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斑马鱼肿瘤脑转移模型的构建与应用

斑马鱼肿瘤脑转移模型的构建与应用

作者：董其燕华中农业大学

学位级别：硕士

恶性肿瘤现已成为我国居民的主要死亡原因。转移是恶性肿瘤难治、易复发的主要原因,其中肿瘤脑转移是恶性肿瘤转移的最严重后果之一,一旦发生脑转移,预后非常差,5年存活率极低。因此,研究肿瘤细胞脑转移机制对于我国癌症病人来说具有重... 详细信息

恶性肿瘤现已成为我国居民的主要死亡原因。转移是恶性肿瘤难治、易复发的主要原因,其中肿瘤脑转移是恶性肿瘤转移的最严重后果之一,一旦发生脑转移,预后非常差,5年存活率极低。因此,研究肿瘤细胞脑转移机制对于我国癌症病人来说具有重要意义。黑素瘤、肺癌和乳腺癌是最易发生脑转移的三种癌症。本课题旨在应用模式动物斑马鱼,建立用于肿瘤脑转移机制研究的活体模型,并进一步探索肿瘤脑转移的分子机制以及肿瘤细胞外泌体在肿瘤脑转移中的作用。研究结果总结如下:1.在血脑屏障形成前(2dpf)、后(4dpf)的斑马鱼胚胎心包腔部位注射带有红色荧光标记的鼠源性黑素瘤细胞tfRFP-B16-F10,对肿瘤细胞的转移进行检测和统计:胚胎存活率、注射部位含有肿瘤细胞团的数目和各个部位包括头部、躯干、尾部的转移灶数目,以及总体转移灶数目。同时我们选取移植后的幼鱼进行活体成像实验,实时观察肿瘤细胞突破血脑屏障(Brain-Blood-Barrier,BBB)进入脑组织的过程,我们发现肿瘤细胞是通过不断地变形穿过脑内皮细胞间隙进入脑实质,在脑内皮细胞间紧密连接出现以后,肿瘤细胞的脑转移率大大降低,而紧密连接正是血脑屏障实现其功能的主要一部分,因此,我们得出结论:血脑屏障在抑制肿瘤细胞脑转移的过程中发挥了重要作用,另外,通过对发生脑转移2d后的斑马鱼幼鱼进行长时程转盘共聚焦拍摄,我们发现脑转移的肿瘤细胞沿着血管壁扩增延伸,细胞集群不断扩大,这与之前文献报道的脑转移生长情况相符,而且通过本部分实验,我们成功建立了研究肿瘤脑转移的斑马鱼模型。2.在血脑屏障开始形成后即3dpf的斑马鱼幼鱼心包腔部位注射3-D纤维软胶培养富集的tfRFP-B16-F10高致瘤性细胞和普通培养的tfRFP-B16-F10肿瘤细胞,分别统计注射不同培养肿瘤细胞的胚胎存活率、注射部位肿瘤细胞团的数目和各个部位包括头部、躯干、尾部的转移灶数目,以及总体转移灶数目。数据统计结果表明3-D纤维软胶培养的高致瘤性细胞无论是总体转移率还是脑转移率都要高于普通培养瓶培养的肿瘤细胞。因此,高致瘤性细胞的转移潜能更强。另外,我们利用荧光显微镜连续观察同一条幼鱼体内转移的肿瘤细胞,可以很明显的观察肿瘤细胞在转移部位的生长。3.外泌体是30-100um的囊泡结构,在肿瘤细胞转移过程中起重要作用,然而对于其作用机制的了解还不全面,因此我们拟利用本课题所建立的肿瘤脑转移斑马鱼模型研究外泌体促进脑转移的分子机制。我们利用DiI荧光染料使体外提取的外泌体带上红色荧光,将DiI-exosomes注射进2dpf的斑马鱼胚胎心包腔部位,利用转盘共聚焦显微镜观察外泌体与血脑屏障脑内皮细胞间的相互作用,我们发现外泌体可以被绿色荧光标记的脑微血管内皮细胞吸收,并且红色荧光与脑内皮细胞的绿色荧光存在共定位长达4h甚至更长,结果说明外泌体与脑内皮细胞间存在相互作用,而这种相互作用很可能对肿瘤细胞穿过血脑屏障具有重要影响。我们先后尝试了5次tfRFP-B16-F10及其外泌体的共注射以及1次非小细胞肺癌细胞A549及其外泌体的共注射,监测脑转移,并进行统计分析,然而实验结果与预期有较大出入,我们需要探究新的建模方式来构建斑马鱼模型研究外泌体对肿瘤细胞脑转移的影响。

