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香椿籽总黄酮对损伤胃黏膜细胞和胃癌细胞的影响研究

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香椿籽总黄酮对损伤胃黏膜细胞和胃癌细胞的影响研究

作者：高慧娟阜阳师范大学

学位级别：硕士

研究背景:随着人们饮食习惯、生活节奏的改变,胃病患者逐渐增多,其中胃溃疡和胃癌作为多种胃病转归已成为多发病之一。胃病的西医疗法根治率不高,且长时间服用西药还会产生多种副作用。中医疗法因为依据辨证论治对胃病能标本兼治,重新... 详细信息

研究背景:随着人们饮食习惯、生活节奏的改变,胃病患者逐渐增多,其中胃溃疡和胃癌作为多种胃病转归已成为多发病之一。胃病的西医疗法根治率不高,且长时间服用西药还会产生多种副作用。中医疗法因为依据辨证论治对胃病能标本兼治,重新受到重视,治疗胃病的中草药开发也成了研究新热点。香椿嫩芽、叶、树皮等器官含有多种活性成分,具有抗氧化、抑菌、抑癌等活性。民间验方有香椿籽水煎剂治疗胃肠疾病的历史。但目前关于香椿功效的研究多集中在香椿叶及香椿树皮提取物上,而对于香椿籽提取物的功效研究报道较少,香椿籽总黄酮对损伤胃黏膜细胞及胃癌细胞的影响作用研究更鲜有报道。研究目的:拟建立优化提取香椿籽总黄酮双水相萃取法,并检测提取物香椿籽总黄酮的体外抗氧化能力及其对胃黏膜细胞的安全性;通过体外细胞实验探讨香椿籽总黄酮对受损胃黏膜和胃癌细胞的作用及机制,以期为胃溃疡、胃癌等疾病的治疗药物开发提供实验依据。研究方法:实验采用超声波辅助乙醇-硫酸铵双水相法萃取分离香椿籽总黄酮,并通过单因素实验和响应面法优化了提取条件。以VC为阳性对照,体外进行香椿籽总黄酮对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟自由基(·OH)的清除能力实验,检测其抗氧化能力。通过对传代胃黏膜细胞GES-1的生物学特性观察、MTT法测定细胞存活率及划痕愈合实验检验香椿籽总黄酮对正常胃黏膜细胞GES-1的安全性,确立香椿籽总黄酮对正常胃黏膜细胞使用的安全浓度范围。以不同浓度乙醇溶液损伤正常胃黏膜细胞,筛选构建乙醇损伤细胞模型。以MTT法检测香椿籽总黄酮对受损胃黏膜细胞存活率影响,使用试剂盒与ELISA法测定了香椿籽总黄酮作用下受损胃黏膜细胞产生的氧化应激相关因子及炎性相关因子的活性及含量。最后以HGC-27胃癌细胞为研究对象,使用MTT法、划痕实验法、细胞集落实验法检测香椿籽总黄酮对胃癌细胞HGC-27增殖与迁移的影响;通过流式细胞术、JC-1线粒体膜电位染色法、Caspase-3活性测定法检测香椿籽总黄酮对胃癌细胞HGC-27的诱导凋亡作用。研究结果:1、双水相法萃取香椿籽总黄酮的最佳条件为:乙醇体积3.6 m L、硫酸铵质量2.2 g、样品质量0.2 g、超声时间29 min,香椿籽总黄酮萃取率为93.43%。体外抗氧化测定结果表明香椿籽总黄酮具有抗氧化活性,对DPPH自由基、羟自由基、ABTS自由基的清除能力分别达到93.68%、85.61%、82.26%。2、不同浓度香椿籽总黄酮实验组细胞存活率都保持在90%以上,香椿籽总黄酮对胃黏膜细胞生长没有抑制作用,却能一定程度地剂量依赖性促进胃黏膜细胞迁移生长,表明实验设定的香椿籽总黄酮浓度范围对胃黏膜细胞生长具有安全性。相较损伤细胞对照组,香椿籽总黄酮能够提高损伤细胞的存活率,显示了对损伤细胞的修复增殖作用。香椿籽总黄酮能够提高受损细胞中抗氧化相关SOD酶活性,降低氧化应激产物MDA的含量,并提高内源性保护因子NO含量;香椿籽总黄酮对受损GES-1细胞中炎症相关因子TNF-α、IL-1β含量没有明显影响。3、香椿籽总黄酮作用于HGC-27胃癌细胞后,能够降低胃癌细胞的增殖率和细胞贴壁能力,抑制胃癌细胞横向迁移和集落形成能力;使胃癌细胞的线粒体膜电位降低,破坏线粒体膜电位平衡;能够提高胃癌细胞凋亡相关因子Caspase-3的活性。流式细胞仪检测发现香椿籽总黄酮能够促进胃癌细胞凋亡。研究结论:本研究成功建立了对香椿籽总黄酮的双水相提取法,所提取的香椿籽总黄酮具有较强的体外抗氧化能力,对胃黏膜细胞生长未见明显毒性。香椿籽总黄酮对损伤胃黏膜细胞具有一定的修复增殖作用,并可能通过抗氧化应激途径对受损胃黏膜细胞起到保护作用。香椿籽总黄酮能够抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移及细胞集落形成,并促进其凋亡,细胞凋亡可能与香椿籽总黄酮作用下细胞线粒体膜电位降低和凋亡相关蛋白Caspase-3活性增强有关。

