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作者：邹正渝重庆医科大学

学位级别：硕士

研究背景与目的骨肉瘤是发病率约为骨恶性肿瘤的40%左右，仅次于软骨肉瘤，发病的机理尚不明了。骨肉瘤好发于青少年，恶性程度高，局部浸润、早期转移和复发的倾向高，预后极差。由于骨肉瘤早期转移率高，早期诊断及早期治疗成为治愈... 详细信息

研究背景与目的骨肉瘤是发病率约为骨恶性肿瘤的40%左右，仅次于软骨肉瘤，发病的机理尚不明了。骨肉瘤好发于青少年，恶性程度高，局部浸润、早期转移和复发的倾向高，预后极差。由于骨肉瘤早期转移率高，早期诊断及早期治疗成为治愈该瘤的关键。 S100家族是一类酸性的，分子量较小，能与钙结合的蛋白质，该家族目前报道发现至少有25个成员，该家族成员结构比较保守，都具有EF-手型结构，能与游离钙或者靶蛋白结合后产生多种生理学作用，如：参与细胞增殖与凋亡，调节酶活性或者经蛋白质的磷酸化等参与多种信号途径等。该家族中有21个成员的基因定位在稳定性较差、易发生染色体重排的人染色体1q21上，故大量的文献报道S100家族与多种高发性肿瘤，如骨肉瘤、卵巢癌、乳腺癌等关系密切。本课题拟研究重组hS100A6对人骨肉瘤细胞143B增殖、迁移、侵袭等方面的影响，并探讨重组hS100A6对该细胞中Wnt/β-catenin及PI3K-AKT信号途径的影响，从而为骨肉瘤发生发展的分子机制的深入研究奠定基础。方法 1.质粒pGST-GST-HRV3C-hS100A6的构建与鉴定：以pHAHA-hS100A6为模板，高保真PCR扩增携带HRV3C酶切位点编码序列的hS100A6基因片段，插入至原核表达载体pGST-moluc，构建pGST-HRV3C-hS100A6;将该质粒经氯化钙法转入宿主大肠杆菌BL21，增菌后提取质粒作限制性内切酶的双酶切以鉴定构建的重组质粒，最后做测序鉴定。 2.重组hS100A6的制备与鉴定：扩增含重组质粒pGST-HRV3C-hS100A6的BL21，利用异丙基-β-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其表达融合蛋白，然后冰浴超声裂菌，谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠（Glutathione Sepharose4B beads）分离纯化出融合蛋白GST-HRV3C-hS100A6，经GST-HRV3C蛋白酶4℃酶切过夜，再用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠清除体系中的GST-HRV3C蛋白酶和被切下的GST标签。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）和Western-blot鉴定重组蛋白，应用分光光度仪对重组蛋白进行蛋白定量，0.22μm滤膜过滤除菌后分装，-80℃保存备用。 3.分别用不同浓度的重组hS100A6（1μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml）处理细胞，MTT法检测其对细胞增殖的影响;选择合适浓度作为后续实验的干预浓度，随后用MTT法、transwell小室（带或不带基质胶）和Hoechst33258染色检测重组hS100A6对143B细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。 *** blot检测重组hS100A6对人骨肉瘤细胞143B的β-catenin水平、PI3K-AKT信号途径标志蛋白p-AKT（Ser473）及其下游蛋白GSK3β的磷酸化水平的影响;再运用信号途径抑制剂抑制该信号途径活性，再观察重组hS100A6对细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。结果 1.构建的pGST-HRV3C-hS100A6质粒，经双酶切鉴定和测序分析证实是正确的;转化后的菌株经IPTG诱导能够表达相对分子质量约36KDa的蛋白质;经纯化、超滤置换缓冲液和GST-HRV3C酶切，再用琼脂糖4B球珠去除GST-HRV3C和GST标签;得到相对分子质量约10.5KDa的蛋白质（重组hS100A6），经Quantityone软件检测其纯度达93.2%;Western Blot显示S100A6单克隆抗体可以对该蛋白特异识别;该蛋白产量约为4mg/L菌液。 2.浓度依赖MTT显示：在浓度范围内（1μg/ml到90μg/ml）：30μg/ml的重组hS100A6能明显促进143B细胞的增殖，而90μg/ml的重组S100A6则抑制其增殖（P0.05）。本课题拟对其促骨肉瘤作用进行研究，故选用30μg/ml作为后续实验的干预浓度。 3. hS100A6对143B细胞的作用：1）MTT显示重组hS100A6处理143B细胞后从第二天起到第五天，实验组的A492nm值较对照组分别增加56.9%，41.4%，39.3%，72.4%（P0.05），提示hS100A6有促进143B细胞增殖的作用，且有一定程度的时间依赖性;2）Transwell（带基质胶）侵袭实验显示24h穿过小室膜的实验组细胞数较对照组增加145.1％(P0.05)，提示S100A6具有促进143B细胞侵袭能力的作用;3）Transwell（不带基质胶）迁移实验显示实验组24小时穿膜细胞较对照组增加270.3%（P0.05），提示hS100

