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中华烧伤杂志 2021年第1期37卷 86-89页

作者：潘伊姜笃银山东大学第二医院康复医学科济南250033 山东大学第二医院急诊医学中心济南250033

胎儿真皮间充质干细胞(FDMSC)是从不携带遗传疾病且未应用流产药物的健康孕妇意外流产胎儿皮肤中提取的一种多功能干细胞,具有外泌体分泌活性,增殖和自我更新能力强,免疫原性低,可向损伤组织归巢,促进组织再生等优点。近年来对FDMSC基... 详细信息

胎儿真皮间充质干细胞(FDMSC)是从不携带遗传疾病且未应用流产药物的健康孕妇意外流产胎儿皮肤中提取的一种多功能干细胞,具有外泌体分泌活性,增殖和自我更新能力强,免疫原性低,可向损伤组织归巢,促进组织再生等优点。近年来对FDMSC基本生物学特性、体外诱导分化能力、促进皮肤创面修复等的研究,为未来烧伤患者的临床治疗提供了新方向。本文就FDMSC促进烧伤创面愈合的研究进展进行综述。

关键词：烧伤伤口愈合胎儿真皮间充质干细胞

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胎儿真皮间充质干细胞对烧伤诱导的微血管通透性的影响

胎儿真皮间充质干细胞对烧伤诱导的微血管通透性的影响

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作者：潘伊山东大学

学位级别：硕士

研究背景严重烧伤患者经常会出现皮肤缺损,组织水肿,液体渗出,休克和器官功能障碍,甚至可能危及生命。烧伤后微血管通透性增加,微循环障碍,局部组织水肿甚至出现低血容量性休克,其病理基础是血管内皮屏障的结构损伤和功能损伤。间充质... 详细信息

研究背景严重烧伤患者经常会出现皮肤缺损,组织水肿,液体渗出,休克和器官功能障碍,甚至可能危及生命。烧伤后微血管通透性增加,微循环障碍,局部组织水肿甚至出现低血容量性休克,其病理基础是血管内皮屏障的结构损伤和功能损伤。间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）是一种具有较强增殖能力和多向分化潜能的干细胞。MSCs来源广泛,主要分布在骨髓、脐血、脐静脉内皮层、脂肪、外周血和肌肉等组织。由于间充质干细胞具有自我更新、自我繁殖、易保存、多向分化、较强的分泌功能等特点,已经成为治疗多种临床疾病的种子细胞。其中,胎儿真皮间充质干细胞（Fetal dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs）是取自不携带遗传疾病且未应用任何药物的健康孕妇意外流产胎儿皮肤的一种多功能干细胞,具有MSCs所有功能特性。与其他组织来源的干细胞相比,FDMSCs具有免疫原性低、增殖能力强、自我更新能力强、促进组织再生和归巢于损伤组织等优点。但FDMSCs在烧伤后引起的微血管通透性增高,微循环障碍的治疗方面还未见文献报道。目的通过研究 FDMSCs 的条件培养基（conditioned media of FDMSCs,F-CM）对烧伤诱导的微血管通透性的影响,探索FDMSCs相关疗法治疗烧伤后微血管通透性及微循环障碍的可行性。方法从胎儿的皮肤组织中提取FDMSCs并制备F-CM。人微血管内皮细胞系1（HMEC-1）从ATCC获得。体内实验中,采用水浴烫伤法（54℃,25 s）制备小鼠背部深Ⅱ度烫伤创面,在创面区域分别皮下注射200μL空白培养基和不同浓度的F-CM（0.5×CM,1×CM,2×CM）,24h后采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-Dextran）法血管内循环方法测试F-CM对小鼠体内血管通透性的影响。体外实验中,分别用空白培养基、烧伤血清、不同浓度的F-CM（0.5×CM,1×CM,2×CM）处理HMEC-1后,检测以下指标:①内皮细胞通透性:采用FITC-Dextran体内循环法检测体内通透性系数;②烧伤血清诱导内皮细胞模拟烧伤环境,采用transwell小室,计算内皮细胞通透性系数,确定烧伤血清干预内皮细胞的最佳作用浓度和最佳作用时间;③内皮细胞增殖试验:采用CCK-8的方法;④内皮细胞通透性相关蛋白表达:采用Western blot检测钙粘连蛋白（VE-cadherin）和咬合蛋白（Occludin）的表达;⑤细胞免疫荧光检测内皮细胞蛋白表达:采用细胞免疫荧光检测细胞间粘附连接VE-cadherin和内皮细胞纤维状肌动蛋白（F-actin）的表达情况。结果①体内通透性检测:随着F-CM干预浓度的增加,降低血管通透性作用更加明显;②烧伤血清对内皮细胞通透性的影响:烧伤血清浓度越高,作用时间越长,增加内皮细胞血管通透性作用越明显;③F-CM可以促进为微血管内皮细胞的增殖,提高血管周围细胞密度;④F-CM对内皮细胞通透性相关蛋白表达的影响:随着F-CM浓度的增加,Western blot检测Occludin和VE-cadherin蛋白表达增加;⑤免疫荧光检测内皮细胞F-actin和细胞间粘附连接VE-cadherin的表达增加。结论通过一系列实验,结果表明F-CM可以通过增加Occludin和VE-cadherin的蛋白表达并恢复内皮细胞骨架F-actin的重塑来降低烧伤诱导的微血管高通透性,从而减少烧伤引起的血管内液体渗出,局部组织水肿,从而预防低血容量性休克的发生。