关键词：肿瘤脑转移斑马鱼血脑屏障外泌体

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放疗在脑转移性肿瘤中的应用及其进展

中华放射肿瘤学杂志 2008年第4期17卷 321-325页

作者：周麟刘佳卢铀四川大学华西医院肿瘤中心胸部肿瘤科成都610041

脑转移性肿瘤是目前颅内最常见的恶性疾患，与原发脑肿瘤的发病率比约为10：1，随着MRI的广泛应用和肿瘤患者生存期的延长其发病率不断升高。肿瘤脑转移最常见于小细胞肺癌和非小细胞肺癌（50％）、乳腺癌（15％～20％）、恶性黑色素瘤... 详细信息

脑转移性肿瘤是目前颅内最常见的恶性疾患，与原发脑肿瘤的发病率比约为10：1，随着MRI的广泛应用和肿瘤患者生存期的延长其发病率不断升高。肿瘤脑转移最常见于小细胞肺癌和非小细胞肺癌（50％）、乳腺癌（15％～20％）、恶性黑色素瘤（10％），其脑转移率分别为50％和21％～25％、21％、48％；非小细胞肺癌中病理类型为腺癌、

关键词：脑转移性肿瘤非小细胞肺癌放疗恶性黑色素瘤发病率比原发脑肿瘤肿瘤脑转移恶性疾患

肿瘤脑转移患者的全脑放射治疗在新治疗的背景下优化使用和适用范围

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英国医学杂志中文版 2017年第5期20卷 245-246页

作者：郭鲜花祁伟祥陆嘉德《中华放射医学与防护杂志》编辑部中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所

最近一项非劣效性试验报告表明，与皮质类固醇和支持疗法相比，全脑放疗并无法改善伴脑转移的非小细胞肺癌（NSCLC）成年患者的生存或生活质量。脑转移治疗后生活质量试验（Quality of Lifeafter Treatment for Brain Metastases，QUART... 详细信息

最近一项非劣效性试验报告表明，与皮质类固醇和支持疗法相比，全脑放疗并无法改善伴脑转移的非小细胞肺癌（NSCLC）成年患者的生存或生活质量。脑转移治疗后生活质量试验（Quality of Lifeafter Treatment for Brain Metastases，QUARTZ）是一项实效性临床试验，具有宽泛的人组合格标准，但其538例患者均不适合手术治疗或立体定向放射治疗（stereotactic radiosurgery，SRS），仅当临床医师和患者对全脑放射治疗的潜在获益不确定时，才被纳入。许多参与者的总体健康状态和日常生活功能较差，在这种水平的患者通常会被临床试验排除在外。

关键词：肿瘤脑转移全脑放射治疗皮质类固醇非小细胞肺癌

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三维适形放射治疗恶性肿瘤脑转移疗效观察

山西医药杂志（上半月） 2008年第1期37卷 75-77页

作者：郁玮玮陈不尤南通大学附属医院 226001

随着恶性肿瘤诊断手段和治疗方法的不断发展和改进,一部分恶性肿瘤患者得以长期存活。但肿瘤的远处转移仍然是肿瘤致死的主要原因,大约有20%－40%的恶性肿瘤患者发生脑转移。其传统的治疗方法主要为手术、单纯全脑放疗、化疗及激素加脱... 详细信息

随着恶性肿瘤诊断手段和治疗方法的不断发展和改进,一部分恶性肿瘤患者得以长期存活。但肿瘤的远处转移仍然是肿瘤致死的主要原因,大约有20%－40%的恶性肿瘤患者发生脑转移。其传统的治疗方法主要为手术、单纯全脑放疗、化疗及激素加脱水治疗,但疗效有限。近十几年来,随着放射治疗技术的发展,三维适形放射活疗已广泛用于脑转移的治疗,并已证实较全脑放疗能够明显提高局控率、改善患者的生存质量。[第一段]

