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长链非编码RNAMYU表达异常对非小细胞肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2024年第5期 207-210页

作者：严倩倩马燕凌魏武杰李黎刘莉江汉大学附属湖北省第三人民医院肿瘤血液科湖北武汉430000

长链非编码RNA (lncRNAs)促进肿瘤发生、进展的机制。其中,LncRNA MYU表达异常已经在几种常见癌症中被报道。近年来的相关研究结果表明,非小细胞肺癌中同样存在lncRNA MYU表达异常,但医学界尚未阐明其作用机制,本研究计划通过细胞体外... 详细信息

长链非编码RNA (lncRNAs)促进肿瘤发生、进展的机制。其中,LncRNA MYU表达异常已经在几种常见癌症中被报道。近年来的相关研究结果表明,非小细胞肺癌中同样存在lncRNA MYU表达异常,但医学界尚未阐明其作用机制,本研究计划通过细胞体外试验研究其对非小细胞肺癌细胞株生物学行为的影响。方法构建lncRNA MYU的表达载体和shRNA表达载体,得到非小细胞肺癌细胞株A549的转染株,之后对样本进行检测,以明确lncRNA MY的表达改变情况,最后分析其在癌变细胞分裂、扩散中所起的作用。结果本文通过瞬时转染A549细胞以及开展相关实验研究,发现MYU敲低会损害A549细胞的生长和迁移(P<0.01)。而MYU过表达则表现出相反的效果。结论LncRNA MYU在非小细胞肺癌中可加快病变细胞的分裂、扩散,参与了癌症的形成和发展,并可能作为潜在的诊断生物标志物以及研制新药的依据。

关键词：非小细胞肺癌长链非编码RNA MYU 肿瘤增殖肿瘤侵袭和转移

皮层肌动蛋白在肿瘤侵袭转移过程中机制的研究进展

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泰山医学院学报 2014年第1期35卷 77-80页

作者：张磊靳卫国泰山医学院山东泰安271016 泰山医学院附属聊城医院妇产科山东聊城252000

皮层肌动蛋白（Cortactin）具有多种不同的功能,涉及到细胞骨架重排,而且与细胞运动关系密切,参与肿瘤细胞的侵袭性转移.肿瘤细胞发生侵润与转移,需要借助细胞本身的变化,包括伪足的形成、细胞膜流动性能及细胞极性的变化,其中细胞的运... 详细信息

皮层肌动蛋白（Cortactin）具有多种不同的功能,涉及到细胞骨架重排,而且与细胞运动关系密切,参与肿瘤细胞的侵袭性转移.肿瘤细胞发生侵润与转移,需要借助细胞本身的变化,包括伪足的形成、细胞膜流动性能及细胞极性的变化,其中细胞的运动是癌细胞侵袭转移的过程中最基础的特点.近几年Cortactin成为肿瘤发生侵袭和转移关系密切的基因.对Cortactin进行深层次的研究将为肿瘤的早期诊断和治疗提供理论依据和实验室基础.

关键词： Cortactin蛋白细胞运动肿瘤侵袭和转移

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幽门螺杆菌导致上皮间质转化的研究进展

系统医学 2023年第19期8卷 190-198页

作者：宁月王蒙邵利华焦婷红李海龙甘肃中医药大学第一临床医学院甘肃兰州730000 甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室甘肃兰州730000 甘肃中医药大学附属医院临教科甘肃兰州730000 甘肃省中药新产品创制工程实验室甘肃兰州730000

众所周知,幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)可以导致胃黏膜病变,产生肠化生,最终形成胃癌。Hp导致的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在学术界已经受到广泛关注。首先,Hp对EMT促进作用通常是由细胞毒素-相关基因... 详细信息

众所周知,幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)可以导致胃黏膜病变,产生肠化生,最终形成胃癌。Hp导致的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在学术界已经受到广泛关注。首先,Hp对EMT促进作用通常是由细胞毒素-相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)造成的。作为Hp首要的毒力因子,CagA可以促使Hp通过自噬、炎症、癌症干细胞(cancer stem cells,CSC)等促进EMT形成;其次,EMT的发生也涉及受CagA影响的一些受体及因子,如CD44、程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)。此外,Hp促进EMT还包括某些信号通路发生信号传导改变,目前已知的受调控的通路有NF-κB、TGF-β/Smad、PI3K/AKT通路等。本文尝试对Hp导致EMT的机制做一综述,试图阐明其机制,为Hp防控和相关疾病的治疗提供思路和线索。

