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中华结核和呼吸杂志 2002年第11期25卷 697-698页

作者：张世国于雪艳王虎济南军区总医院检验科济南250031 山东大学医学院生化教研室

我们在9-顺维A酸(9-cis-RA)对人肺鳞癌细胞周期及细胞分化具有调节作用的基础上[1,2],应用9-cis-RA处理人肺鳞癌细胞株,观察肺鳞癌细胞维A酸受体(RARs)转录水平的变化,为肺癌的临床治疗提供实验依据.

关键词： 9-顺维A酸肺鳞癌细胞维A酸受体转录肺癌治疗

9-顺维A酸对肺鳞癌细胞周期及细胞分化的生物学作用

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中华结核和呼吸杂志 2001年第10期24卷 635-636,I004页

作者：张世国于雪艳孔立新孙晓明鲁秀华济南军区总医院检验科济南250031 山东大学医学院

随着对维A酸与肺癌关系的研究发现:全反式维A酸(ATRA)虽能抑制支气管上皮细胞的生长和鳞状分化[1],但这种作用在肺癌的形成过程中消失,且在体外实验的大多数人肺癌细胞株对ATRA有显著的抗性作用[2,3].最近已证实,ATRA的一种立体异构体-... 详细信息

随着对维A酸与肺癌关系的研究发现:全反式维A酸(ATRA)虽能抑制支气管上皮细胞的生长和鳞状分化[1],但这种作用在肺癌的形成过程中消失,且在体外实验的大多数人肺癌细胞株对ATRA有显著的抗性作用[2,3].最近已证实,ATRA的一种立体异构体--9-顺维A酸(9-cis-RA)能与维A酸受体(RARs)和维A类X受体(RXRs)结合而发挥其生物学作用,故9-cis-RA倍受研究者的重视[4].我们的研究旨在观察9-cis-RA对肺鳞癌细胞株的细胞周期及分化作用的影响.

关键词：肺癌肺鳞癌细胞 9-顺维A酸细胞周期细胞分化生物学作用

人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合研究

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解剖学报 2003年第5期34卷 496-499页

作者：伊焕发唐军民唐岩甄昱孙红亚戴燕秦屹北京大学基础医学院组织学胚胎学教研室北京100083 中国人民解放军261医院妇产科北京100094

目的　探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法。研究树突状细胞肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征。　方法　用PEG法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合 ,瑞氏姬姆萨染色观察树突状细胞、LTE... 详细信息

目的　探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法。研究树突状细胞肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征。　方法　用PEG法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合 ,瑞氏姬姆萨染色观察树突状细胞、LTEP78细胞及其融合细胞的形态结构 ,SP免疫细胞化学染色法检测融合细胞的分子表达。　结果　分离的树突状细胞能高表达HLA DR分子 ,而LTEP78细胞则不表达 ;将树突状细胞与LTEP78细胞按 10∶1比例融合后 ,两者的细胞膜、细胞质依次融合 ,获得的融合细胞仍能表达HLA DR分子。　结论人树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合是一个动态过程 ,通过将两者融合 ,人肺癌细胞获得了人树突状细胞表达的HLA DR分子 ,从而增强了其免疫原性 ,为人树突状细胞疫苗的研制奠定了基础。

关键词：外周血树突状细胞肺鳞癌细胞融合研究组织化学

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TGF-β_1在肺鳞癌细胞中的表达

第三军医大学学报 2003年第4期25卷 336-338页

作者：张晓军路作新第三军医大学附属西南医院急救部重庆400038 第三军医大学附属新桥医院胸外科重庆400037

目的　探讨TGF β1 在肺鳞癌细胞中的表达。方法　以原代培养的人肺鳞癌细胞为对象 ,采用ELISA法检测不同分化程度肺鳞癌细胞无血清培养液中TGF β1 蛋白含量。结果　肺鳞癌各组细胞中TGF β1 蛋白含量均显著高于正常支气管上皮细胞 (P ... 详细信息

