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中华肿瘤杂志 2023年第2期45卷 129-137页

作者：何若凡王琴林春霖林鹏航陈辉黄永建杨树钢叶建新朱广伟福建医科大学附属第一医院胃肠外科二区腹部外科研究所肿瘤精准诊疗重点实验室福州350005 福建医科大学消化道恶性肿瘤教育部重点实验室福州350005

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)第331位泛素化位点突变对结直肠癌细胞生物学特征的影响及其相关机制。方法将带有绿色荧光蛋白标签的TRAF6基因表达质粒的慢病毒(pCDH-3×FLAG-TRAF6)和突变质粒慢病毒(pCDH-3×FLAG-TRAF6-331... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)第331位泛素化位点突变对结直肠癌细胞生物学特征的影响及其相关机制。方法将带有绿色荧光蛋白标签的TRAF6基因表达质粒的慢病毒(pCDH-3×FLAG-TRAF6)和突变质粒慢病毒(pCDH-3×FLAG-TRAF6-331mut)分别感染结直肠癌细胞SW480和HCT116,荧光显微镜观察细胞感染情况,Western blot检测TRAF6和TRAF6-331mut在细胞中的表达。采用细胞计数试剂盒8法和平板克隆实验检测TRAF6组和TRAF6-331mut组结直肠癌细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,免疫共沉淀方法检测TRAF6和TRAF6-331mut与泛素的赖氨酸结合位点K48和K63的泛素化作用,Western blot检测过表达TRAF6和TRAF6-331mut对核因子κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/激活蛋白1(AP-1)信号通路的影响。结果荧光显微镜下观察到病毒成功感染结直肠癌细胞。Western blot检测显示,TRAF6和TRAF6-331mut在结直肠癌细胞中成功表达。CCK-8法检测结果显示,到第4天,TRAF6-331mut组HCT116和SW480细胞的A值分别为1.89±0.39和1.88±0.24,均低于TRAF6组(分别为2.09±0.12和2.17±0.45,P值分别为0.036和0.011)。平板克隆形成实验结果显示,TRAF6-331mut组HCT116和SW480细胞的克隆数分别为(120±14)个和(85±14)个,均低于TRAF6组[分别为(190±21)个和(125±13)个,P值分别为0.001和0.002]。细胞划痕实验结果显示,48 h后,TRAF6-331mut组HCT116和SW480细胞的伤口愈合距离百分比分别为(31±12)%和(33±14)%,均低于TRAF6组[分别为(43±13)%和(43±7)%,P值分别为0.005和0.009]。Transwell迁移实验结果显示,TRAF6-331mut组HCT116和SW480细胞的迁移数分别为(104±13)个和(107±12)个,均低于TRAF6组[分别为(172±19)个和(138±16)个,P值分别为6-331mut组HCT116和SW480细胞的穿膜数分别为(103±17)个和(92±13)个,均低于TRAF6组[分别为(177±20)个和(127±18)个,P值分别为0.008和0.009]。免疫共沉淀法检测结果显示,在与K48共转染的293T细胞中,被TRAF6-331mut下拉的K48链泛素蛋白的表达量为0.57±0.19,低于野生型TRAF6下拉的K48链泛素蛋白的表达量(0.84±0.04,P=0.014);在与K63共转染的293T细胞中,被TRAF6-331mut下拉的K63链泛素蛋白的表达量为0.31±0.13,低于野生型TRAF6下拉的K63链泛素蛋白的表达量(0.89±0.08,P6-331mut-HCT116细胞中NF-κB、p-NF-κB和p-AP-1蛋白表达水平分别为0.63±0.08、0.42±0.08和0.60±0.07,低于TRAF6-HCT116细胞(均为1.00±0.00,P值分别为0.002、6,与TRAF6-HCT116细胞(1.00±0.00)比较,差异无统计学意义(P=0.051);TRAF6-331mut-SW480细胞中NF-κB、p-NF-κB和p-AP-1蛋白表达水平分别为0.50±0.06、0.51±0.04和0.48±0.02,低于TRAF6-SW480细胞(均为1.00±0.00,均P6,与TRAF6-SW480细胞(1.00±0.00)比较,差异无统计学意义(P=0.087)。结论TRAF6基因第331泛素化位点突变可能阻止了TRAF6与泛素赖氨酸位点K48和K63的结合,进而影响下游NF-κB和MAPKs/AP-1信号通路相关蛋白的表达,抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

关键词：结直肠肿瘤肿瘤坏死因子受体相关因子6 泛素化突变核因子κB 激活蛋白1

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吉林大学学报（医学版） 2021年第3期47卷 551-558页

