细胞的耗竭,单用基质细胞支持可扩增或维持造血细胞的量,但难以实现造血细胞的大量扩增,FBMSC联合外源性细胞因子可能是扩增造血干祖细胞的较理想方案。

关键词：胎儿骨髓基质细胞细胞因子单个核细胞脐血

胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状研究

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中国实验血液学杂志 2001年第4期9卷 289-293页

作者：呼莹张丽艳马冠杰姜学英赵春华实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院天津300020

为研究胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状 ,取胎龄为 4 - 5个月水囊引产胎儿 ,将骨髓和肝脏细胞在SF(含 2 %FCS)培养基中培养 ,进行电镜观察 ,测定生长曲线 ,用流式细胞术对培养细胞进行表型测定 ,细胞周期分析 ,用SA方法... 详细信息

为研究胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状 ,取胎龄为 4 - 5个月水囊引产胎儿 ,将骨髓和肝脏细胞在SF(含 2 %FCS)培养基中培养 ,进行电镜观察 ,测定生长曲线 ,用流式细胞术对培养细胞进行表型测定 ,细胞周期分析 ,用SA方法测定Ⅰ ,Ⅲ型胶原和vWF因子表达。结果表明 :从胎儿骨髓和肝脏培养出的间充质干细胞 ,两者在形态学、生长特性、免疫表型上是相似的 ,肝脏间充质干细胞有更好的支持造血的功能。结论提示 ,从胎儿骨髓和肝脏可分离培养出间充质干细胞 ,在体外有效扩增且保持其低分化状态。

关键词：胎儿骨髓胎儿肝脏间充质干细胞免疫表型生物学性状

胎儿和成人骨髓间充质干细胞体外造血支持能力的比较(英文)

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中国实验血液学杂志 2011年第4期19卷 1028-1032页

作者：刘蒙杨少光邢文卢士红赵钦军任红英池颖马凤霞韩忠朝中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

胎儿出生以后,造血干细胞(HSC)才从胎儿的肝脏和脾脏转移到骨髓,这一过程可能由不同的造血微环境中的信号分子所介导。间充质干细胞(MSC)是骨髓微环境中间质细胞如成骨细胞、内皮细胞的前体祖细胞。研究者推测,胎儿出生前的骨髓可能并... 详细信息

胎儿出生以后,造血干细胞(HSC)才从胎儿的肝脏和脾脏转移到骨髓,这一过程可能由不同的造血微环境中的信号分子所介导。间充质干细胞(MSC)是骨髓微环境中间质细胞如成骨细胞、内皮细胞的前体祖细胞。研究者推测,胎儿出生前的骨髓可能并不特别适合HSC生长。然而,该假说尚缺乏直接的证据支持。本研究通过对胎儿和成人骨髓MSC的造血支持能力进行比较,拟为此提供证据。成人骨髓MSC来源于3位健康供者,胎儿骨髓MSC来源于孕19-20周流产的胎儿。MSC辐照后与CD34+一起进行长期培养启动细胞分析,计数克隆形成细胞的数量,流式分析培养后CD34+的表型变化。RT-PCR分析两种MSC中细胞因子的表达。结果显示,成人骨髓MSC比胎儿骨髓MSC具有更强的造血支持能力,两者都促进CD34+向髓系细胞分化,两者之间细胞因子的表达存在差异。结论:与胎儿骨髓MSC相比,成人骨髓MSC在某些治疗,尤其是促进造血恢复方面具有更广泛的应用前景。

关键词：间充质干细胞成人骨髓胎儿骨髓造血支持能力

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人间充质干细胞体外扩增及生物学特性的研究

中华儿科杂志 2003年第8期41卷 607-610页

作者：周敦华黄绍良吴燕峰魏菁陈戈煜黎阳包蓉中山大学附属第二医院儿科广州510120

目的　探讨成人骨髓、胎儿骨髓和人脐血 3种不同来源的人类间充质干细胞 (MSC)体外扩增及其生物学特性。方法　观察 3种来源的MSC的生长、增殖和表面标志的表达 ,从而评价MSC的纯化、增殖能力及其免疫学特性。结果　 (1) 3种不同来源的... 详细信息