目的　探讨TGF β1 在肺鳞癌细胞中的表达。方法　以原代培养的人肺鳞癌细胞为对象 ,采用ELISA法检测不同分化程度肺鳞癌细胞无血清培养液中TGF β1 蛋白含量。结果　肺鳞癌各组细胞中TGF β1 蛋白含量均显著高于正常支气管上皮细胞 (P 0 0 5 )。结论　TGF β1 蛋白在人肺鳞癌组织中表达增高 ,且与其分化程度基本呈正相关 ,提示TGF β1

关键词： TGF-β1 肺鳞癌细胞生长因子支气管上皮细胞

调控靶向Xklp2表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达的影响

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中国老年学杂志 2019年第3期39卷 673-677页

作者：杨洁祝淑钗王玉祥管金磊王涛于凡甄婵军王肖肖河北医科大学第四医院放疗科河北石家庄050011 河北医科大学第四医院胸外科河北石家庄050011 河北医科大学第四医院病理科河北石家庄050011

目的探讨调控靶向Xklp2(TPX2)表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达及细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成的影响。方法利用前期构建的稳定转染TPX2 shRNA质粒的SK-MES-1细胞和稳定转染TPX2过表达质粒的NCI-H226细胞,采用Western印... 详细信息

目的探讨调控靶向Xklp2(TPX2)表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达及细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成的影响。方法利用前期构建的稳定转染TPX2 shRNA质粒的SK-MES-1细胞和稳定转染TPX2过表达质粒的NCI-H226细胞,采用Western印迹检测4 Gy照射后0～24 hγ-H2AX蛋白表达,免疫荧光技术观察4 Gy照射后4 h细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成情况。结果 4 Gy照射后0～24 h,TPX2干扰的SK-MES-1细胞和TPX2过表达的NCI-H226细胞中γ-H2AX蛋白表达水平均出现显著增加后逐渐下降的趋势,但在TPX2干扰的细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著高于单纯照射组(P细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著低于单纯照射组。②照射后4 h,下调TPX2表达则γ-H2AX和MDC1核内斑点形成增加,而过表达TPX2则γ-H2AX和MDC1核内斑点增加幅度降低(P<0. 05)。结论照射后H2AX磷酸化及γ-H2AX和MDC1核内斑点形成变化,提示TPX2参与DNA损伤修复。

关键词：肺鳞癌细胞 TPX2 γ-H2AX MDC1 核内斑点

外源性骨形态发生蛋白9转入肺鳞癌细胞对其活性的影响及作用机制

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中国老年学杂志 2017年第15期37卷 3691-3693页

作者：崔丹白城医学高等专科学校吉林白城137000

目的观察骨形态发生蛋白(BMP)9对人肺鳞癌细胞株YTMLC-90迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 RT-PCR和Western印迹法检测YTMLC-90细胞和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中BMP9 mRNA和蛋白表达水平;以转染重组腺病毒Ad-BMP9的YTMLC-90... 详细信息

目的观察骨形态发生蛋白(BMP)9对人肺鳞癌细胞株YTMLC-90迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 RT-PCR和Western印迹法检测YTMLC-90细胞和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中BMP9 mRNA和蛋白表达水平;以转染重组腺病毒Ad-BMP9的YTMLC-90细胞为研究组,转染Ad-GFP为阴性对照组,未转染为空白对照组;采用划痕愈合实验检测3组细胞迁移能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力,同时检测迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)2 mRNA和蛋白表达情况;Western印迹法检测3组细胞BMP-Smad信号通路中Smad 1/5磷酸化水平。结果YTMLC-90细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达量均明显低于NHBE细胞(P细胞后胞内BMP9蛋白表达量明显高于阴性对照组(P细胞划痕愈合率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);研究组细胞划痕愈合率明显低于阴性对照组和空白对照组,穿过小室膜和基质胶的YTMLC-90细胞数均明显少于阴性对照组和空白对照组,MMP2表达量明显低于阴性对照组,MMP2mRNA和蛋白表达量均明显低于阴性对照组(均P细胞高表达BMP9后其p-Smad 1/5表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P肺鳞癌细胞株YTMLC-90可有效抑制其迁移和侵袭能力,激活BMP-Smad信号通路是该抑制作用的机制之一。

