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胆总管梗阻致急性胆囊炎及梗阻解除后胆囊组织中IL-18、内毒素、血清内毒素和胆囊病理的研究

胆总管梗阻致急性胆囊炎及梗阻解除后胆囊组织中IL-18、内毒素、...

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作者：刘荣鹃河北医科大学

学位级别：硕士

目的:胆总管梗阻所致急性胆囊炎为临床常见疾病,但各种原因导致胆道梗阻继发的胆囊炎报道甚少,国内未见胆总管梗阻致急性胆囊炎及梗阻解除后胆囊组织中白细胞介素-18、内毒素、血清内毒素、胆囊病理变化的动物实验研究。本试验采用家兔... 详细信息

目的:胆总管梗阻所致急性胆囊炎为临床常见疾病,但各种原因导致胆道梗阻继发的胆囊炎报道甚少,国内未见胆总管梗阻致急性胆囊炎及梗阻解除后胆囊组织中白细胞介素-18、内毒素、血清内毒素、胆囊病理变化的动物实验研究。本试验采用家兔制备急性胆总管梗阻的模型,探索胆总管梗阻不同时段及解除胆总管梗阻后胆囊组织中IL-18、内毒素,血清内毒素、胆囊病理的变化,为临床上治疗胆总管梗阻引起的急性胆囊炎提供理论和实验依据。方法:选择健康家兔54只,雌雄各半,体重2.2-2.5kg/只,随机分为9组:正常对照组(N);胆总管梗阻组:胆总管梗阻1天组(L1),胆总管梗阻3天组(L3),胆总管梗阻5天组(L5),胆总管梗阻7天组(L7);胆总管梗阻解除组:胆总管梗阻1天解除梗阻组(R1),胆总管梗阻3天解除梗阻组(R3),胆总管梗阻5天解除梗阻组(R5),胆总管梗阻7天解除梗阻组(R7),每组6只。每只家兔术前禁食过夜、自由饮水,以10%水合氯醛1ml/kg腹腔麻醉后,无菌操作下开腹、游离胆总管下段。正常对照组胆总管分离完毕后关腹,手术后72小时处死动物;胆总管梗阻及梗阻解除组均在直视下置入一外径为2mm的细硅胶管,将硅胶管两端经皮下隧道引出,腹壁引出处距正中切口1.5cm,提起并收紧硅胶管,直视下观察以能阻止胆流为度,关腹并固定硅胶管。胆总管梗阻组分别于梗阻后1天、3天、5天、7天处死动物,而胆总管梗阻解除组均于梗阻解除后72小时处死动物。每只动物无菌心脏采血5ml,并离心分离血清,2500r/min,用终点显色法鲎试验技术法测定内毒素;各组采血并处死动物后摘取整个胆囊,纵行剖取1/2研磨成匀浆,用双抗夹心ELISA法测定胆囊组织中的IL-18、终点显色法鲎试验技术法测定内毒素。其余胆囊组织置于10%中性甲醛中以备制石腊切片行HE染色观察胆囊病理形态。所有结果均以均数±标准差(X±S)表示,采用SPSS FOR WINDOW 13.0软件包进行统计学处理,各组间均数比较采用单因素方差分析(one–way ANOVA)和Student-Newman-Keuls方法进行统计学检验,P胆囊大体形态及病理:胆总管梗阻早期,L1、L3组家兔胆囊较N组增大、胆囊壁增厚、水肿,但囊壁完整、未见溃疡,胆汁为深黄色;镜下粘膜上皮无缺损,固有层、肌层、浆膜层均有水肿,有血管扩张充血及少量中性粒细胞浸润。随着梗阻时间的延长,L5组胆囊的炎症加重,胆囊肿大,胆汁混浊、呈墨绿色,粘膜可见灰黄色渗出物附着或形成假膜。部分粘膜坏死脱落,有小溃疡,同时往往伴有胆结石。光镜下粘膜上皮脱落,血管扩张充血,粘膜、固有膜、肌层、浆膜均可见大量中性粒细胞弥漫性浸润,肌层可有断裂、破坏。梗阻7天(L7组),整个胆囊发黑,壁薄且脆,粘膜皱壁消失,呈坏死状。光镜下粘膜上皮消失,见大量白细胞碎屑及出血,粘膜、固有膜、肌层、浆膜各层界限不清,常伴有胆囊周围炎,严重时可出现坏疽、穿孔。胆总管梗阻解除后胆囊炎症较同时段胆总管梗阻组可见减轻。胆囊组织中的IL-18、内毒素含量及血清中的内毒素含量随着胆总管梗阻时间的延长逐渐升高,胆总管梗阻组各组之间比较均有显著性差异(P胆囊组织中IL-18、内毒素含量及血清中内毒素含量均降低(P胆囊组织中IL-18、内毒素含量及血清中内毒素含量越低,胆囊病理炎症越轻,恢复也越快。结论:1胆总管梗阻可导致急性胆囊炎症,随着胆总管梗阻时间的延长,胆囊组织的炎症逐渐加重,胆总管梗阻解除后胆囊组织炎症逐渐减轻,梗阻解除越早,胆囊组织炎症越轻。2胆总管梗阻后,梗阻组胆囊组织IL-18含量随着梗阻时间的延长逐渐升高,解除梗阻组与同时段胆总管梗阻组比较IL-18含量下降。表明作为前炎症因子的IL-18参与了胆总管梗阻所致的急性胆囊炎症,可能成为衡量胆囊炎症严重程度的指标之一。3胆总管梗阻后,梗阻组胆囊组织中内毒素含量及血清内毒素含量随着梗阻时间的延长逐渐升高,解除梗阻组与同时段胆总管梗阻组比较内毒素含量下降。表明内毒素在胆总管梗阻所致的胆囊局部炎症及全身炎症反应中起重要作用。