目的　探讨成人骨髓、胎儿骨髓和人脐血 3种不同来源的人类间充质干细胞 (MSC)体外扩增及其生物学特性。方法　观察 3种来源的MSC的生长、增殖和表面标志的表达 ,从而评价MSC的纯化、增殖能力及其免疫学特性。结果　 (1) 3种不同来源的人MSC的细胞形态、集落数、集落大小均无差异 ;但成人骨髓MSC在集落形成及集落交错融合时间上均早于胎儿骨髓和脐血MSC ;(2 )3种来源的人MSC传代培养增殖速度无差异 ,但脐血和胎儿MSC融合后无接触抑制 ,而成人骨髓MSC存在接触抑制 ;(3)来源于骨髓单个核细胞 (MNC) 8× 10 6或脐血MSC 2 5× 10 6的MSC ,经体外扩增 3代、5代和 10代后 ,细胞数分别为 10 7、10 8和 10 10 个 ;(4)MSC易纯化 ,P2代细胞均一性为 90 % ,P3代细胞均一性为 95 % ,P5代细胞均一性达到 99% ;(5 )不同来源的MSC表面重要标志 :CD2 9、CD44、CD59、CD90 、CD10 5、CD166表达均为阳性 ,其造血细胞表面标志 :CD11a、CD14 、CD3 3 、CD3 4 、CD2 8、CD45、CD117表达均为阴性 ,与移植免疫排斥发生密切相关的表面标志 :HLA DR、B7 1(CD80 )、B7 2 (CD86)、CD40 和CD40L均为阴性。 3种不同来源的人MSC表面标志 ,差异无显著性。 (6 )两种不同培养体系对人MSC的纯化扩增及生物学特性无影响。结论　 (1)

关键词：人间充质干细胞体外扩增生物学特性成人骨髓胎儿骨髓人脐血

间充质干细胞的三维培养及其体外免疫抑制作用研究

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间充质干细胞的三维培养及其体外免疫抑制作用研究

作者：李芳山东大学

学位级别：硕士

目的间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一类具有自我更新能力及多向分化潜能的非造血干细胞,它的多向分化潜能,造血支持功能,低免疫源性,免疫调节功能及再生功能,使其成为一种具有临床应用前景的祖/干细胞来源。近年来,间... 详细信息