关键词：骨形态发性蛋白肺鳞癌细胞 BMP-Smad通路

人肺鳞癌细胞SK-MES-1介电频谱特性研究

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人肺鳞癌细胞SK-MES-1介电频谱特性研究

作者：张倩宁波大学

学位级别：硕士

目的:作为一项成熟的,具备完善测量手段和分析方法的频谱技术,介电谱的应用范围已经从最初的物理学领域扩展到生物学和医学等学科。本论文以细胞悬浮液中人肺癌细胞的生物学变化对应的介电响应为主要研究内容,探讨将生物介电谱测量和分... 详细信息

目的:作为一项成熟的,具备完善测量手段和分析方法的频谱技术,介电谱的应用范围已经从最初的物理学领域扩展到生物学和医学等学科。本论文以细胞悬浮液中人肺癌细胞的生物学变化对应的介电响应为主要研究内容,探讨将生物介电谱测量和分析技术应用到人肺癌症筛查,诊断,以及癌细胞分型等临床需求中的可行性。方法:本论文首先在100 Hz00 MHz交变电场频率范围内,使用安捷伦4294A阻抗分析仪和两电极的测量池,对人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人肺鳞癌细胞SK-MES-1两种细胞不同细胞体积分数的悬浮液进行介电测量。然后结合三项式Cole-Cole方程和单壳物理模型对测量得到的介电谱进行分析,应用非线性最小二乘曲线拟合技术提取ColeCole模型参数和细胞形态学参数。最后通过分析BEAS-2B和SK-MES-1的介电谱特征参数和解析模型参数差异,探讨在实验条件下实现肺癌细胞与正常细胞分型的可行性和具体实施细节。本论文还尝试从生物物理学角度为人肺鳞癌细胞的病理学研究提供辅助信息,并结合细胞电镜和光镜照片讨论介电谱差异与细胞形态学变化之间的关系。结果:1肺鳞癌细胞的介电常数较正常细胞的介电常数低(5.81%),但肺鳞癌细胞的电导率较正常细胞的电导率高(12.25%)。2 BEAS-2B和SK-MES-1细胞悬浮液的介电谱、电导率谱、复平面图和介电损耗谱均表现有细胞悬浮液体积分数依存性。3 BEAS-2B和SK-MES-1细胞悬浮液在100 Hz00 MHz频率范围均包含α和β两个介电弛豫。4对BEAS-2B和SK-MES-1细胞悬浮液的介电谱进行Cole-Cole模型分析,需要使用三项式Cole-Cole方程以获得满足精度要求的拟合结果。这表明两类细胞悬浮液的介电谱均对应三个特征频率,分别表征了不同频率段的外加电场激发产生的双电层中对离子极化,以及细胞膜和核膜处的界面极化。5应用Cole-Cole模型分析细胞悬浮液的介电谱得到的三个特征频率(fc1,fc2,fc3)不受细胞体积分数的影响。统计学分析结果显示特征频率可以作为区分BEAS-2B和SKMES-1的依据。6应用单壳球形细胞物理模型对两类细胞的介电谱进行解析,得到的物理模型参数差异不仅可以体现两细胞的介电谱差异,而且结合两细胞的电镜和光镜照片结果,可以解释细胞癌变后形态学变化与介电差异的关系。结论:本论文的结果表明人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人肺鳞癌细胞SK-MES-1的介电谱具有明显差异。基于Cole-Cole模型和物理模型,结合曲线拟合技术可以提取特征频率等模型参数,特征化了两类细胞的介电谱差异,可以用做细胞分型的重要依据,为基于生物介电谱技术的人肺癌细胞分型等应用提供了有力的证明。

关键词：介电谱肺鳞癌细胞 Cole-Cole模型物理模型

抑制肺鳞癌细胞FANCM和USP1基因对顺铂的增敏效应

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抑制肺鳞癌细胞FANCM和USP1基因对顺铂的增敏效应

作者：李玫瑜江苏大学

学位级别：硕士

目的:DNA损伤修复是肿瘤细胞对铂类药物耐药的重要机制,FA/BRCA通路在铂类药物所致细胞DNA损伤的修复中发挥了关键作用。本研究通过抑制人肺鳞癌细胞SK-MES-1株FA/BRCA通路上游蛋白FANCM和去泛素化蛋白USP1,观察FA/BRCA通路激活状态,探... 详细信息

