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肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径

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第三军医大学学报 2011年第13期33卷 1338-1341页

作者：姜慧贺潇袁军王虹李忱炜董杰崔瑾董姗姗周爱娥张雪梅胥文春尹一兵何於娟重庆医科大学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制。方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制。瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响。AnnexinV-FITC/PI双标法... 详细信息

目的探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制。方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制。瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响。AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡。琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA片段化现象。免疫组化和Western blot检测MAPK1/3蛋白表达的变化。结果将人THP-1细胞分别与0.05、0.1、0.5、1、2.5、5μg/ml Ply共同孵育后,在24、48、72、96 h用MTT法检测细胞增殖抑制率,发现Ply对人THP-1细胞具有明显的增殖抑制作用,并且呈剂量和时间依赖性,IC50(24 h)为1.31μg/ml;0.05μg/ml和0.1μg/ml Ply分别处理THP-1细胞12 h后,通过瑞氏染色法观察人THP-1细胞可见凋亡小体及核碎裂象等典型的凋亡形态学改变;用0.05μg/ml Ply和0.1μg/ml Ply作用THP-1细胞12 h后细胞早期凋亡率分别为11.83%和48.45%(P<0.05);提取凋亡THP-1细胞DNA,进行琼脂糖凝胶电泳可见典型的"梯状"条带;Ply作用于人THP-1细胞后,胞内MAPK1/3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Ply可诱导人THP-1细胞凋亡,此作用涉及MAPK1/3信号通路的参与。

关键词：肺炎链球菌溶血素 THP-1细胞凋亡 MAPK1/3通路

肺炎链球菌溶血素致脑损伤中细胞凋亡及凋亡诱导因子的变化及意义

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中华神经医学杂志 2011年第10期10卷 1009-1013页

作者：王越王怀立禚志红李国栋田培超罗强郑州大学第一附属医院儿内科郑州450052

目的探讨肺炎链球菌溶血素（PLY）致感染性脑损伤中细胞凋亡及凋亡诱导因子（AIF）的表达及意义。方法SD大鼠80只按随机数字表法分为PLY组颈内动脉注射0．2mL（7μg）PLY]和生理盐水（NS）组（颈内动脉注射等体积NS），每组40只。每组... 详细信息

目的探讨肺炎链球菌溶血素（PLY）致感染性脑损伤中细胞凋亡及凋亡诱导因子（AIF）的表达及意义。方法SD大鼠80只按随机数字表法分为PLY组颈内动脉注射0．2mL（7μg）PLY]和生理盐水（NS）组（颈内动脉注射等体积NS），每组40只。每组按观察时间点分为6h、12h、24h、48h4个亚组，每亚组10只，其中5只注射EB，甲酰胺法测定脑组织EB含量判断血脑屏障（BBB）的破坏程度。5只不注射EB，取脑组织切片，应用免疫组化和TUNEL染色分别检测脑组织神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、AIF蛋白含量和细胞凋亡。结果与NS组比较，造模后各时间点PLY组大鼠脑组织EB、NSE、GFAP、AIF蛋白含量均较高。细胞凋亡较多，差异均有统计学意义（P〈0．05）；PLY组大鼠脑组织凋亡细胞数与AIF蛋白的表达呈正相关关系（r=0．959，P=0．000）。结论细胞凋亡参与了PLY诱导的脑损伤的发展过程，A1F可能介导了神经细胞的凋亡。

关键词：肺炎链球菌溶血素感染性脑损伤细胞凋亡凋亡诱导因子

肺炎链球菌溶血素致幼鼠感染性脑损伤动物模型的建立

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实用儿科临床杂志 2011年第12期26卷 937-939页

作者：徐云娜王越王怀立禚志红田培超罗强李国栋郑州大学第一附属医院儿科郑州450052 郑州大学生物系郑州450052

目的探讨经颈内动脉注射肺炎链球菌溶血素（PLY）建立感染性脑损伤动物模型的方法和可行性。方法采用颈内动脉注射PLY制作幼年大鼠感染性脑损伤动物模型。选取健康普通级1月龄SD大鼠160只,体质量100~120 g,雌雄不限,随机分为PLY组和对照... 详细信息