关键词：幽门螺杆菌上皮间质转化胃癌肿瘤侵袭和转移

高细胞亚型甲状腺乳头状癌的侵袭性组织病理学特征研究

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外科理论与实践 2023年第6期28卷 524-528页

作者：廖振宇赵起悟匡洁刘卓然孙寒星王越邱伟华陈曦严佶祺上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科上海200025

目的:探索研究高细胞亚型(tall cell variant,TCV)甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的侵袭性组织病理学特征。方法:回顾性分析2018年1月至2023年5月上海交通大学医学院附属瑞金医院19170例PTC病例,分析比较TCV-PTC组和... 详细信息

目的:探索研究高细胞亚型(tall cell variant,TCV)甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的侵袭性组织病理学特征。方法:回顾性分析2018年1月至2023年5月上海交通大学医学院附属瑞金医院19170例PTC病例,分析比较TCV-PTC组和经典型PTC(classic PTC,cPTC)组的临床病理学特征。结果:病理结果显示TCVPTC组1380例,cPTC组15578例。TCV-PTC在病人年龄以及肿瘤腺外侵犯、神经侵犯、脉管侵犯、癌灶最大径、多灶癌、中央区和颈侧区淋巴结转移和BRAF基因突变比例和(或)均值均较高,但合并桥本甲状腺炎的比例少于cPTC,差异有统计学意义(P侵袭性特征较强和淋巴结转移率较高,该病理类型的判定为后续更积极的临床治疗选择提供依据。

关键词：甲状腺乳头状癌高细胞亚型病理学特征肿瘤侵袭和转移

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蛋白酶抑制剂在肿瘤治疗中的作用研究

山西大学学报(自然科学版) 2012年第2期35卷 363-368页

作者：李卓玉化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所

蛋白酶及其抑制剂是非常重要的信号分子,涉及多个关键的人体生理代谢途径,在体内受到严格的调控.蛋白酶抑制剂活性的紊乱可导致多种疾病,诸如心血管和炎症疾病、癌症和神经系统障碍等.已知蛋白酶在肿瘤细胞侵袭和转移过程中扮演着重要... 详细信息

蛋白酶及其抑制剂是非常重要的信号分子,涉及多个关键的人体生理代谢途径,在体内受到严格的调控.蛋白酶抑制剂活性的紊乱可导致多种疾病,诸如心血管和炎症疾病、癌症和神经系统障碍等.已知蛋白酶在肿瘤细胞侵袭和转移过程中扮演着重要的角色.细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节,这个过程需多个蛋白水解酶的表达和激活.蛋白酶抑制剂的应用在一定程度上可减少由蛋白酶水解引起的肿瘤细胞的侵袭和转移,且它的抑制作用具有不同程度的特异性,可以减缓肿瘤恶性发展的进程.文章对蛋白酶及其抑制剂的靶向治疗药物及临床应用研究进展进行了综述.

关键词：蛋白酶抑制剂肿瘤侵袭和转移细胞外基质基底膜

GRP78通过LRP6激活WNT/HOXB9信号通路促进肝癌的侵袭和转移

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GRP78通过LRP6激活WNT/HOXB9信号通路促进肝癌的侵袭和转移

作者：熊海霞南昌大学

学位级别：硕士

背景:肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性癌症之一,也是导致癌症相关死亡的第三大原因。尽管在改善肝癌患者的预后方面取得了一些进展,但患者的术后5年生存率仍然较低。肝细胞癌的高死亡率主要是肝内转移和远... 详细信息