目的:DNA损伤修复是肿瘤细胞对铂类药物耐药的重要机制,FA/BRCA通路在铂类药物所致细胞DNA损伤的修复中发挥了关键作用。本研究通过抑制人肺鳞癌细胞SK-MES-1株FA/BRCA通路上游蛋白FANCM和去泛素化蛋白USP1,观察FA/BRCA通路激活状态,探讨这些干预对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响。方法:体外培养人肺鳞癌SK-MES-1细胞,按照脂质体转染试剂盒说明书介绍的程序将特异性针对FANCM和USP1基因的si RNA(FANCM-si RNA和USP1-si RNA)分别和共转染于SK-MES-1细胞株。采用蛋白质印迹法(Western Blot)测定转染后FANCM和USP1蛋白表达以验证si RNA转染效率确保转染成功;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后SK-MES-1细胞经10μg/ml DDP处理24h后的早期凋亡率变化;CCK-8(Cell Counting Kit-8)法测定转染前后细胞经10μg/ml DDP处理24h和48h后的生存率;蛋白质印迹法检测转染前后细胞经不同浓度梯度DDP处理后FANCD2蛋白单泛素化水平,以及免疫荧光染色检测转染前后细胞核内FANCD2核聚小体的表达状态。结果:(1)SK-MES-1细胞分别经FANCM-siRNA和USP1-siRNA转染后,与空白对照组和阴性对照组比较,FANCM蛋白和USP1蛋白表达均明显降低(两者均P肺鳞癌细胞SK-MES-1分别转染和双转染FANCM-si RNA和USP1-si RNA后,用10μg/ml DDP处理24h,流式细胞术检测结果显示细胞的早期凋亡率明显高于未转染的细胞。但转染USP1-si RNA的细胞早期凋亡率高于转染FANCM-si RNA的细胞。USP1-si RNA和FANCM-si RNA双转染后的细胞早期凋亡率明显高于单转染FANCM-si RNA细胞的早期凋亡率(P细胞的早期凋亡率比较无明显差异(P>0.05)。(3)肺鳞癌细胞SK-MES-1分别转染和双转染FANCM-si RNA和USP1-si RNA后,用10μg/ml DDP分别处理24h和48h,细胞生存率和半数抑制率(IC50)明显下降,与未转染组比较均有统计学意义(P细胞的生存率低于转染FANCM-si RNA的细胞(P细胞生存率和IC50明显低于单转染FANCM-si RNA细胞生存率(P细胞生存率比较无明显差异(P>0.05)。(4)肺鳞癌SK-MES-1细胞经FANCM-si RNA转染并经DDP处理后,以FANCD2-L/S比值所表示的FANCD2单泛素化水平下调,同时胞核内的FANCD2核聚小体表达降低,提示FA/BRCA通路上游基因FANCM沉默导致FANCD2单泛素化受抑制。转染USP1-si RNA后,DDP诱导的FANCD2单泛素化水平上调,核内FANCD2核聚小体表达增强,提示FANCD2去泛素化酶USP1被抑制后,造成单泛素化的FANCD2堆积。此外,双转染FANCM-si RNA和USP1-si RNA后,DDP诱导的细胞FANCD2单泛素化水平明显高于单转染FANCM-si RNA的细胞,但低于单转染USP1-si RNA的细胞,胞核内FANCD2核聚小体表达无明显改变,这一结果的机制如上所述。结论:沉默FANCM基因后通过抑制FA/BRCA通路FANCD2蛋白单泛素化,使得FA/BRCA通路下游蛋白不能被激活,从而无法对DDP诱导的DNA损伤实施修复;沉默USP1基因后可使FANCD2去泛素化受抑制,导致已泛素化的FANCD2在细胞内堆积,亦不能激活FA/BRCA通路下游蛋白。两者都可阻断FA/BRCA通路,抑制DNA损伤修复,导致SK-MES-1细胞对DDP的敏感性增高,值得注意的是沉默USP1基因后对DDP的增敏效应更为明显。

关键词：肺鳞癌细胞 FA/BRCA通路顺铂 FANCM USP1 si RNA

青蒿素及其衍生物对肺鳞癌细胞系YTMLC及SK-MES-1的抑制作用及机制研究

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青蒿素及其衍生物对肺鳞癌细胞系YTMLC及SK-MES-1的抑制作用及机...