关键词：香椿籽总黄酮胃黏膜细胞胃癌细胞损伤保护细胞凋亡

同源盒基因IRX1的启动子克隆及其在人胃黏膜细胞中的启动活性分析

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中华胃肠外科杂志 2010年第11期13卷 846-850页

作者：郭晓波郭磊吴建林刘卫仁计骏张佳年刘炳亚朱正纲于颖彦上海交通大学医学院附属瑞金医院外科上海消化外科研究所 200025

目的克隆同源盒基因IRX1的核心启动子序列,并探讨其转录调控机制.方法通过生物信息学预测IRX1基因启动子范围：利用PCR方法扩增并构建含有IRX1基因启动子不同片段的真核报告基因质粒,瞬时转染GES-1胃黏膜细胞,通过检测不同片段的荧光... 详细信息

目的克隆同源盒基因IRX1的核心启动子序列,并探讨其转录调控机制.方法通过生物信息学预测IRX1基因启动子范围：利用PCR方法扩增并构建含有IRX1基因启动子不同片段的真核报告基因质粒,瞬时转染GES-1胃黏膜细胞,通过检测不同片段的荧光素酶报告质粒活性,判断不同片段的启动子活性.结果生物信息学预测IRX1基因启动子位于转录起始点上游700 bp范围内.通过PCR技术扩增获得IRX1基因5＇侧翼区8个截短片段报告基因质粒,其活性由大到小依次为p-416＞p-584＞p-715＞p-350＞p-687＞p-320＞p-188＞p-92 除p-92与p-188片段外,其余各片段与PGL3-basic空载体的差异均有统计学意义（均P＜0.05）,其中以p-416片段活性最强,片段p-320与片段p-188之间出现较大活性落差.结论 IRX1基因上游序列启动子以p-416转录活性最高,核心启动子位于-320～-188区间,该区间具有Sp1、TFⅡD等转录因子结合序列,是下一步转录调控机制研究的重要位点.

关键词：基因,IRX1 启动子报告基因胃黏膜细胞

联合检测胃黏膜细胞内环磷酸腺苷与环磷酸鸟苷对胃癌诊断价值的研究

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中国现代医学杂志 2013年第23期23卷 45-47页

作者：易艳军蒋显勇郑薇薇袁才佳陈婕湘南学院医学检验系湖南郴州423000 湖南省郴州市中医院湖南郴州423000

目的探讨胃黏膜细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及cAMP/cGM P(CA/CG)比值的测定对诊断胃癌的临床意义。方法 120例因胃肠道症状接受胃镜检查配合活检确诊,分为慢性胃炎组42例,溃疡病组38例,胃癌组40例。用酶联免疫法(ELISA)... 详细信息