作者：王琴林春霖程志彬何若凡林鹏航陈辉叶建新朱广伟福建医科大学附属第一医院胃肠外科二区腹部外科研究所福建福州350005 福建医科大学消化道恶性肿瘤教育部重点实验室福建福州350005

目的:预测人肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因上的泛素化位点,并构建泛素化位点突变质粒,探讨突变质粒对人结直肠癌HCT116和SW480细胞中核因子κB(NF-κB)和激活蛋白1(AP-1)相对荧光素酶活性的影响。方法:采用UbPred、UbiSite和BDM... 详细信息

目的:预测人肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因上的泛素化位点,并构建泛素化位点突变质粒,探讨突变质粒对人结直肠癌HCT116和SW480细胞中核因子κB(NF-κB)和激活蛋白1(AP-1)相对荧光素酶活性的影响。方法:采用UbPred、UbiSite和BDM-PUB软件预测TRAF6基因的泛素化位点,采用CE Design V1.04软件设计突变引物,采用突变试剂盒进行定点突变,采用PCR法扩增获得突变后的目的片段,扩增产物经Dpnl酶消化,去除甲基化模板质粒,消化产物在ExnaseⅡ催化作用下发生同源重组获得重组质粒;将重组质粒转化至DH5α大肠杆菌感受态细胞,对重组质粒进行DNA测序。采用双荧光素酶报告基因系统检测转染突变质粒后HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性。结果:经过DNA测序,泛素化突变位点已经成功突变,泛素化突变质粒构建成功。与TRAF6野生型基因比较,转染第124、319和331位突变质粒后,结直肠癌HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性降低(P6和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性降低最明显(P6基因的泛素化突变质粒,TRAF6的第124位氨基酸是其最重要的泛素化位点,可能影响下游信号通路中NF-κB和AP-1的活性。

关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6 突变质粒构建泛素化荧光素酶报告系统核因子κB 激活蛋白1

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北京中医药大学学报 2017年第12期40卷 1030-1036页

作者：古联陈子文苏莉严雁吴光亮梁宝云谭金晶唐农广西中医药大学第一附属医院广西530023 广西中医药大学广西医科大学公共卫生学院广州中医药大学第二临床医学院

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因多态性与中风不同证型遗传易感性以及炎性反应相关数量性状的关联。方法本研究采用病例-对照设计,纳入中风风痰瘀阻证者311例、气虚血瘀证者284例、性别年龄相匹配的对照组605例。采用实... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因多态性与中风不同证型遗传易感性以及炎性反应相关数量性状的关联。方法本研究采用病例-对照设计,纳入中风风痰瘀阻证者311例、气虚血瘀证者284例、性别年龄相匹配的对照组605例。采用实时荧光定量PCR(RTPCR)方法检测了TRAF6 mRNA表达水平,运用Sequenom Mass ARRAY i PLEX平台对TRAF6基因rs5030411、rs5030416两个多态性位点进行基因分型,采用酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定炎性细胞因子血清水平。用PLINK、SPSS软件进行统计学分析。结果中风风痰瘀阻证、气虚血瘀证患者的TRAF6 mRNA表达水平均显著高于对照组(P6基因rs5030416多态性与中风风痰瘀阻证的易感性存在统计学关联(P=0.030),rs5030411多态性与中风易感性无统计学关联(P>0.050)。携带rs5030411 CT基因型的风痰瘀阻证患者的白细胞介素-1b(interleukin-1b,IL-1b)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)血清水平显著高于其他基因型携带者。风痰瘀阻证患者的IL-1b、IL-6血清水平显著高于对照组(P6基因rs5030416多态性可能影响中风风痰瘀阻证的发生,而rs5030411多态性可能参与调节风痰瘀阻证的炎性反应过程。

关键词：中风肿瘤坏死因子受体相关因子6 单核苷酸多态性 mRNA 炎性细胞因子

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肿瘤坏死因子受体相关因子6基因沉默对成牙本质细胞增殖能力的影响

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中华口腔医学杂志 2014年第7期49卷 428-433页

作者：李霞肖明振余擎赵彬李卫星山西医科大学口腔医院牙体牙髓病科太原030001 第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病科军事口腔医学国家重点实验室

目的研究小干扰RNA （small interfering RNA,siRNA）抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6 （tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6）的表达后,对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖能力的影响,以期构建TRAF6基因沉默... 详细信息