作者：顾龙南京中医药大学

学位级别：硕士

目的：青蒿素是一类倍半萜内酯类化合物,它的特点是具有含有过氧桥结构,在此之后陆续研制出了双氢青蒿素(蒿甲醚)、青蒿琥酯等多种青蒿素衍生物,本文拟通过体外肿瘤细胞实验来研究青蒿素及其衍生物对肺鳞癌细胞系YTMLC及SK-MES-1中瘤细... 详细信息

目的：青蒿素是一类倍半萜内酯类化合物,它的特点是具有含有过氧桥结构,在此之后陆续研制出了双氢青蒿素(蒿甲醚)、青蒿琥酯等多种青蒿素衍生物,本文拟通过体外肿瘤细胞实验来研究青蒿素及其衍生物对肺鳞癌细胞系YTMLC及SK-MES-1中瘤细胞的抑制作用,并对其抑制机制进行探究。方法：采用肿瘤细胞体外培养技术,通过FCM分析、体外肿瘤细胞筛选及共聚焦显微技术来研究青蒿素及其衍生物对肺鳞癌细胞系YTMLC及SK-MES-1肿瘤细胞的抑制作用。结果：青蒿素及其衍生物对SK-MES-1细胞集抑制作用十分明显,通过实验和对比发现,集落形成数明显减少,这种数量上的差异有统计学意义(P细胞水平上,集落中细胞间较为松散,各个细胞状态相对来说较差,抑制率随着用药浓度增高十分明显。对照组细胞特异性荧光染色较少,仅见模糊的荧光背景,p-JNK水平高于对照组,差异具有统计学意义(P细胞分别作用24,48,72小时,青蒿素对YTMLC细胞的生长抑制作用与浓度和时间密切相关。通过研究发现,药物浓度越大,作用时间较长时,抑制率也有显著提升。结论：青蒿素及其衍生物双氢青蒿素对肺鳞癌细胞系YTMLC及SK-MES-1肿瘤细胞有显著的抑制作用。

关键词：青蒿素双氢青蒿素青蒿琥酯肺鳞癌细胞抑制机制研究

抑制肺鳞癌细胞FANCM和USP1基因对顺铂的增敏效应

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江苏大学学报（医学版） 2016年第2期26卷 147-153页

作者：李玫瑜李坚陈康江苏大学附属医院呼吸内科江苏镇江212001

目的:研究抑制FANCM和USP1基因后,人肺鳞癌SK-MES-1细胞株FA/BRCA通路激活状态以及对顺铂敏感性的变化。方法:用脂质体转染试剂将FANCM-siRNA和USP1-siRNA分别和共转染于SK-MES-1细胞株,采用蛋白质印迹法测定转染后FANCM和USP1蛋白表达... 详细信息

目的:研究抑制FANCM和USP1基因后,人肺鳞癌SK-MES-1细胞株FA/BRCA通路激活状态以及对顺铂敏感性的变化。方法:用脂质体转染试剂将FANCM-siRNA和USP1-siRNA分别和共转染于SK-MES-1细胞株,采用蛋白质印迹法测定转染后FANCM和USP1蛋白表达,并检测转染前后经DDP处理后细胞FANCD2蛋白单泛素化水平。免疫荧光染色检测胞核内FANCD2核聚小体表达。CCK-8法测定转染前后细胞生存率的变化;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率。结果:转染FANCM-siRNA和USP1-siRNA后,SK-MES-1细胞中FANCM和USP1蛋白表达均较转染前明显降低。转染FANCM-siRNA后经顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体表达明显下调;转染USP1-siRNA后,顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体形成明显增加;转染USP1-siRNA后细胞生存率和细胞凋亡率高于转染FANCM-siRNA,同时共转染USP1-siRNA+FANCM-siRNA后细胞对顺铂的致敏效应与转染USP1-siRNA相似。结论:沉默FANCM和USP1基因后,通过阻断FA/BRCA通路,抑制其DNA修复功能,导致SKMES-1细胞对顺铂的敏感性增高,其中沉默USP1基因的增敏效应更为明显。

关键词：肺鳞癌细胞 FA/BRCA通路顺铂 FANCM USP1 siRNA