目的探讨胃黏膜细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及cAMP/cGM P(CA/CG)比值的测定对诊断胃癌的临床意义。方法 120例因胃肠道症状接受胃镜检查配合活检确诊,分为慢性胃炎组42例,溃疡病组38例,胃癌组40例。用酶联免疫法(ELISA)测定胃黏膜细胞中cAMP、cGMP和CA/CG比值。结果40例胃癌患者胃黏膜细胞中cAM P、cGM P、CA/CG分别为(458.75±101.25)pmol/g湿组织、(25.25±9.75)pmol/g湿组织和(18.17±10.38),其中cGM P、CA/CG指标胃癌组与慢性胃炎组及溃疡病组相比差别有统计学意义(P0.05)。结论联合检测胃黏膜细胞中cGMP及CA/CG对胃癌的诊断有重要临床意义。

关键词：胃黏膜细胞环磷酸腺苷环磷酸鸟苷 CA CG 胃癌

萎平舒胶囊对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜细胞自噬水平的影响

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陕西中医药大学学报 2020年第6期43卷 53-58页

作者：宋媛媛杨龙刘越洋王玥张鹏黄雅慧西安市中医医院陕西西安710001

目的探讨萎平舒胶囊对慢性萎缩性胃炎伴异型增生模型大鼠胃黏膜细胞自噬水平的影响。方法60只Wistar大鼠中,随机选取8只作为正常对照组,其余以MNNG诱导法建立大鼠胃粘膜萎缩伴肠化的模型。随机分为模型组、萎平舒低剂量组、萎平舒高剂量... 详细信息

目的探讨萎平舒胶囊对慢性萎缩性胃炎伴异型增生模型大鼠胃黏膜细胞自噬水平的影响。方法60只Wistar大鼠中,随机选取8只作为正常对照组,其余以MNNG诱导法建立大鼠胃粘膜萎缩伴肠化的模型。随机分为模型组、萎平舒低剂量组、萎平舒高剂量组,分别观察大鼠胃黏膜组织病理学变化、胃窦胃体黏膜与肌层厚度变化,各组大鼠胃黏膜上皮细胞中自噬小体的变化。结果与模型组比较,萎平舒胶囊低、高剂量组窦部的胃粘膜厚度及肌层厚度与模型组比较显著增厚(P细胞质内可见到较多的次级溶酶体,自噬样小体数量较模型组较多。结论萎平舒胶囊能明显改善胃粘膜上皮细胞形态异常及腺体萎缩,可使胃黏膜上皮细胞内自噬小体数量增多。

关键词：萎平舒胶囊慢性萎缩性胃炎胃黏膜细胞自噬水平健脾活血

Nesfatin-1对离体胃黏膜细胞胃酸分泌的影响

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世界华人消化杂志 2012年第13期20卷 1123-1130页

作者：李静慧李学良吴静贾方圆林琳南京医科大学第一附属人民医院消化科江苏省南京市210029

目的:研究nesfatin-1对离体培养的大鼠胃黏膜酸分泌的影响,探讨nesfatin-1对H+/K+-ATP酶mRNA及蛋白表达的影响.方法:酶解法分离大鼠胃黏膜细胞,细胞免疫荧光检测法鉴定细胞.用不同浓度的nesfatin-1(10-4-10-1μmol/L)对胃黏膜细胞进行处... 详细信息