目的研究小干扰RNA （small interfering RNA,siRNA）抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6 （tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6）的表达后,对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23增殖能力的影响,以期构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型,并阐明TRAF6对成牙本质细胞增殖的调控作用.方法将针对TRAF6基因的siRNA真核表达载体pSUPER-TRAF6siRNA转染MDPC-23（转染组）,空载体对照组采用pSUPER空载体质粒,空白对照组MDPC-23细胞不转染任何质粒,采用氨基糖苷类抗生素G418抗性筛选,挑选克隆株;反转录PCR （reverse transcription-PCR,RT-PCR）和蛋白质印迹法检测TRAF6的mRNA和蛋白表达;通过绘制细胞生长曲线、甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTr）、流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测转染前后细胞增殖能力的变化.结果 MDPC-23细胞转染pSUPER-TRAF6siRNA后,可以稳定表达克隆株,其TRAF6mRNA和蛋白表达水平与两个对照组相比均显著下降[mRNA：转染组为0.163±0.008,空载体对照组为0.778±0.017,空白对照组为0.782±0.004,P＜0.000 1;蛋白质印迹法：转染组为0.215±0.006,空载体对照组为0.964±0.007,空白对照组为0.973±0.013,P＜0.001];稳定转染TRAF6siRNA的单克隆株3、5d时,转染组A值为0.46±0.03和1.35±0.06,均显著高于相同时间点的空载体对照组和空白对照组（P＜0.01）;转染组的细胞增殖指数（proliferation index,PrI）[（24.1±2.2）％]均显著高于空载体对照组[（11.2±1.0）％]和空白对照组[（10.5±0.7）％]（P＜0.01）.结论稳定转染pSUPER-TRAF6siRNA后可以显著降低MDPC-23细胞中TRAF6的表达,表明构建TRAF6基因沉默的成牙本质细胞模型成功;TRAF6基因沉默可以使MDPC-23细胞的增殖能力增强,将影响成牙本质细胞形成和修复牙本质的能力,表明TRAF6是调控牙本质发育及损伤修复过程的重要信号分子.

关键词： RNA干扰转染细胞增殖肿瘤坏死因子受体相关因子6

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肿瘤坏死因子受体相关因子6与骨代谢的研究进展

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中国骨质疏松杂志 2017年第2期23卷 272-276页

作者：张群燕郭郡浩蔡辉南京军区南京总医院中西医结合科江苏南京210002

TRAF6是肿瘤坏死因子受体相关因子家族(TRAFs)中既可与肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族结合,又可与白细胞介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLR)超家族相互作用来传递细胞外信号的一种细胞内接头蛋白,在炎症反应、免疫应答、骨代谢中发挥着重... 详细信息

TRAF6是肿瘤坏死因子受体相关因子家族(TRAFs)中既可与肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族结合,又可与白细胞介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLR)超家族相互作用来传递细胞外信号的一种细胞内接头蛋白,在炎症反应、免疫应答、骨代谢中发挥着重要作用。本文现就TRAF6在骨代谢中的研究进展作一综述。

关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6 破骨细胞成骨细胞骨质疏松

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陕西医学杂志 2023年第11期52卷 1598-1601页

作者：冯一平袁浩鑫曾尚云王思雨大同市第五人民医院妇科山西大同037009

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组:对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表... 详细信息

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组:对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表达组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染TRAF6过表达质粒);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测TRAF6 mRNA以及蛋白表达情况;Transwell实验、划痕实验以及裸鼠移植瘤实验检测细胞侵袭、迁移能力;WB检测上皮间质转化标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:相较于人子宫内膜上皮细胞,子宫内膜癌细胞Ishikawa中TRAF6 mRNA和蛋白表达显著降低(均P6高表达组的TRAF6 mRNA水平和蛋白表达显著升高,细胞侵袭、迁移能力和Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低,Occludin、E-cadherin蛋白表达显著升高(均P0.05)。结论:上调子宫内膜癌细胞中TRAF6的表达,可抑制上皮间质转化过程,减弱子宫内膜癌细胞的侵袭和迁移能力,TRAF6在子宫内膜的发生发展中具有重要的调节作用。

关键词：子宫内膜癌肿瘤坏死因子受体相关因子6 细胞侵袭细胞迁移上皮间质转化实验研究

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肿瘤坏死因子受体相关因子6基因多态性与脓毒症易感性研究

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中华急诊医学杂志 2010年第9期19卷 904-908页

作者：方宇张璐周钢桥王志富冯凯罗志毅庞伟李垒凌焱李玉霞刘保池郑州大学第一附属医院急诊科郑州450052 郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质组研究中心国家重点实验室解放军306医院中心实验室复旦大学附属公共卫生临床中心军事医学科学院生物工程研究所