目的探讨经颈内动脉注射肺炎链球菌溶血素（PLY）建立感染性脑损伤动物模型的方法和可行性。方法采用颈内动脉注射PLY制作幼年大鼠感染性脑损伤动物模型。选取健康普通级1月龄SD大鼠160只,体质量100~120 g,雌雄不限,随机分为PLY组和对照组,其中PLY组（实验组）80只,颈内动脉注射PLY0.2 mL（7μg）;对照组80只,颈内动脉注射等体积9 g.L-1盐水。根据不同观察时间点（注射后6 h、12 h、24 h及48 h）,将PLY组SD大鼠分为4个亚组,每个亚组中分别有10只注射伊文思蓝（EB）,测定不同时间点脑组织EB水平;注射EB组经右颈外静脉近心端注入20 g.L-1EB（2 ***-1）,推注时间1~2 min。各组处理后,待观察至相应时间点,将大鼠麻醉行心脏灌注后断头取脑,用于制作脑组织标本,以备观察。采用干湿质量法检测其脑组织含水量（BWC）,甲酰胺法测定其脑组织EB水平,利用免疫组织化学法检测其脑组织神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果与对照组相比,HE染色光镜下观察,PLY组脑组织可见血管扩张、血管周围间隙增宽、炎细胞浸润、神经元空泡变性、星形胶质细胞体积增大肿胀、细胞核固缩等改变。各时间点PLY组BWC、EB水平、NSE及GFAP表达量均明显高于对照组,差异均有统计学意义（Pa〈0.01）。结论经幼鼠颈内动脉注射PLY可以成功建立幼鼠感染性脑损伤模型。

关键词：肺炎链球菌溶血素感染性脑损伤大鼠

肺炎链球菌溶血素致大鼠脑损伤模型髓样细胞触发受体1的动态变化及意义

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中华实用儿科临床杂志 2014年第18期29卷 1404-1406页

作者：田培超王怀立刘敏陈铮刘玉峰郑州大学第一附属医院儿科中心 450052 郑州市儿童医院 450052

目的探讨髓样细胞触发受体1（TREM-1）在肺炎链球菌溶血素（PLY）致大鼠脑损伤中的动态变化及意义.方法将64只SD大鼠按简单随机法均等分为PLY组和对照组,分别经左侧颈内动脉注射0.1mL PLY和等体积灭菌9g/L盐水;观察注射后4h、6h、12 h... 详细信息

目的探讨髓样细胞触发受体1（TREM-1）在肺炎链球菌溶血素（PLY）致大鼠脑损伤中的动态变化及意义.方法将64只SD大鼠按简单随机法均等分为PLY组和对照组,分别经左侧颈内动脉注射0.1mL PLY和等体积灭菌9g/L盐水;观察注射后4h、6h、12 h和24 h不同时间点脑组织大体和组织学变化,并应用免疫组织化学法检测脑组织中神经细胞损伤标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）蛋白表达水平,同时应用酶联免疫吸附法检测TREM-1、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）表达水平.结果 PLY组脑组织大体和组织学结果提示大鼠脑损伤存在,且脑组织中GFAP和NSE蛋白表达及TNF-α和IL-6表达在4h开始增加,随注射时间点推移,其表达水平动态增加,与相应时间点对照组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.05）.PLY组脑组织TREM-1蛋白表达在4h明显增加,在6h有所下降,但仍高于对照组,差异均有统计学意义（P均＜0.05）,12 h与24 h TREM-1蛋白表达水平明显下降,与对照组相比差异无统计学意义（P均＞0.05）.结论 TREM-1蛋白表达在PLY诱发的大鼠脑损伤早期明显上调,可能通过促进炎性因子TNF-α和IL-6的表达而参与脑损伤的病理发展过程.

关键词：肺炎链球菌溶血素感染性脑损伤炎症髓样细胞触发受体1

肺炎链球菌溶血素致感染性脑损伤动物模型的建立

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肺炎链球菌溶血素致感染性脑损伤动物模型的建立

作者：徐云娜郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的感染性脑损伤包括颅内感染（结核性脑膜炎、病毒性脑炎及化脓性脑膜炎）和颅外感染（中毒性痢疾及败血症、中毒性肺炎等）等所致的脑损伤,是儿科常见的危重症之一。细菌性感染是其主要的病因,以革兰阳性球菌感染最为常见... 详细信息