背景:肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性癌症之一,也是导致癌症相关死亡的第三大原因。尽管在改善肝癌患者的预后方面取得了一些进展,但患者的术后5年生存率仍然较低。肝细胞癌的高死亡率主要是肝内转移和远端转移的结果。然而,有关肝癌浸润和转移的机制尚不清楚。GRP78(Glucose-regulated Protein 78,GRP78)是一种参与调节许多重要细胞功能的内质网(Endoplasmic Reticulum,ER)应激蛋白,如蛋白质加工和折叠、ER易位、ER相关降解(Endoplasmic Reticulum Associated Degradation,ERAD)和未折叠蛋白反应(The Unfolded Protein Response,UPR)途径。低氧、酸中毒等肿瘤微环境的改变可诱导GRP78的高表达,有助于癌细胞适应新环境。以往的研究表明,GRP78在肝癌的发生发展中起着至关重要的作用。HOXB9(Homeobox B9,HOXB9)作为一种序列特异性核转录因子,参与细胞的侵袭、转移和分化。越来越多的证据表明HOXB9的过度表达与肿瘤的生长和远端转移密切相关。例如,研究发现HOXB9在乳腺癌中高度表达,并促进乳腺癌的发生和肺转移。最近的一项研究表明,HOXB9在肺腺癌中过度表达,并预示预后不良。此外,我们早期的研究揭示了HOXB9在肝癌中也存在过度的表达。WNT信号通路是人类胚胎发育和肿瘤发生过程中的一条高度保守的通路。这一途径在肝癌的侵袭和转移中也起着重要作用。最近的研究表明,HOXB9是乳腺癌细胞WNT信号通路的靶基因。重要的是,我们以前的研究表明,WNT/HOXB9信号通路可以促进肝癌的侵袭和转移。此外,研究表明GRP78参与WNT信号通路的调节。然而,在肝癌细胞中,GRP78调节WNT信号通路的具体分子生物学机制尚不清楚。目的:探索GRP78和HOXB9在调控肝癌细胞侵袭和转移过程中的关系以及具体分子生物学机制。方法:1,收集2012年2月至2018年2月期间入住南昌大学第二附属医院并被被确诊为肝细胞肝癌的患者的肝癌组织及对应的癌旁组织标本106例,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)、免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)染色以及蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测肝癌和对应癌旁组织中GRP78和HOXB9的m RNA和蛋白的表达情况,采用相关性分析观察GRP78和HOXB9的相关性。分析GRP78和HOXB9的表达情况与临床病理特征的相关性,并采用Kaplan-Meier法构建患者生存曲线。2,探索肝癌细胞内GRP78和HOXB9的表达高低,选取GRP78蛋白表达相对较高和表达相对较低的细胞系各两株,接着在GRP78高表达的细胞中干扰GRP78,在GRP78低表达的细胞中过表达GRP78,检测GRP78与HOXB9的m RNA和蛋白的变化情况,并进行Transwell侵袭和迁移实验观察肝癌细胞的侵袭和转移能力的变化。体内实验,运用慢病毒构建稳定干扰GRP78的稳转细胞系,并用此细胞系构建裸鼠肝癌原位种植模型,通过HE染色观测裸鼠的肝内转移和肺转移的癌巢的数目。3,运用体外和体内的回复实验检测GRP78和HOXB9的上下游关系。体外实验,在高表达GRP78的肝癌细胞中干扰GRP78同时增加HOXB9的表达,对应的,在低表达GRP78的肝癌细胞中过表达GRP78同时干扰HOXB9的表达,观察GRP78和HOXB9的m RNA和蛋白的变化,同时利用Transwell侵袭和转移实验观察肝癌细胞侵袭和转移能力的变化。体内实验,在稳定干扰GRP78的细胞系中稳定过表达HOXB9,并用此细胞系构建裸鼠肝癌原位种植模型,通过HE染色观测裸鼠的肝内转移和肺转移的癌巢的数目。4,探索GRP78调控HOXB9的分子生物学机制。运用生物信息学分析寻找GRP78调控HOXB9可能的通路,并验证相关结果。我们使用激光共聚焦、Western blot、免疫共沉淀等方法证实GRP78通过可能的信号通路来调控HOXB9。接着,进一步探索在肝癌细胞中,GRP78调节信号通路的具体分子生物学机制。结果:1,肝癌患者的免疫组化、Western blot和q RT-PCR结果显示:GRP78在70.75%(75/106)的肝癌患者中高表达,而HOXB9在53.77%(57/106)的肝癌中高表达。相关性分析发现GRP78和HOXB9的m RNA和蛋白表达呈正相关并且与肝癌患者的肿瘤直径、肿瘤包膜、肿瘤微卫星灶、静脉侵犯密切相关(P<0.05)。患者生存曲线显示,GRP78和HOXB9的高表达的肝癌患者术后生存率较低(P<0.05)。2,细胞

关键词： GRP78 HOXB9 LRP6 肝细胞肝癌 WNT/β-catenin 肿瘤侵袭和转移

Tiam-1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义的研究

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Tiam-1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义的研究