目的:研究nesfatin-1对离体培养的大鼠胃黏膜酸分泌的影响,探讨nesfatin-1对H+/K+-ATP酶mRNA及蛋白表达的影响.方法:酶解法分离大鼠胃黏膜细胞,细胞免疫荧光检测法鉴定细胞.用不同浓度的nesfatin-1(10-4-10-1μmol/L)对胃黏膜细胞进行处理0、1、2、3、4h,设立空白对照组,以14C-氨基比林摄取为酸分泌指标,检测nesfatin-1对大鼠离体的胃黏膜细胞酸分泌的影响.用RT-PCR法及Western印迹法检测nesfatin-1对胃黏膜细胞H+/K+-ATP酶alpha(α)亚基和beta(β)亚基mRNA及蛋白表达的影响.结果:Nesfatin-1在10-1μmol/L浓度下,在1、2h能够抑制离体培养的大鼠胃黏膜细胞的酸分泌.Nesfatin-1(10-1μmol/L)在1、2、3h均能够抑制H+/K+-ATP酶α亚基mRNA表达水平;在1、2h能够抑制H+/K+-ATP酶β亚基mRNA表达水平,分别与对照组相比,差异有统计学意义(均P胃黏膜细胞2h时,呈剂量依赖性抑制α亚基和β亚基mRNA表达水平,分别与对照组相比,差异有统计学意义(均P胃黏膜细胞2h时,呈剂量依赖性抑制α亚基和β亚基蛋白表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义(均P胃黏膜细胞的酸分泌,有可能是通过下调H+/K+-ATP酶α亚基和β亚基的mRNA及蛋白表达的水平影响酸分泌.

关键词： Nesfatin-1 胃酸胃黏膜细胞 H+K+-ATP酶

外源性硫化氢对人胃黏膜细胞GES-1增殖的影响

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国际免疫学杂志 2020年第4期43卷 376-381页

作者：伦志强王玉沈云虹李宇邓志会齐齐哈尔医学院基础医学院细胞生物学教研室黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院基础医学院机能实验教学中心黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院基础医学院病理生理学教研室黑龙江齐齐哈尔161006

目的探究硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)对人胃黏膜细胞GES-1(gastric mucosal epithelial,GES-1)增殖的影响。方法将不同浓度(0,25,100,400,800和1600μmol/L)的硫氢化钠(NaHS)分别作用于胃黏膜GES-1细胞24、48和72 h并按此分组,噻唑蓝[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞的增殖水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞内H2S的含量。结果MTT结果显示,浓度为800μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-124、48、72 h时,增殖率分别为(97.67±5.03)%、(77.66±3.51)%、(63.00±2.00)%。浓度为1600μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-124、48、72 h时,增殖率分别为(89.67±7.51)%、(70.00±4.00)%、(54.00±2.00)%。ELISA结果显示,当浓度为800μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-124、48和72 h时,GES-1产生的H2S浓度分别分别为(8.73±0.44)、(13.22±0.86)、(17.31±1.05)μmol/L。当浓度为1600μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-124、48、72 h时,GES-1产生的H2S浓度分别为(13.15±0.46)、(19.01±0.28)、(22.68±0.65)μmol/L。统计分析显示,当浓度为800μmol/L和1600μmol/L的NaHS作用胃黏膜细胞GES-1时,48 h作用组和72 h作用组与24 h作用组比较,胃黏膜细胞GES-1增殖均降低,差异均具有统计学意义(P值均胃黏膜细胞GES-1产生的H2S浓度明显增高,差异均具有统计学意义(P值均细胞的增殖与NaHS浓度呈负相关(r=-0.558,P细胞产生的H2S浓度与NaHS浓度呈正相关(r=0.868,P细胞的增殖与细胞产生的H2S浓度具有负相关(r=-0.863,P细胞产生H2S,抑制GES-1细胞增殖,且呈浓度依赖性。

关键词：硫化氢硫氢化钠胃黏膜细胞增殖

针灸足三里穴对胃溃疡大鼠PLCγ-1及胃黏膜细胞活性的影响

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新中医 2021年第7期53卷 123-126页

作者：宋淑娟郝润春刘君颖武警河南省总队医院消化内科河南郑州450000

目的:探讨针灸足三里穴对胃溃疡大鼠磷脂酶C-γ1 (PLCγ-1)及胃黏膜细胞活性的影响。方法:将30只大鼠分为正常组、胃溃疡组及干预组,每组10只,除正常组外,其余2组建立胃溃疡模型,干预组采用针刺足三里等穴位处理。采用苏木精-伊红染色(... 详细信息