背景和目的感染性脑损伤包括颅内感染（结核性脑膜炎、病毒性脑炎及化脓性脑膜炎）和颅外感染（中毒性痢疾及败血症、中毒性肺炎等）等所致的脑损伤,是儿科常见的危重症之一。细菌性感染是其主要的病因,以革兰阳性球菌感染最为常见,其中肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, Spn）是婴幼儿中枢神经系统感染最常见的病原体之一,其广泛分布于自然界,常寄居于正常人的鼻咽腔中,儿童鼻咽部带菌率可高达24%-32%,研究显示Spn是细菌性肺炎及脑膜炎的主要病原体,同时也是儿童脑膜炎致死、致残率最高的病原体。Spn感染后患儿多表现为突然发病,出现惊厥、高热与昏迷等伴随症状,尸检可以发现脑组织肿胀、淤血,脑重量与容积均增加。报道称革兰氏阳性菌崩解后产生的溶血素（Pneumolysin, PLY）在感染性脑损伤中具有重要的作用,是最为重要的肺炎球菌细胞毒素,是肺炎球菌中唯一能破坏机械性宿主防御、补体和免疫应答的毒力因子。可引起广泛的毒性效应,如溶血、纤毛颤动、磷脂酶活化。PLY是一种属于巯基激活毒素家族的,所有肺炎链球菌都有的一种胞内蛋白。但目前PLY在感染性脑损伤中发生发展的确切机制尚未完全阐明。研究显示将含有肺炎链球菌菌落的生理盐水注入小鼠动脉内制成动物脑膜■炎模型后,血脑屏障（Blood-brain barrier, BBB）的紧密连接被破坏;另有研究发现,纯化的PLY在体外实验中可以诱导小胶质细胞和神经细胞凋亡。但是目前,国内外学者多采用腹腔、脑内直接注射肺炎链球菌或体外神经细胞培养等方法来研究肺炎链球菌及其溶血素致脑损伤的机制,直接用PLY注入实验动物体内的方法建立感染性脑损伤模型尚未见报道。本研究将根据人体疾病发生过程,客观模拟婴幼儿经血流途径致脑损伤感染过程建立动物模型,将革兰氏阳性菌的主要毒力因子—肺炎链球菌溶血素（PLY）直接注入实验动物动脉血流,使其到达脑组织,而引起病理改变,为更深入、全面和客观地研究PLY至感染性脑损伤的发病机制而打下基础。材料和方法选取健康普通级1月龄SD大鼠160只,体重100～120g,平均（105±10g）,雌雄不限,随机平均分为PLY组和NS组,其中PLY组（实验组）：SD大鼠80只,颈内动脉注射PLY（剂量：0.2m1（7μg））,NS组（对照组）：SD大鼠80只,颈内动脉注射等体积生理盐水。根据不同观察时间点（注射后6h、12h、24h及48h）,将PLY组SD大鼠分为4个亚组,每个亚组中分别有10只注射EB,测定不同时间点脑组织EB含量;注射EB组经右颈外静脉近心端注入2%EB（2m1/kg）,推注时间大约1-2分钟。各组处理后,待观察至相应时间点,将大鼠麻醉行心脏灌注后断头取脑,用于制作脑组织标本,以备观察。脑组织EB含量测定采用甲酰胺法,不同时间点BWC测定采用干湿重法,此外,利用免疫组化法检测脑组织NSE、GFAP蛋白的表达。应用SPSS 16.0软件进行统计分析,采用的统计方法为t检验;检验水准为P＜0.05。结果 1.形态学观察：与NS组相比,采用HE染色光镜下观察,PLY组脑组织可见血管扩张、血管周围间隙的增宽、炎细胞浸润、神经元空泡变性、星形胶质细胞体积的增大肿胀、细胞核固缩等改变。 2.脑组织含水量和EB含量：注射6h后,PLY组脑组织含水量和EB含量开始增加,24h达到高峰,各时间点均显著高于NS组（p＜0.05）。 3.脑组织NSE和GFAP蛋白含量：注射6h后,PLY组NSE、GFAP蛋白开始增加,24h达高峰,48h仍维持较高水平,各时间点均显著高于NS组（p＜0.05）。 4.相关性分析：PLY组脑组织含水量和EB含量、NSE蛋白表达量和脑组织含水量、NSE蛋白表达量和EB含量、GFAP蛋白表达量和脑组织含水量、GFAP蛋白表达量和EB含量、NSE蛋白表达量和GFAP蛋白表达量均成正相关。结论 1.经大鼠颈内动脉注射PLY后,脑组织含水量增加,脑组织EB含量增加,血脑屏障（BBB）通透性增加,脑组织NSE蛋白、GFAP蛋白表达均增加,形态学方面发现细胞毒性和血管源性脑水肿病理改变,意味着血脑屏障破坏、脑水肿形成、神经元变性坏死及反应性星形细胞胶质化,表明该方法可以成功建立PLY致幼鼠感染性脑损伤模型。 2.在PLY致感染性脑损伤模型中,脑组织含水量和EB含量呈正相关,NSE蛋白表达量及GFAP蛋白表达量与脑组织含水量和EB含量呈正相关,提示它们均参与了BBB的破坏,而且可能促进了PLY所致大鼠感染性脑损伤的发生。

