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中成药 2023年

作者：肖郁朋丁英钧丁宝珠侯树杰刘思杨张紫薇李晓霞梁文杰张楠河北医科大学乡村医师学院石家庄以岭药业股份有限公司河北中医学院中西医结合学院河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室

目的探讨肾消解毒通络方对糖尿病肾病金黄地鼠肾脏AIM2介导细胞焦亡的影响及其作用机制。方法 50只SPF级雄性金黄地鼠随机分为对照组和造模组，造模组采用高糖高脂喂养联合腹腔注射STZ构建糖尿病肾病模型，建模成功后随机分为模型组，... 详细信息

目的探讨肾消解毒通络方对糖尿病肾病金黄地鼠肾脏AIM2介导细胞焦亡的影响及其作用机制。方法 50只SPF级雄性金黄地鼠随机分为对照组和造模组，造模组采用高糖高脂喂养联合腹腔注射STZ构建糖尿病肾病模型，建模成功后随机分为模型组，肾消解毒通络方低、高剂量组（1.28、25.6g/kg），恩格列净组（10mg/kg），灌胃给药8周。全自动生化分析仪检测空腹血糖、24h-UTP和血清TC、LDL-C、Scr、Sur水平，生化法检测血清SOD活性和MDA水平，ELISA法检测血清IL-1β、IL-18、TNF-α水平，HE和PAS染色观察金黄地鼠肾组织病理形态学变化，免疫荧光或免疫组化法检测肾组织ROS、γH2AX表达，Westernblot法及免疫组化法检测肾组织AIM2、caspase-1、GSDMD蛋白表达。结果与对照组比较，模型组金黄地鼠肾小球出现萎缩，肾小球囊腔增大、系膜区增宽，肾小管扩张、水肿伴有坏死，空腹血糖、24 h-UTP、血清TC、LDL-C、Scr、Sur、IL-1β、IL-18、TNF-α、MDA水平和肾组织ROS、γH2AX、AIM2、caspase-1、GSDMD表达升高（P肾消解毒通络方高剂量组和恩格列净组肾组织病理学得到改善，空腹血糖、24 h-UTP、血清TC、LDL-C、Scr、Sur、IL-1β、IL-18、TNF-α、MDA水平和肾组织ROS、γH2AX、AIM2、caspase-1、GSDMD表达降低（P肾消解毒通络方可通过抑制金黄地鼠ROS-dsDNA-AIM2信号通路表达，降低肾组织ROS水平，减少肾脏固有细胞DNA损伤，减少AIM2炎症小体合成，从而抑制AIM2介导的细胞焦亡，减轻肾脏炎症损伤。

关键词：肾消解毒通络方糖尿病肾病黑色素瘤缺乏因子2(AIM2) 细胞焦亡炎症

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肾消解毒通络方调控NLRP3-Caspase-1-GSDMD通路抑制糖尿病肾病金黄地鼠肾脏细胞焦亡的机制

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中华中医药杂志 2022年第7期37卷 4086-4090页

作者：丁宝珠丁英钧马国平魏梅郭子静马可心李晓霞梁文杰刘坤河北中医学院石家庄050200 河北省中西医结合肝肾病证重点实验室石家庄050091 河北医科大学石家庄050017

目的:观察肾消解毒通络方(SJTR)对糖尿病肾病(DKD)金黄地鼠肾脏细胞焦亡的影响,探讨其肾脏保护作用的分子机制。方法:清洁级雄性金黄地鼠40只随机分为对照组(10只)、造模组(30只),采用高糖高脂喂养加少量STZ注射的方法构建DKD模型,成功... 详细信息

目的:观察肾消解毒通络方(SJTR)对糖尿病肾病(DKD)金黄地鼠肾脏细胞焦亡的影响,探讨其肾脏保护作用的分子机制。方法:清洁级雄性金黄地鼠40只随机分为对照组(10只)、造模组(30只),采用高糖高脂喂养加少量STZ注射的方法构建DKD模型,成功后随机分为模型组、中药高剂量组、中药低剂量组。中药高、低剂量组分别给予SJTR 25.6、12.8 g/kg,连续6周。全自动生化分析仪检测血清葡萄糖(GLU)、24 h尿蛋白(24hUP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Cr)、尿酸(UA);PAS染色观察肾脏病理组织形态,Western blot、免疫组化及实时荧光定量PCR检测NLRP3、GSDMD蛋白及mRNA,Caspase-1 mRNA表达。结果:对照组金黄地鼠肾脏组织形态正常;NLRP3表达不明显,Caspase-1 mRNA、GSDMD mRNA及蛋白呈弱表达。与对照组比较,模型组金黄地鼠肾小球内存在许多不规则、结节状PAS阳性物质沉积,肾脏病理损害明显;血糖、血脂、肾功能相关指标升高(P肾脏组织病理形态明显改善;GLU、TC、TG、Cr及UA均显著降低(P肾脏细胞焦亡,拮抗DKD炎症损伤,改善肾功能。