作者：杜江中国医科大学

学位级别：硕士

目的探讨非小细胞肺癌Tiam-1（T Lymphoma invasion and metastasis 1 T淋巴瘤侵袭和转移诱导因子1）的表达及临床意义。实验材料 1．病例及组织标本随机选取86例从1999年... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌Tiam-1（T Lymphoma invasion and metastasis 1 T淋巴瘤侵袭和转移诱导因子1）的表达及临床意义。实验材料 1．病例及组织标本随机选取86例从1999年4月～2000年6月间中国医大一院胸外科手术切除的原发非小细胞肺癌组织标本。其中，男61例，女25例，年龄36～76岁，平均58.2岁。鳞癌42例，腺癌44例。分化程度：高、中分化55例，低分化31例。病人术前均未行放化疗及免疫治疗，术后所有诊断经病理证实。所有标本均经10％甲醛固定，常规石蜡包埋。另获取上述病例中转移淋巴结15例，正常肺组织手术切除标本15例。共47例获得随访资料，随访时间6～45个月。 2．主要试剂一抗是由美国Santa Cruz公司提供的兔抗人Tiam-1（H-300）蛋白单克隆抗体，工作浓度1：100。S-P试剂盒为北京中山生物制剂有限公司的通用型产品。实验方法 1．免疫组化染色将石蜡包埋的标本制成5μm厚石蜡切片，丙酮固定10分钟后风干。脱腊后，3％的过氧化氢-甲醇液室温浸泡10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。滴加1：50封闭用正常血清室温孵育 20分钟，PBS稀释一抗Tiam-1（1：100）室温孵育2小时或4℃过夜;1:100生物素标记二抗（IgG）室温孵育30分钟;1：100S－P溶液室温孵育20分钟;DAB显色3一分钟，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶固定，封片。PBS代替一抗做阴性对照。制片：将石蜡包埋的标本制成sop厚石蜡切片，贴于涂有APES防脱片浓的载玻片上，丙酮固定10 d后风干。 2．染色结果判定：阳性判定以着色强度及阳性细胞数综合判断：着色强度分为，无色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分。阳性细胞数分为，S 10见为二分、10阮一50院为二分、50防一75伍为3分、＞75邮为大分。两项得分相乘结果＞3为阳性病例(十八2 3阴性(刁。最终结果是由两位病理医师用双盲法分别鹏每例切片所获得的一致意见。 3．统计分析方法：应用SPS10．0统计软件处理。Tiam—且表达与临床病理因素的关系的分析采用卡方检验和确切概率法。Cox模型进行预后多因素分析。P＜o．田为有统计学意义。实验结果二．Tiam一二蛋白阳性染色的分布及特点： Tiam一二蛋白在正常肺泡上皮、间质及正常支气管粘膜上皮中均无表达。在肺鳞癌细胞中，Ti一二蛋白存在于癌细胞胞浆中，被染成黄褐色颗粒状，尤以癌巢中央部明显(图乙2人在肺腺癌细胞中，Tiam一二蛋白同样存在于胞浆中，分布较均匀，胞膜表达不明显(图3，4人Tiam—l蛋白在钢支气管肺泡细胞癌中无表达(图5人在淋巴结检测中，Tiazn一二蛋白在淋巴结边缘窦转移 ·2· 癌细胞内呈阳性表达(图6人而在正常淋巴组织中则呈阴性表达。 2．Tiam一蛋白表达与临床及病理学因素间的关系＊＊小细胞肺癌Tiam一二蛋白表达与病理学分化程度的关系在86例肺癌中，高、中分化55例，阳性率40％(22／5太低分化31例，阳性率67．74％p 人统计分析显示两组间表达有显著性差异口＜o．05人 K＊小细胞肺癌TiamJ蛋白表达与肿瘤转移间的关系 86例肺癌中有转移者(包括淋巴结转移及远隔转移万6例，其中 Tiam一二蛋白表达阳性 25例，阴性＊例;无转移者 50例，其

关键词： NSCLC Tiam-1 肿瘤侵袭和转移免疫组化 Cox风险回归分析

基于生物信息学分析与实验探究GINS1基因在结直肠癌中的作用

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基于生物信息学分析与实验探究GINS1基因在结直肠癌中的作用

作者：卜凡钦南昌大学

学位级别：硕士

研究背景和目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是当今全球范围内致死率极高的恶性肿瘤之一。当前,包括肥胖,吸烟习惯和缺乏体育锻炼在内的许多风险因素都增加了结直肠癌患病的几率以及风险性。随着外科技术的发展,外科治疗对于早期的... 详细信息