关键词：肺炎链球菌溶血素感染性脑损伤大鼠

肺炎链球菌溶血素Ply蛋白疫苗及BLP技术应用的研究

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肺炎链球菌溶血素Ply蛋白疫苗及BLP技术应用的研究

作者：侯宏嘉吉林大学

学位级别：硕士

肺炎链球菌是种常见的致病菌。它是社区获得性肺炎最主要的致病原，同时还能够引起鼻窦炎、中耳炎和脑膜炎等。并且在HIV感染者中，肺炎链球菌还能够引起菌血症等疾病。在众多发展中国家中，肺炎链球菌所引起的肺炎是老人与儿童最主要... 详细信息

肺炎链球菌是种常见的致病菌。它是社区获得性肺炎最主要的致病原，同时还能够引起鼻窦炎、中耳炎和脑膜炎等。并且在HIV感染者中，肺炎链球菌还能够引起菌血症等疾病。在众多发展中国家中，肺炎链球菌所引起的肺炎是老人与儿童最主要的杀手之;而在发达国家中，由肺炎链球菌导致的中耳炎也是儿科中最常见的疾病之。目前，临床上被广泛使用是肺炎链球菌结合疫苗。这种疫苗通过将肺炎链球菌的荚膜多糖结合在载体蛋白上以提高免疫原性。但是结合苗疫苗到血清型的限制，且由于工艺复杂成本高昂，在发展中国家无法大规模推广。肺炎链球菌蛋白疫苗则由于具有血清型不依赖、相对廉价、免疫原性好等特点，而成为了目前肺炎链球菌疫苗研发的热点。肺炎链球菌溶血素蛋白（Ply）是肺炎链球菌主要的毒力因子之，在肺炎链球菌侵袭和定植的过程中发挥着重要的作用。同时在已发现的各株肺炎链球菌间具有良好的保守性。正是由于具有这些特性，本论文将Ply蛋白作为肺炎链球菌蛋白疫苗组分之。Ply作为溶血素，其野生型具有很强的细胞毒性，无法直接作为疫苗的免疫原使用。野生型Ply通过其羧基末端的色氨酸富集环（Trp-richloop）插入到细胞膜上，并寡聚化形成小孔，从而造成细胞膜破碎。色氨酸富集环在Ply发挥其溶血活性的过程中发挥着重要的作用。本研究对Ply色氨酸富集环上两个关键的氨基酸位点进行点突变，设计了Ply的减毒突变体PlyM2。利用大肠杆菌原核表达系统成功表达了PlyM2及PlyWT，并进行了纯化。经过变温圆二色谱与变温荧光光谱检测，证明了PlyM2相对于其野生型PlyWT，结构无大改变、热稳定性略有降低。通过减毒安全性实验证明了PlyM2无明显细胞毒性，减毒成功。对小鼠使用氢氧化铝佐剂皮下免疫PlyM2，证明了PlyM2具有良好的免疫原性。且在小鼠肺炎链球菌血清型14鼻腔攻毒模型中，得到了与市售疫苗相近的保护率。在传统的皮下免疫方式之外，本论文还尝试使用Bacteria-Like Particle(BLP)技术以进行鼻腔免疫。BLP技术是指：乳酸乳球菌经过热酸处理后，核酸及绝大部分蛋白质均被酸解，仅残留肽聚糖骨架形成的细菌样颗粒，将融合了肽聚糖结合标签的抗原蛋白结合在这样的颗粒表面，形成个具有细菌状态的免疫原。这样的免疫原保持有细菌样的形态，具有良好的免疫原性，特别适合于需要黏膜免疫的疫苗应用。本论文成功构建了带有肽聚糖标签的融合蛋白PlyPA。将PlyPA结合到BLP上，并通过免疫荧光共聚焦显微观察证明了PlyPA成功的结合在了BLP的表面。用BLP-PlyPA鼻腔免疫小鼠，证明了这种方式相较传统的氢氧化铝佐剂皮下免疫方式能够获得更高的呼吸道粘膜中IgA产生量。上述实验证明了PlyM2作为肺炎链球菌蛋白疫苗组分之的可行性，并提供了可行的鼻腔免疫的方式。