关键词：肾消解毒通络方糖尿病肾病金黄地鼠 NLRP3 Caspase-1 GSDMD 细胞焦亡

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基于NLRP3-Caspase-1-GSDMD信号通路探讨肾消解毒通络方对糖尿病肾病金黄地鼠肾脏细胞焦亡的调控作用及分子机制

基于NLRP3-Caspase-1-GSDMD信号通路探讨肾消解毒通络方对糖尿病...

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作者：丁宝珠河北中医学院

学位级别：硕士

目的:建立糖尿病肾病(DN)金黄地鼠模型,观察核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)等细胞焦亡通路分子及白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子在DN金黄地鼠肾脏的表达;探讨... 详细信息

目的:建立糖尿病肾病(DN)金黄地鼠模型,观察核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)等细胞焦亡通路分子及白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子在DN金黄地鼠肾脏的表达;探讨肾消解毒通络方(SJTR)对DN金黄地鼠肾功能的影响及对NLRP3-Caspase-1-GSDMD细胞焦亡信号通路的调控作用及靶点,为临床用药提供实验依据。方法:1.模型建立与分组:将50只清洁级雄性金黄地鼠以随机数字表法分为对照组(10只)、造模组(40只),采用高糖高脂喂养加少量STZ注射的方法构建糖尿病模型,而后依其自然发展为DN模型。造模成功后,随机分为模型组、厄贝沙坦组、中药高剂量组和中药低剂量组四组。2.药物干预:厄贝沙坦组给予厄贝沙坦13.5mg/(kg·d);中药高、低剂量组分别给予SJTR 25.6g/(kg·d)、12.8g/(kg·d);对照组和模型组给予等量生理盐水;连续干预8周。3.指标检测与方法:采用全自动生化分析仪检测各组金黄地鼠血糖、血脂、肾功能等相关指标;采用HE、PAS、Masson染色法观察金黄地鼠肾脏组织病理形态;采用放射免疫法检测胰岛素;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α等炎症因子;采用实时荧光定量RT-PCR检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β等分子m RNA表达;采用SABC及Western Blot检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β等分子的蛋白表达;采用TUNEL染色检测肾脏细胞DNA损伤情况。结果:1.一般情况比较对照组金黄地鼠一般情况良好,饮食饮水及尿量均正常,精神状况良好,毛发整齐。模型组精神萎靡、毛色晦暗、动作迟缓、多饮多尿。三个给药组上述症状较模型组均有不同程度的改善。2.肾质量、体质量和肾脏指数比较与对照组比较,模型组金黄地鼠肾质量(KW)升高,体质量(BW)下降,肾脏指数(KI)明显升高(P肾功能比较与对照组比较,模型组金黄地鼠24h尿蛋白(24h-UP)、血清肌酐(SCr)、尿酸(UA)升高(P肾脏组织病理形态学比较HE染色:对照组金黄地鼠肾脏组织结构与形态未见明显病理改变。与对照组比较,模型组肾小球明显肥大,肾小管上皮细胞排列无序、空泡样变性,部分肾小管萎缩,管腔变窄。与模型组比较,三个给药组肾小球及肾小管病理改变明显减轻。PAS染色:对照组金黄地鼠肾小球毛细血管袢薄而清晰,肾脏结构无异常病理变化。与对照组比较,模型组肾小球内存在许多不规则、结节状PAS阳性物质沉积,肾小球系膜基质增生,基底膜增厚。与模型组比较,三个给药组肾小球PAS阳性沉积物质较少,基底膜增厚明显减轻。Masson染色:对照组金黄地鼠肾脏很少有系膜基质增生和蓝色纤维的沉积。与对照组比较,模型组肾小囊间隙增大,肾小球可见蓝色纤维物质的沉积,肾小球系膜区明显扩大,基质增生。与模型组比较,三个给药组系膜基质增生和纤维沉积的情况明显减少。6.血清炎症因子比较与对照组比较,模型组金黄地鼠血清IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α水平升高(P肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β分子m RNA表达比较与对照组比较,模型组金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βm RNA表达升高(P肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD分子蛋白表达对照组金黄地鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达较弱。与对照组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达升高;NLRP3主要表达于肾小管上皮细胞、肾小球内,Caspase-1和GSDMD主要见于肾小管上皮细胞。与模型组比较,三个给药组NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋

关键词：肾消解毒通络方糖尿病肾病金黄地鼠 NLRP3 Caspase-1 GSDMD

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