关键词：三维适形放射治疗恶性肿瘤患者肿瘤脑转移疗效观察放射治疗技术治疗方法全脑放疗长期存活

放疗同步丹参川芎嗪注射液在肿瘤脑转移治疗中应用

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世界最新医学信息文摘 2017年第10期17卷 11-12页

作者：薛志东江苏省泰州市人民医院

目的探讨放疗同步丹参川芎嗪注射液在肿瘤脑转移中的治疗效果。方法从2013年5月-2015年5月期间收治的肿瘤脑转移患者中,选取80例作为研究对象,按照入院顺序分为单号作为对照组(n=40),双号作为观察组(n=40),对照组患者采用放射治疗,观察... 详细信息

目的探讨放疗同步丹参川芎嗪注射液在肿瘤脑转移中的治疗效果。方法从2013年5月-2015年5月期间收治的肿瘤脑转移患者中,选取80例作为研究对象,按照入院顺序分为单号作为对照组(n=40),双号作为观察组(n=40),对照组患者采用放射治疗,观察组患者采用放疗同步丹参川芎嗪注射液治疗,将研究情况纳入结果中。结果 (1)两组临床疗效比较:和对照组患者相比,观察组患者临床治疗有效率明显提高(P0.05),观察组患者记忆力降低发生率显著低于对照组(P肿瘤脑转移患者,采用放疗同步丹参川芎嗪注射液治疗,有利于提高治疗有效率,减少不良反应,延长生存时间,值得临床进一步推广和应用。

关键词：肿瘤脑转移放射治疗丹参川芎嗪注射液临床效果

脑脊液脱落细胞检查在恶性肿瘤脑转移诊断中的应用

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中国实验诊断学 2008年第9期12卷 1157-1158页

作者：曲灿华周丽艳李升佳木斯大学附属第一医院黑龙江佳木斯154003

正常时脑脊液细胞很少,主要为单核细胞和淋巴细胞.当恶性肿瘤发生脑转移时,肿瘤细胞可脱落于脑脊液中,对脑脊液进行脱落细胞检查,根据细胞形态,可发现恶性肿瘤细胞,典型病例可诊断恶性肿瘤的类型,并通过CT、核磁、B超、内窥镜、病理等方... 详细信息

正常时脑脊液细胞很少,主要为单核细胞和淋巴细胞.当恶性肿瘤发生脑转移时,肿瘤细胞可脱落于脑脊液中,对脑脊液进行脱落细胞检查,根据细胞形态,可发现恶性肿瘤细胞,典型病例可诊断恶性肿瘤的类型,并通过CT、核磁、B超、内窥镜、病理等方法,找到原发病灶并加以证实.

关键词：恶性肿瘤细胞脑脊液细胞脱落细胞检查肿瘤脑转移诊断淋巴细胞单核细胞肿瘤发生

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非小细胞肺癌脑转移的治疗策略与相关问题

中国肿瘤临床 2015年第19期42卷 947-952页

作者：唐菲周麟卢铀四川大学华西临床医学院成都市610041 四川大学华西医院胸部肿瘤科

非小细胞肺癌脑转移是影响非小细胞肺癌患者生存期及生存质量的重要因素。目前,传统治疗的发展、小分子靶向药物的广泛应用以及各种联合治疗方式的采用共同影响着脑转移患者的疗效及预后。对新治疗靶点的研究以及对现有治疗的认知功能... 详细信息

非小细胞肺癌脑转移是影响非小细胞肺癌患者生存期及生存质量的重要因素。目前,传统治疗的发展、小分子靶向药物的广泛应用以及各种联合治疗方式的采用共同影响着脑转移患者的疗效及预后。对新治疗靶点的研究以及对现有治疗的认知功能保护措施的探索也愈加为临床所关注。本文就非小细胞肺癌脑转移临床及基础的相关问题和治疗策略进行简要的梳理。

关键词：非小细胞肺癌肿瘤脑转移放射治疗靶向治疗分子机制脑损伤脑坏死