关键词：肺炎链球菌溶血素肺炎链球菌蛋白疫苗新型佐剂 BLP技术

肺炎链球菌溶血素致脑损伤细胞凋亡及凋亡诱导因子的表达及意义

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肺炎链球菌溶血素致脑损伤细胞凋亡及凋亡诱导因子的表达及意义

作者：王越郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的肺炎链球菌溶血素（pneumolysin, PLY）是肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, ***）溶解释放的一个主要的毒素,是***的一个主要毒力因子,具有多种功能,能够破坏血脑屏障的紧密连接、引起细胞溶解、刺激炎症因子释放... 详细信息

背景和目的肺炎链球菌溶血素（pneumolysin, PLY）是肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, ***）溶解释放的一个主要的毒素,是***的一个主要毒力因子,具有多种功能,能够破坏血脑屏障的紧密连接、引起细胞溶解、刺激炎症因子释放、诱导细胞凋亡等,引起大脑严重损害。海马及大脑皮层神经元的凋亡使患儿学习、记忆能力下降,导致患儿智力低下,严重影响患儿生活质量。近年来PLY致脑损伤机制备受关注,但多局限在体外研究,缺乏直接客观的体内研究。脑损伤后既有细胞坏死又有细胞凋亡。凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor, AIF）是在研究细胞凋亡时发现的,Susin等在1996年发现存在广谱的胱天蛋白酶（caspase）抑制剂Z-VAD-FMK时,鼠肝细胞线粒体膜间J隙组分能够使分离的HeLa细胞核染色体以非依赖于caspases的方式发生异常凝集和DNA大片段的形成,遂将其命名为AIF°AIF在感染性脑损伤中扮演者重要角色,但对其具体作用机制及调控机制的了解较少。有研究表明PLY可以通过线粒体释放AIF途径诱导脑细胞凋亡,但却局限在体外研究。本实验通过颈内动脉注射PLY制作感染性脑损伤动物模型,体内研究细胞凋亡及AIF在***所致脑损伤中的作用,为肺炎链球菌脑膜炎的临床治疗拓展新思路。材料与方法将80只幼鼠随机分成溶血素组（PLY组,n=40）,左颈内动脉注射0.2mL（7μg）PLY;生理盐水组（NS组,n=40）,颈内动脉注射等体积生理盐水。两组按注射后不同时间点分为6h、12h、24h、48h4个亚组,每亚组均10只。于预定时间点处死动物,制备脑组织标本。干湿重法测脑含水量（brain watercontent, BWC）,甲酰胺法测定伊文思兰（Evan’s blue, EB）含量,免疫组织化学技术（SP法）测定脑内NSE、GFAP、AIF蛋白表达情况,原位末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡。所有数据采用SPSS17.0软件进行统计分析,显著性水准为a＜0.05。结果 1形态学改变：PLY组左侧脑体积较右侧增大,脑组织肿胀发亮,脑膜紧张粘连,脑血管明显充血。HE染色光镜下观察PLY组脑血.管间隙增宽,神经元细胞、胶质细胞不同程度肿胀、空泡变性,NS组没有上述变化。 2 PLY组BWC、EB含量、NSE、GFAP（?）水平各时间点均明显高于对照组。差异有统计学意义（p＜0.05）。 3 PLY组大脑皮层、海马区可见细胞凋亡,随时间逐渐增多,NS组可以见到少许凋亡细胞。PLY注射后6hAIF、凋亡细胞数均明显增加,AIF在24h达高峰,凋亡细胞数在48h仍有较高表达,各时间点与对照组比较均有显著性差异（p＜0.05）。 4 AIF含量与TUNEL检测细胞凋亡结果呈正相关,r=0.879,p＜0.05。结论 1 PLY可以通过诱导神经细胞凋亡方式导致脑损伤。 2 PLY通过线粒体释放AIF途径诱导神经细胞凋亡。