关键词： S100A6 骨肉瘤肿瘤促进 Wnt/β-catenin信号途径 PI3K-AKT信号途径

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17β-雌二醇对涎腺粘液表皮样癌高转移细胞系M3SP4细胞生物学特性的影响

17β-雌二醇对涎腺粘液表皮样癌高转移细胞系M3SP4细胞生物学特性...

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作者：郭富平第四军医大学

学位级别：硕士

涎腺粘液表皮样癌是口腔常见的恶性肿瘤,发病率占腺涎恶性肿瘤的30%左右,因肿瘤组织中含有粘液细胞、上皮样细胞而得名,临床特点是远处转移率高,局部易复发,预后差。17β—雌二醇(E2)是一种性激素,主要由卵巢分泌产生,生理功能主要促进... 详细信息

涎腺粘液表皮样癌是口腔常见的恶性肿瘤,发病率占腺涎恶性肿瘤的30%左右,因肿瘤组织中含有粘液细胞、上皮样细胞而得名,临床特点是远处转移率高,局部易复发,预后差。17β—雌二醇(E2)是一种性激素,主要由卵巢分泌产生,生理功能主要促进子宫、输卵管、阴道、外阴等生殖器官的发育和成熟,维持其生理功能。作为药物,雌激素主要是用于治疗更年期综合征、预防冠心病、骨质疏松、老年痴呆症等老年病。其促瘤、致瘤等已知的及潜在的副作用引起了人们的广泛关注。美国FDA于2002年将雌激素列为首要致癌药物,其后关于雌激素的研究逐渐成为新的热点,目前主要的研究集中在乳腺癌、子宫内膜癌等方面,关于口腔涎腺肿瘤的研究报道很少。基因芯片是一种快速、有效的检测方法,可从基因调控水平研究肿瘤相关基因的功能,将基因芯片技术引入口腔涎腺肿瘤的诊断研究具有十分重要的现实意义。本实验采用体外、体内实验,探讨17β-雌二醇对于粘液表皮样癌高转移细胞系MSP细胞在肿瘤增殖、转移方面的影响,同时也应用基因芯片诊断技术研究在基因水平方面的影响,旨在进一步探讨雌激素对涎腺肿瘤生物学特性影响的作用机制。主要实验结果如下:

关键词：雌二醇粘液表皮样癌M3SP4细胞肿瘤促进基因芯片

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滨海当归根茎馏出液中的查耳酮类等化合物及其对癌症的化学预防作用

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国外医药（植物药分册） 2007年第2期22卷 74-74页

作者：何远朱英

滨海当归Angelica keiskei Koidz.为一耐寒的多年生植物,主要生长于日本太平洋海岸,传统用作利尿剂、轻泻剂、兴奋剂、催乳剂。已从该植物中分得多种查耳酮类和香豆素类成分,其中有些对小鼠皮肤由致癌剂DMBA和TPA诱导的癌细胞有抗肿瘤... 详细信息

滨海当归Angelica keiskei Koidz.为一耐寒的多年生植物,主要生长于日本太平洋海岸,传统用作利尿剂、轻泻剂、兴奋剂、催乳剂。已从该植物中分得多种查耳酮类和香豆素类成分,其中有些对小鼠皮肤由致癌剂DMBA和TPA诱导的癌细胞有抗肿瘤促进作用。作者进一步从其根茎馏出液的醋酸乙酯溶解部位分出3个新的查耳酮类化合物黄当归醇Ⅰ(xanthoangelolI,1)、J(2)和脱氧二氢黄当归醇H(deoxydihydroxanthoangelol H,3)和9个已知化合物。[第一段]

关键词：查耳酮类化合物滨海当归化学预防作用根茎癌症香豆素类成分肿瘤促进 DMBA

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