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LncRNA LUCAT1靶向miR-502-5p对人视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的影响

中华实验眼科杂志 2023年第4期41卷 321-329页

作者：邢枫李永明高明敏河南省人民医院眼科河南省立眼科医院郑州450003 河南省人民医院神经外科郑州450003

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(miR)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。方法收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本,... 详细信息

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(miR)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。方法收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本,正常视网膜组织标本(12例眼球破裂伤、7例眼球萎缩、8例眼球穿通伤合并有色素膜嵌顿)取自同期在河南省立眼科医院行眼球摘除术的27例患者。采用实时荧光定量PCR检测LncRNA LUCAT1和miR-502-5p在RB组织、细胞系(Y-79、WERI-Rb-1、HXO-RB44)及人视网膜上皮细胞(ARPE-19)中的表达。将RB细胞Y-79分为对照组、小干扰RNA(si)-LncRNA LUCAT1组、si-对照(con)组、pcDNA组、pcDNA-LncRNA LUCAT1组、miR-con组、miR-502-5p组、si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组和si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组,分别转染相应试剂。采用Western blot法检测MMP2和MMP9蛋白表达;采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增生活力;采用克隆形成实验检测细胞增生能力;采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验和实时荧光定量PCR验证LncRNA LUCAT1对miR-502-5p的靶向调控作用。结果RB组织中LncRNA LUCAT1表达量为2.73±0.34,明显高于正常视网膜组织的1.00±0.15;miR-502-5p表达量为0.42±0.06,明显低于正常视网膜组织的1.00±0.13,差异均有统计学意义(t=24.190、21.049,均P<0.001)。人RB细胞系Y-79、WERI-Rb-1和HXO-RB44中LncRNA LUCAT1表达水平明显高于ARPE-19细胞,miR-502-5p表达水平明显低于ARPE-19细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量,MMP2、MMP9蛋白相对表达量,吸光度(A)值,细胞增生、迁移、侵袭数量较对照组均明显减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-502-5p组miR-502-5p表达量高于miR-con组,MMP2、MMP9蛋白相对表达量,细胞活力A值,细胞增生、迁移、侵袭数量少于miR-con组,差异均有统计学意义(t=20.274、14.884、14.181、12.692、17.749、20.889、21.913,均P<0.001)。si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组miR-502-5p表达量低于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组,MMP2、MMP9蛋白相对表达量,细胞活力A值,细胞增生、迁移、侵袭数量高于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组,差异均有统计学意义(t=14.097、15.839、15.757、11.860、16.235、16.565、16.487,均P<0.001)。与LncRNA LUCAT1-野生型共转染时,miR-502-5p组相对荧光素酶活性值低于miR-con组,差异有统计学意义(t=16.379,P<0.001)。pcDNA-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量高于pcDNA组,miR-502-5p表达量低于pcDNA组,si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量低于si-con组,miR-502-5p表达量高于si-con组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制LncRNA LUCAT1表达通过靶向上调miR-502-5p可减弱人RB细胞的增生、迁移和侵袭能力。

关键词：视网膜母细胞瘤 miR-502-5p 增生迁移侵袭长链非编码RNA 肺癌相关转录因子1

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