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）基因多态性位点与脓毒症发生风险及疾病严重程度的关联性.方法采用HapMap单倍型标签SNPs（htSNPs）策略和SNPstream分型方法,对255例脓毒症患者和260例对照个体进行分型.采用Logistic回归... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）基因多态性位点与脓毒症发生风险及疾病严重程度的关联性.方法采用HapMap单倍型标签SNPs（htSNPs）策略和SNPstream分型方法,对255例脓毒症患者和260例对照个体进行分型.采用Logistic回归分析,校正性别、年龄、吸烟、饮酒、慢性病状态、APACHEⅡ评分和脓毒症病因等混杂因素,评价TRAF6多态性位点与脓毒症的发生风险,以及脓毒症性休克、死亡和器官功能障碍的遗传相关性.结果 TRAF6基因在中国人群中共捕获7个htSNPs.rs5030490,rs5030411,rs5030416,rs5030445和rs3740961最终用于分型研究.5个htSNPs位点在病例和对照组中的基因型分布均呈哈-温平衡状态.TRAF6多态性位点与脓毒症的发生风险和疾病严重程度均无明显相关性.结论在中国人群中,TRAF6基因多态性位点在脓毒症的发生、发展和病程转归中可能不发挥重要作用.

关键词：脓毒症肿瘤坏死因子受体相关因子6 单倍型标签单核苷酸多态性连锁不平衡遗传关联

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肿瘤坏死因子受体相关因子6的表达对食管鳞状细胞癌预后的影响

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安徽医药 2020年第6期24卷 1195-1198,I0005页

作者：杨兰艳殷芳王建刚孔娜云南省第三人民医院消化内科云南昆明650000

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达与复发和生存的关系。方法选取2012年12月至2014年2月在云南省第三人民医院接受根治性切除术治疗的经病理证实为ESCC的病人478例作为研究对象。采用免疫组... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达与复发和生存的关系。方法选取2012年12月至2014年2月在云南省第三人民医院接受根治性切除术治疗的经病理证实为ESCC的病人478例作为研究对象。采用免疫组织化学法检测ESCC病人癌组织中TRAF6的表达。并探讨TRAF6的表达与ESCC病人复发和生存的相关性。结果478例ESCC病人中,341例(71.3%)符合TRAF6表达阳性标准。TRAF6表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),但是与ESCC病人的TNM分期、淋巴结转移、复发和死亡状况显著相关(P6阳性表达率高。进一步分析发现,TRAF6阳性表达的ESCC病人复发和死亡风险增加[HR(95%CI):2.47(1.63~3.84),3.05(2.37~3.48)]。结论TRAF6在ESCC癌组织中的表达参与ESCC的发生发展,TRAF6表达阳性病人复发和死亡的风险增加;TRAF6可作为ESCC潜在的治疗靶点。

关键词：食管肿瘤肿瘤坏死因子受体相关因子6 复发生存

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中国妇幼保健 2020年第9期35卷 1729-1732页

作者：王倩鲍雪卢丹扬州大学临床医学院妇产科江苏扬州225001

目的探讨未足月胎膜早破(PPROM)合并绒毛膜羊膜炎(HCA)患者外周血和胎盘中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、核转录因子-κB(NF-κB)表达及意义。方法选取2017年9月-2018年12月于扬州大学临床医院产科住院分娩的74例PPROM孕妇为研究... 详细信息

目的探讨未足月胎膜早破(PPROM)合并绒毛膜羊膜炎(HCA)患者外周血和胎盘中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、核转录因子-κB(NF-κB)表达及意义。方法选取2017年9月-2018年12月于扬州大学临床医院产科住院分娩的74例PPROM孕妇为研究对象。根据胎膜病理结果将PPROM分为对照组(PPROM未合并HCA)和病例组(PPROM合并HCA),采用ELISA和Western blot法检测母血和胎盘中TRAF6和NF-κB的表达水平,比较两种因子在母血、胎盘中的表达和相关性。结果病例组母血、胎盘中TRAF6和NF-κB表达均高于对照组,差异有统计学意义(P6、NF-κB在母血与胎盘中的表达分别呈正相关;母血、胎盘中TRAF6与NF-κB的表达分别呈正相关。病例组产褥感染率和新生儿肺炎发生率高于对照组。结论TRAF6和NF-κB可能参与PPROM合并HCA的发生。

关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6 核转录因子-κB 未足月胎膜早破绒毛膜羊膜炎

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肿瘤坏死因子受体相关因子6在NF-κB炎症通路中的研究进展

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东南国防医药 2017年第4期19卷 390-394页

作者：张群燕郭郡浩蔡辉南京军区南京总医院中西医结合科南京210002

肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor,TRAF6)既可与肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族结合,又可与白细胞介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLR)超家族相互作用来传递胞外信号的一种胞内接头蛋白,在炎... 详细信息

肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor,TRAF6)既可与肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族结合,又可与白细胞介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLR)超家族相互作用来传递胞外信号的一种胞内接头蛋白,在炎症反应、免疫应答、骨代谢中发挥着重要作用。文章就TRAF6的蛋白结构、核因子-κB炎症通路以及与炎症疾病和临床应用等方面进行综述。

关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6 NF-κB CD40 炎症

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