关键词：胎儿真皮间充质干细胞条件培养基烧伤血管通透性

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胎儿真皮间充质干细胞减缓烧伤早期创面进行性加深的实验研究

胎儿真皮间充质干细胞减缓烧伤早期创面进行性加深的实验研究

引用

作者：张静娟山东大学

学位级别：硕士

研究目的通过研究胎儿真皮间充质干细胞(Fetal dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)对大鼠烧伤早期创面中瘀滞区微环境的影响,探索FDMSCs防治烧伤后早期创面进行性加深的可行性。研究方法通过定制的梳齿状铜块(梳齿平面大小为20mm×1... 详细信息

研究目的通过研究胎儿真皮间充质干细胞(Fetal dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)对大鼠烧伤早期创面中瘀滞区微环境的影响,探索FDMSCs防治烧伤后早期创面进行性加深的可行性。研究方法通过定制的梳齿状铜块(梳齿平面大小为20mm×10mm,梳齿间间隙平面大小为20mm×5mm,共计4个梳齿和3个间隙)构建大鼠烧伤瘀滞区模型。将SD大鼠随机分为空白组、对照组、实验组。首先将铜块浸于100℃水浴5min,再置于脱毛后的大鼠背部皮肤20s,对照组和实验组分别在创面瘀滞区皮下注射PBS、FDMSCs,空白组为无烧伤组。烧伤48h后取创面间隙组织检测以下指标:①组织学观察:采用HE染色观察瘀滞区表皮及真皮厚度、皮肤附件、胶原结构及组织破坏等情况;②炎症相关因子:使用RT-PCR和Western blot法检测炎症相关基因及蛋白IL-1β、IL-6的表达量,并采用Western blot法检测NF-κB p65的活性水平;③氧化应激:采用相关试剂盒检测丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(SOD)的含量;④细胞凋亡:采用RT-PCR和Western blot法检测凋亡相关基因及蛋白(Bax、Bcl-2)的表达。研究结果(1)根据大体观察发现,对照组和实验组大鼠烧伤后48小时瘀滞区出现充血现象,烧伤创面之间呈融合趋势。(2)HE染色:显微镜下,见对照组瘀滞区组织的表皮层变薄、真皮层结构肿胀、胶原变性坏死,局部炎症细胞浸润等改变,而实验组的组织破坏等表现较对照组相比均有所减轻。(3)FDMSCs下调炎症相关因子的表达:RT-PCR和Western blot检测结果显示实验组和对照组炎症因子IL-1β、IL-6均高于空白组,但与对照组相比,实验组瘀滞区经FDMSCs处理后IL-1β、IL-6的mRNA及蛋白表达明显降低。此外,FDMSCs还可下调NF-κB p65的表达水平。(4)FDMSCs抗氧化应激:根据相关试剂盒检测结果表明烧伤后(实验组和对照组)脂质过氧化终产物MDA含量明显升高,但实验组MDA含量显著低于对照组;此外,FDMSCs可减少内源性抗氧化酶水平SOD的消耗,其SOD表达量明显高于对照组。(5)FDMSCs抑制细胞凋亡:RT-PCR结果表明FDMSCs处理后的瘀滞区组织中Bax mRNA含量降低,而Bcl-2 mRNA含量升高;进一步Western blot实验结果也表明FDMSCs可促进细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达并抑制细胞促凋亡蛋白Bax的表达,导致Bcl-2/Bax升高而减少细胞凋亡。研究结论利用梳齿状铜块可成功建立大鼠烧伤早期瘀滞区模型,可为研究烧伤早期创面进展提供可靠的动物模型。实验结果表明,FDMSCs可能通过减轻局部炎症和氧化应激反应来改善瘀滞区的微环境,进而减少细胞凋亡,缓解烧伤早期创面瘀滞区的发展。FDMSCs减轻创面炎症反应的作用可能是通过影响NF-κB信号通路实现的。