目的:探讨针灸足三里穴对胃溃疡大鼠磷脂酶C-γ1 (PLCγ-1)及胃黏膜细胞活性的影响。方法:将30只大鼠分为正常组、胃溃疡组及干预组,每组10只,除正常组外,其余2组建立胃溃疡模型,干预组采用针刺足三里等穴位处理。采用苏木精-伊红染色(HE)法检测各组大鼠胃组织病理;酶联免疫吸附法检测各组大鼠眼眶静脉血炎症因子;TUNEL法检测各组大鼠胃黏膜细胞凋亡率;免疫组化法检测各组大鼠胃组织PLCγ-1表达。结果:正常组大鼠胃组织无坏死,无炎症浸润;胃溃疡组胃组织排列紊乱,溃疡局部呈现扩张,并出现增生结缔组织,血管结构紊乱;与胃溃疡组比较,干预组溃疡部位炎症及坏死部位减轻,肉芽覆盖溃疡。与正常组比较,胃溃疡组大鼠血清白细胞介素-8 (IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及胃黏膜细胞凋亡率升高(P胃黏膜细胞凋亡率降低(P胃黏膜细胞凋亡,降低炎性因子水平,且可能与激活PLCγ-1活性相关。

关键词：胃溃疡针灸足三里穴胃黏膜细胞 PLCγ-1 动物实验大鼠

电针胃经穴对大鼠胃黏膜细胞ERK免疫组化的影响

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辽宁中医杂志 2011年第7期38卷 1443-1445页

作者：杨宗保吴璇乔玉丹吴海霞熊云曹婧瑜江西中医学院江西南昌330006

目的:探讨电针大鼠胃经穴对胃黏膜细胞细胞外信号调节激酶(ERK)免疫组化的影响。方法:72只大鼠随机分为6组,利用链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,分别用PD153035和100mL/L血清孵育胃黏膜细胞,免疫组化法检测ERK的表达。结果:胃经组和胆... 详细信息

目的:探讨电针大鼠胃经穴对胃黏膜细胞细胞外信号调节激酶(ERK)免疫组化的影响。方法:72只大鼠随机分为6组,利用链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,分别用PD153035和100mL/L血清孵育胃黏膜细胞,免疫组化法检测ERK的表达。结果:胃经组和胆经组胃黏膜细胞ERK的表达明显高于正常组和模型组(P胃黏膜细胞ERK的表达与胆经组比较显著增强(P胃黏膜细胞ERK的表达明显低于胃经组(P胃黏膜细胞ERK的表达,ERK可能是胃经与胃相关的客观物质基础之一。

关键词：电针胃黏膜细胞 ERK 免疫组化

电针胃经穴的大鼠血清上调胃黏膜细胞ERK磷酸化

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基础医学与临床 2009年第2期29卷 135-138页

作者：杨宗保严洁易受乡常小荣钟艳江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西南昌330004 湖南中医药大学针灸推拿学院湖南长沙410007

目的探讨电针胃经穴的大鼠血清对胃黏膜细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法72只大鼠随机分为正常组、模型组、胃经组、胆经组、胃经+PD153035组和胆经+PD153035组,链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,分别用表皮生长因子受体(EGFR... 详细信息

目的探讨电针胃经穴的大鼠血清对胃黏膜细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法72只大鼠随机分为正常组、模型组、胃经组、胆经组、胃经+PD153035组和胆经+PD153035组,链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂PD153035和100 mL/L血清孵育胃黏膜细胞,W estern b lot检测ERK的磷酸化。结果胃经组和胆经组胃黏膜细胞ERK磷酸化明显高于正常组和模型组(P胃黏膜细胞ERK磷酸化明显高于胆经组(P胃黏膜细胞ERK磷酸化明显低于胃经组(P胃黏膜细胞ERK的磷酸化水平,并且存在经脉-脏腑的特异性联系。

关键词：电针血清胃黏膜细胞 ERK 磷酸化