关键词：胆总管梗阻解除胆总管梗阻急性胆囊炎 IL-18 内毒素胆囊病理

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基于网络药理学的大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的机制研究

基于网络药理学的大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的机制研究

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作者：张涛北京中医药大学

学位级别：硕士

胆囊炎指各种原因引起的胆囊壁的急慢性炎症反应[1]。根据胆囊内有无结石将其分为结石性胆囊炎与非结石性胆囊炎,结石性胆囊炎在临床较为常见。根据本病的临床诊疗指南[2],手术治疗一直作为根治本病的首选,但术后体内产生结石的微环境... 详细信息

胆囊炎指各种原因引起的胆囊壁的急慢性炎症反应[1]。根据胆囊内有无结石将其分为结石性胆囊炎与非结石性胆囊炎,结石性胆囊炎在临床较为常见。根据本病的临床诊疗指南[2],手术治疗一直作为根治本病的首选,但术后体内产生结石的微环境未改变,胆囊炎的复发率仍居高不下,以及诸多术后综合征等后遗症,不易被患者接受。中医药在胆囊炎的治疗上能够消石排石,并且在改善症状以及减少复发率方面具有独特优势,效果显著。中医学中并无结石性胆囊炎的记载,但根据其发作时引起右上腹剧烈疼痛,伴有黄疸等临床特征,将其归为“胁痛”、“胆胀”、“黄疸”等范畴,多因饮食不节,损伤脾胃,情志不畅,肝气郁结,导致湿热内蕴,肝胆瘀滞发而病[3]。大柴胡汤是《伤寒论》中和解少阳,内泻热结的代表方剂。擅于治疗少阳阳明合病,且表里兼顾,使少阳与阳明合病得以双解。身目发黄、往来寒热、胸胁、心下满痛,伴有呕吐,苔黄、脉弦数是大柴胡汤证的辨证要点,对比急性胆囊炎的发作时出现剧烈右上腹疼痛,高热,黄疸,恶心呕吐等症状有较大的的相似性。现代诸多医家在临床上应用大柴胡汤治疗结石性胆囊炎取得了显著的疗效。当前针对大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的临床疗效研究与实验作用机制研究较多,但因中药复方所含化学成分复杂,且干扰因素众多。因此,大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的作用机制尚未研究明确。因此,本研究应用网络药理学的研究方法,初步筛选大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的核心靶点。构建高胆固醇饲料致结石性胆囊炎的动物模型,验证大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的核心靶点的治疗作用。为大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的机制研究提供相关依据与数据支持。目的基于网络药理学的研究方法筛选大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的关键化学成分、核心靶点、GO功能及KEGG通路。