关键词：胎儿真皮间充质干细胞烧伤瘀滞区炎症氧化应激

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人胎儿真皮间充质干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学活性的影响

人胎儿真皮间充质干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学活性的影响

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作者：焦亚山东大学

学位级别：硕士

研究背景瘢痕疙瘩是一种由成纤维细胞异常增殖和胶原过度沉积导致的皮肤纤维化疾病。由于该疾病形成机制复杂,目前研究尚未能完全揭示其发病原因和生长机制,临床上也未出现效果理想的治疗方案,所以新的治疗方案亟待出现。间充质干细胞(M... 详细信息

研究背景瘢痕疙瘩是一种由成纤维细胞异常增殖和胶原过度沉积导致的皮肤纤维化疾病。由于该疾病形成机制复杂,目前研究尚未能完全揭示其发病原因和生长机制,临床上也未出现效果理想的治疗方案,所以新的治疗方案亟待出现。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)因其抗纤维化作用已在肺纤维化、心肌梗塞等纤维化疾病治疗方面崭露头角,而人胎儿真皮间充质干细胞(Fetal dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)被认为在早期胎儿无瘢痕愈合中起到决定性作用的细胞,但是,该细胞是否可应用于瘢痕疙瘩的治疗方面还未见文献报道。目的通过研究 FDMSCs 条件培养基(FDMSCs conditioned medium,F-CM)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblasts,KFs)生物学活性的影响,探索FDMSCs相关疗法治疗瘢痕疙瘩的可行性。方法分别提取并鉴定成人真皮成纤维细胞(Adult dermal fibroblasts,ADFs)、FDMSCs和KFs,并应用ADFs和FDMSCs制备ADFs条件培养基(ADFs conditioned medium,A-CM)和 F-CM。KFs 分别用空白对照培养基(SFM)、A-CM和F-CM培养,培养48h后对各组KFs进行一系列实验分析,包括细胞形态观察(倒置显微镜下)、细胞数量变化(MTT比色实验)、细胞增殖率和凋亡率改变(BrdU细胞增殖实验和TUNEL细胞凋亡实验)、细胞共培养干预实验和条件培养基干预实验对比、凋亡相关基因和蛋白的表达变化(qPCR和Western blot)、细胞凋亡时期检测(Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测)结果通过一系列实验,结果显示相对于对照组和A-CM组,F-CM可以诱导KFs出现凋亡形态,并可减少活细胞的数目。但KFs增殖率没有明显改变但凋亡率明显增加,这说明细胞数目的减少主要得益于细胞凋亡的增多。FDMSCs与KFs共培养实验的结果同培养基干预KFs实验结果没有明显区别。进一步实验表明F-CM可促进细胞促凋亡蛋白BCL-2的表达并抑制细胞抑凋亡蛋白BAX的表达,导致BCL-2/BAX升高而促进细胞凋亡。Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡实验结果表明细胞凋亡时期主要为晚期凋亡。结论(1)FDMSCs可成功从早期人胎儿皮肤中提取并进行体外培养、传代,并能维持稳定的生物学特性。(2)F-CM干预KFs实验结果与细胞共培养干预实验结果一致,避免了 FDMSCs直接应用于机体的潜在风险。(3)F-CM可以通过抑制细胞抑凋亡蛋白BCL-2的表达并促进细胞促凋亡蛋白BAX的表达来促进细胞凋亡。(4)F-CM所诱导的KFs凋亡时期主要为晚期凋亡。

关键词：胎儿真皮间充质干细胞瘢痕疙瘩成纤维细胞条件培养基

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