目的间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一类具有自我更新能力及多向分化潜能的非造血干细胞,它的多向分化潜能,造血支持功能,低免疫源性,免疫调节功能及再生功能,使其成为一种具有临床应用前景的祖/干细胞来源。近年来,间充质干细胞的免疫抑制功能备受关注。国内外众多研究表明,成人骨髓间充质干细胞、脂肪源性间充质干细胞和脐带间充质干细胞等不同组织来源的MSCs都具有免疫抑制功能,在体外可抑制B细胞和T细胞增殖和分化,抑制DC细胞成熟,抑制NK细胞活性等;在体内,MSCs对GVHD和自身免疫性疾病都具有显著的治疗作用。作为胎儿组织来源的MSCs,胎肝间充质干细胞(fetal liver derived mesenchymal stem cells, FL-MSCs)及胎儿骨髓间充质干细胞(fetal bone marrow derived mesenchymal stem cells, FBM-MSCs)伴随胎儿发育期间骨髓造血微环境的逐步形成。FL-MSCs及FBM-MSCs在自我更新、多向分化潜能和高度增殖等干细胞基本生物学特征方面,与成人骨髓间充质干细胞类似。但是,目前关于这两种细胞免疫学特性的研究鲜见报道。对这两种细胞免疫学特性的研究,可能有助于我们更深入的了解FL-MSCs及FBM-MSCs在胎儿造血微环境及造血发育调节等重要生理功能中的作用。早期研究表明造血细胞的增殖和分化受骨髓微环境的调控,而骨髓微环境是一个三维立体的培养空间,基质细胞是其中的重要组成部分,基质细胞通过分泌细胞因子、细胞外基质以及细胞与细胞之间的直接接触来调节造血干细胞的增殖与分化,维持造血干细胞的干性。然而大多数关于基质细胞调控造血细胞生长及自我更新能力的研究都是利用平面培养系统进行的,而且大部分的结果显示培养四至八周后,造血细胞即会开始减少。这种造血支持缺陷是否能够在三维培养体系中得到改善还缺乏进一步研究,因此,我们建立了三维立体的培养系统,研究脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)在三维立体条件下的生物学特性变化,以便以后更好地研究三维立体条件下的造血扩增及分化。方法 1.间充质干细胞的培养和鉴定：原代培养人FBM-MSCs和FL-MSCs;通过形态学观察,流式细胞术检测表面分子的表达,Alizarin Red S、Von Kossa及Oil RedO染色和LPL、OPN相关基因的表达检测多向分化潜能。 2. FBM-MSCs及FL-MSCs的生长特性：通过连续传代观察两种细胞的生长速度;观察连续传代后细胞形态变化,流式细胞术检测连续传代后细胞表面分子的表达。 3. FBM-MSCs及FL-MSCs对PBMC增殖的影响：分离外周血单个核细胞(PBMC);利用MSC/PBMC体外共培养体系,CFSE法检测PBMC的增殖,ELISA法及RT-PCR检测炎性细胞因子的蛋白分泌水平及mRNA表达水平;利用RT-PCR检测该体系中FBM-MSCs及FL-MSCs共培养前后,多种免疫抑制性细胞因子分泌水平的变化。 4.细胞-细胞接触在免疫抑制中的作用：Transwell实验检测细胞-细胞接触的作用;RT-PCR检测共培养体系中FBM-MSCs及FL-MSCs共培养前后粘附分子ICAM1, ICAM3和VCAM1的表达。 5. UC-MSCs的三维培养：从脐带中分离出MSC,分别在二维及三维条件下培养;通过流式细胞技术检测MSC表面抗原的表达水平;通过成血管试验比较了两种细胞的成血管能力;并通过RT-PCR检测两种培养条件下造血相关细胞因子的基因表达情况。结果 1.成功地分离出了FBM-MSCs及FL-MSCs;我们所培养的胎儿骨髓和胎肝MSC均可旺盛增殖,呈现典型的成纤维样梭行细胞形态,高表达CD29、CD44、CD49e、 CD73、CD90、CD105,不表达造血细胞的表面标记CD34、CD45,内皮细胞的表面标记CD31及GVHD相关的CD80、CD86、CD106、HLA-DR。此外两种MSC低表达CD146、HLA-ABC;在诱导后可向成骨细胞和脂肪细胞分化,并表达其特异性标志。 2. FL-MSCs生长速度较FBM-MSCs快;连续传代以后两种细胞仍保持间充质干细胞的一些基本生物学特性。 3. FBM-MSCs及FL-MSCs对PBMC的增殖和炎性因子IFN-γ和TNF-α分泌具有明显的抑制作用;共培养后,FBM-MSCs及FL-MSCs表达IDO、TSG-6和TGF-β的水平明显提升。 4.细胞-细胞接触在两种细胞的免疫抑制中发挥重要作用;共培养后,FBM-MSCs及FL-MSCs表达ICAM1的水平明显提升。 5.从脐带中成功地

关键词：胎儿骨髓胎肝脐带间充质干细胞免疫抑制三维培养细胞因子

人脐血、成人骨髓和小鼠骨髓成纤维细胞系祖细胞培养

同方学位论文库评论

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中国实验血液学杂志 1995年第4期3卷 432-433页

作者：黄东生谭汉君陈家佩陶来宝长城医院儿内科北京100853 北京放射医学研究所北京100850

自1989年美国Broxmeyer与法国医生合作首次开展脐血造血干细胞移植治疗Fanconis贫血获得成功之后,人们对以往常被丢弃的脐血的基础研究和临床应用研究的兴趣与日俱增。脐血中富含红系祖细胞BFU—E,粒单系祖细胞CFU—GM和巨核系祖细胞CFU... 详细信息

自1989年美国Broxmeyer与法国医生合作首次开展脐血造血干细胞移植治疗Fanconis贫血获得成功之后,人们对以往常被丢弃的脐血的基础研究和临床应用研究的兴趣与日俱增。脐血中富含红系祖细胞BFU—E,粒单系祖细胞CFU—GM和巨核系祖细胞CFU-Meg并已基本被肯定,但是否存在成纤维细胞系祖细胞(CFU—F)

关键词：小鼠骨髓红系祖细胞细胞系人脐血骨髓基质细胞胎儿骨髓成人成纤维细胞粒单系祖细胞贴壁细胞

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怀孕期间的大三餐

饮食科学 1999年第8期 62-62页

作者：青青