结合实验一筛选出的关键核心靶点,选取豚鼠造模,验证大柴胡汤对实验一筛选出关键核心靶点的调控作用,并进一步观察结石性胆囊炎豚鼠胆囊的病理切片,探讨大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的作用机制。方法实验一:通过中药系统药理学数据库获得大柴胡汤所含中药的化学成分,收集其相对应的靶点;结石性胆囊炎疾病靶点来源于GeneCards人类基因数据库、人类孟德尔遗传数据库。获取复方-疾病的交集基因。结合Cytoscape3.8.0构建药物-核心靶点-有效成分网络,靶标蛋白互作PPI网络,筛选核心靶点。利用Bioconductor中的Biocmanager,***,Colorspace,Stringi,ggplot2,DOSE,ClusterProfiler,enrichplot,Pathview等程辑包对核心靶点进行GO富集和KEGG通路分析。将有效成分与核心靶点进行分子对接验证。实验二:取豚鼠30只,随机分组,空白对照组10只,模型对照组10只,大柴胡汤组10只。连续喂以胆囊炎高胆固醇饲料4周建立结石性胆囊炎模型。造模成功后空白对照组和模型对照组灌胃生理盐水,大柴胡汤组中药灌胃,连续灌胃40天,腹主动脉取血,ELISA法测定血清中TNF-α、CCK、SOD的水平。观察豚鼠胆囊肉眼及镜下病理图片。结果实验一:1.化学成分靶点的收集:共收集大柴胡汤药物化学成分151个,靶点基因260个;收集结石性胆囊炎疾病靶点基因486个;获得交集基因55个。2.有效化学成分筛选:构建化学成分-交集基因网络图,主要化学成是槲皮素、β-谷甾醇、木犀草素、柚皮素。3.核心蛋白的筛选:构建PPI蛋白质互相作用网络,通过网络拓扑分析,筛选出核心蛋白有 TNF、CCK、EGFR、VEGFA、AKT1。4.分子对接验证:显示TNF与槲皮素、木犀草素、柚皮素;CCK与槲皮素、β-谷甾醇;EGFR与槲皮素、木犀草素;AKT1与槲皮素、木犀草素、柚皮素;VEGFA与槲皮素、木犀草素均有较好的结合活性。***及KEGG富集分析:共富集到了 2307个GO条目,其中细胞成分92个,生物学过程2126个,分子功能89个。KEGG通路发现共富集到了 150条通路,主要涉及到AGE-RAGE信号通路、白细胞介素-17信号通路、HIF-1信号通路。实验二:1.造模后一般情况观察:模型组豚鼠在造模过程中出现行动迟缓,皮毛暗淡易脱,弓背,扎堆,尿液色黄,大便稀溏。2.各组间血清学指标变化:模型对照组豚鼠血清TNF-α的含量明显高于空白对照组。CCK、SOD的含量明显低于空白对照组。与模型对照组相比,大柴胡汤组血清TNF-α的含量有所下降,但高于空白对照组,CCK、SOD的含量均较模型对照组升高,但低于空白对照组,以上结果P均＜0.05,组间差异有统计学意义。3.肉眼下胆囊形态观察:空白对照组豚鼠胆囊大小形态正常,红润,有血管附着囊壁,血运良好,囊壁未见增厚。模型对照组胆囊体积增大,颜色偏深,血运不佳,胆囊壁较厚,胆囊内可见泥沙样物质。大柴胡汤组胆囊介于

关键词：大柴胡汤胆囊病理结石性胆囊炎网络药理学

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