研究背景和目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是当今全球范围内致死率极高的恶性肿瘤之一。当前,包括肥胖,吸烟习惯和缺乏体育锻炼在内的许多风险因素都增加了结直肠癌患病的几率以及风险性。随着外科技术的发展,外科治疗对于早期的CRC患者已取得很大的进展。然而,尽管发展了诸如腹腔镜手术,放射疗法,姑息性化学疗法和免疫疗法之类的疗法,但对于晚期CRC癌患者的疗效仍不理想。因此,结直肠癌相关的靶向标志物的确定将对结直肠癌患者早期诊断以及改善结直肠癌患者的预后做出巨大贡献。目前,已鉴定出用于大肠癌的早期诊断的几种生物标志物,但大肠癌患者的临床结局和预后依然很差。因此,本文旨在通过生信分析的方式挖掘出与CRC进展相关的分子标志物。为了增加结果的可靠性,筛选出的结果还需经过分子实验进行进一步验证。生物信息学分析已经成为癌症的重要研究方法,它可以揭示结直肠癌的病因和发病机制以及监测疾病进展相关的新型生物标志物。先前研究人员通过生物信息学工具将TIMP1,SERPINE1,CCND1,COL1A2和SST鉴定为结直肠癌的预后标志物。生物信息学分析显示Circ DDX17在大肠癌中失调,作者通过后续实验验证其在大肠癌中起着抑癌作用。本文研究的目的是挖掘结直肠癌早期诊断的潜在生物标志物,并通过后续分子实验对数据挖掘的结果进行进一步验证。结果显示本文筛选出的GINS1基因与CRC的进展相关。方法:1、数据挖掘。下载GEO数据库(http://www.***.nlm.***.gov/geo/)中GSE24514数据集和GSE110223数据集中CRC患者的转录组数据。并通过R(limma软件包)分析得出在CRC中的差异表达基因。通过DAVID数据库对结直肠癌中的差异表达基因进行功能富集分析。接着,使用STRING构建了差异表达基因的蛋白互作网络(PPI)并使用Cytoscape软件进行可视化分析。接着,借助Cytoscope中的MCODE插件检测PPI网络中作用密集的区域。2、通过GEPIA在线分析平台分析GINS1在33种常见癌症中的表达情况以及预后价值。通过STRING数据库挖掘出与GINS1紧密联系的10个基因。通过c Bioportal数据库分析GINS1在结直肠癌中的基因组学变化。3、实验验证分析GINS1在CRC中的表达水平。收集我院76例CRC患者的癌症组织和癌旁组织的手术标本,通过免疫组织化学、Western blot、实时荧光定量PCR技术检测GINS1在癌症组织与癌旁组织的蛋白以及m RNA表达水平。同时,通过蛋白质印迹分析检测GINS1在CRC细胞系SW480,HCT116,HT29,Lo Vo细胞和正常结直肠细胞系NCM460细胞系中的表达水平。4、验证GINS1表达水平对结直肠癌细胞增殖的影响。通过Lipofectamine3000对SW480以及HCT116细胞系进行转染,构建高表达以及低表达GINS1的结直肠癌细胞。使用CCK-8以及平板克隆形成实验测定经过不同处理的结直肠癌细胞的增殖能力。5、验证GINS1表达水平对结直肠癌细胞侵袭、迁移的影响。通过Transwell实验对比经过不同处理的结直肠癌细胞的侵袭、迁移能力。结果:1、在GSE24514数据集里,有788个差异表达基因。在GSE110223数据集里,有604个差异表达基因。有389个基因同时在这两个数据集中差异表达。DAVID数据库的结果显示这389个基因主要对细胞周期以及细胞增殖有影响。这389个基因中,GINS1,TPX2,CDK1,TOP2A,KPNA2,PRC1,UBE2C,ASPM,RRM2,FOXM1,CEP55,CKAP2,MCM7,RFC3和CCNB1关系尤为紧密。2、GEPIA的结果显示,GINS1在包括结肠腺癌和直肠腺癌在内的20种癌症类型中过表达。同时,GINS1的过表达与几种癌症患者的的不良预后密切相关。STRING数据库结果显示GINS1与GINS2,GINS3,GINS4,MCM2,MCM3,MCM4,MCM5,MCM6,MCM7和CDC45关系最为紧密。先前的报道发现这些基因形成了CMG(CDC45–MCM–GINS)复合物,这是真核染色体复制的核心,缺少任何这些成分都会影响真核染色体复制。c Bioportal数据库结果显示GINS1在CRC中基因组学的改变率达到20%。最常见的突变类型为m RNA表达水平增高。3、免疫组织化学、蛋白质印迹分析、实时荧光定量PCR技术检测结果显示GINS1在结直肠癌中的m RNA以及蛋白表达水平均高于癌旁正常组织。GINS1表达在HCT116和SW480细胞系中最高。4、CCK-8以及平板克隆形成实验的结果显示GINS1低表达抑制结直肠癌细胞的增殖;GINS1的过表达可促进结直肠癌细胞的增殖能力。5、Transwell实验结果显示GINS1低表达抑制结直肠癌细胞的侵袭、

关键词： GINS1 结直肠癌生物信息学分析细胞增殖肿瘤侵袭和转移

微管结合蛋白MAP1S对儿童肝母细胞瘤发生发展影响及相关机制的初探

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微管结合蛋白MAP1S对儿童肝母细胞瘤发生发展影响及相关机制的初探

作者：喻子瑜广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)是小儿最常见的肝脏恶性肿瘤,是一种胚胎性的恶性肿瘤。现如今随着医疗技术的进步,HB的诊断和治疗取得了显著的进展,但肿瘤复发、转移仍旧是HB患儿死亡的首要原因,同样也是其能否长期生存的关键... 详细信息

研究背景肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)是小儿最常见的肝脏恶性肿瘤,是一种胚胎性的恶性肿瘤。现如今随着医疗技术的进步,HB的诊断和治疗取得了显著的进展,但肿瘤复发、转移仍旧是HB患儿死亡的首要原因,同样也是其能否长期生存的关键因素。约20%的患儿在初诊时即伴有远处转移;患者治疗后易复发、化疗效果差、未接受肝移植的肝母细胞瘤患儿5年生存率仅为15%～20%。因此,找到能早期判断高危患儿的检测手段和采取早期强化治疗来降低患儿术后复发率,对延长肝母细胞瘤患儿生存期具有重要临床意义。微管结合蛋白1小型体(MAP1S,曾命名为C19ORF5)是MAP1A和MAP1B的同源物,可连接线粒体和微管执行细胞内运输功能。本课题组早期研究证明MAP1S通过调节自噬抑制肝细胞癌的发生发展,介导非典型机制增强NRF2信号从而起到保护肝脏的作用。然而MAP1S能否作为HB的治疗靶点目前还未有研究。本研究旨在探讨MAP1S对肝母细胞瘤发生发展的影响及其相关分子机制。研究目的1、明确MAP1S蛋白在HB组织中的表达情况;2、探讨MAP1S蛋白表达对HB患者预后的预测价值;3、初步探讨MAP1S蛋白在HB增殖和侵袭中可能的分子机制;研究方法1、免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测62例HB患者组织样本及肝正常组织中MAP1S蛋白的表达情况。2、通过Kaplan-Meier生存分析、COX回归模型、卡方检验分析MAP1S蛋白的表达与HB患者预后的相关性。3、利用CRISPR-Cas9系统构建稳定的MAP1S敲除HB细胞,通过Western blot法检测MAP1S蛋白的敲除效率。4、CCK8实验、EdU实验、Wound healing法、Transwell实验检测HB细胞MAP1S野生型(MAP1S)和敲除型(MAP1S)两种细胞增殖、侵袭能力;5、Western blot实验检测HB MAP1S、MAP1S两种细胞中AFP、β-catenin蛋白的表达水平以及上皮-间充质转化(EMT)过程中相关表型蛋白的表达的变化。实验结果1、正常肝组织中MAP1S蛋白表达率显著高于肿瘤组织,并且在HB肿瘤组织中MAP1S的表达分为高表达和低表达。2、Kaplan-Meier生存分析表明HB组织中MAP1S高表达提示患者的预后良好,肿瘤组织中MAP1S高表达的患者5年总体生存率与无事件生存率显著高于MAP1S低表达的患者。3、卡方检验分析得出MAP1S与HB的增殖、侵袭相关,通过CRISPR-Cas9系统敲除MAP1S表达后MAP1S细胞的增殖、侵袭能力明显增强。4、HepG2细胞中MAP1S表达水平与β-catenin、AFP表达以及上皮-间充质转化(EMT)间质表型蛋白Vimentin、N-cadherin表达呈负相关,而与EMT上皮表型E-cadherin表达呈正相关。实验结论1、MAP1S在HB组织中的表达显著低于正常肝组织中的表达。2、HB组织中MAP1S高表达的患者预后良好。3、MAP1S可以抑制HB的增殖和侵袭,并防止EMT过程。

关键词：肝母细胞瘤 MAP1S 肿瘤侵袭和转移 EMT