关键词：肺炎链球菌溶血素感染性脑损伤细胞凋亡凋亡诱导因子

野生型肺炎链球菌溶血素通过PI3K-I/Akt/mTOR途径诱导A549细胞自噬

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重庆医科大学学报 2020年第8期45卷 1156-1161页

作者：涂朝林李朴周小兰陈维贤重庆医科大学附属第二医院检验科重庆400010 重庆医科大学附属第二医院病案科重庆400010

目的:研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。方法:常规培养人肺上皮A549细胞与野生型Sp;将GFP-LC3真核载体转染A549细胞,分为实验组(Sp,MOI=30∶1)、阴性对照组[渥曼青霉素(wortmannin,... 详细信息

目的:研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。方法:常规培养人肺上皮A549细胞与野生型Sp;将GFP-LC3真核载体转染A549细胞,分为实验组(Sp,MOI=30∶1)、阴性对照组[渥曼青霉素(wortmannin,WT),2μmol/L 2 h,自噬抑制剂]、阳性对照组[雷帕霉素(rapamycin,Rapa),1 mmol/L 10 h,mTOR抑制剂]和参照组(WT和Sp共同处理),各组处理时间均为1、2、3和4 h;荧光显微镜观察各组自噬点形成,透射电镜观察各组细胞自噬体结构,Western blot检测各组微管相关蛋白轻链-Ⅰ/Ⅱ(microtuble-associated protein light chain 3-Ⅰ/Ⅱ,LC3-Ⅰ/Ⅱ)、磷酸化UNC-51-K激酶1(phosphorylated UNC-51-like kinase1,P-ULK1)和螯体1(sequestosome 1,P62)的表达;将溶血素表达载体RFP-PLY(red fluorescent protein-pneumolysin)、GFP-LC3或(和)RFP-PLY转染/共转染A549细胞,Western blot检测各组磷酸肌醇3-激酶-Ⅰ/Ⅲ(phosphoinositide 3-kinase-Ⅰ/Ⅲ,PI3K-Ⅰ/Ⅲ)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、Beclin-1蛋白(Beclin 1 protein,Beclin-1)和哺乳动物雷帕霉素靶(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达。结果:处理A549细胞3 h后,与阴性对照组(WT)相比,Sp感染后,自噬点明显增多(t=41.313,P=0.001),电镜观察到典型的自噬体结构,LC3-Ⅱ蛋白表达明显上调(t=121.592,P=0.000);A549细胞转染RFP-PLY处理3 h后,与阴性对照组(WT)相比,Sp感染同样观察到明显的自噬现象,PI3K-I、Akt蛋白和mTOR表达下调(tPI3K-I=16.544,PPI3K-I=0.004;tAkt=22.679,PAkt=0.002;tmTOR=19.503,PmTOR=0.003),而PI3K-Ⅲ和Beclin-1水平无明显差异(tPI3K-Ⅲ=3.572,PPI3K-Ⅲ=0.070;tBeclin-1=0.799,PBeclin-1=0.508)。结论:野生型Sp诱导A549细胞自噬可能通过PI3K-I/Akt/mTOR信号途径。

关键词：自噬肺炎链球菌溶血素磷酸肌醇3-激酶-I 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶

褪黑素对肺炎链球菌溶血素致大鼠脑损伤细胞凋亡的影响

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实用儿科临床杂志 2012年第8期27卷 619-621,636页

作者：禚志红王怀立王越徐云娜罗强刘玉峰郑州大学第一附属医院儿科郑州450052

目的探讨褪黑素(MT)对肺炎链球菌溶血素(PLY)致脑损伤细胞凋亡的影响。方法幼鼠84只随机分成3组:9 g.L-1盐水组(NS组)28只,颈内动脉注射9 g.L-1盐水;PLY组28只,颈内动脉注射0.2 mL(7μg)PLY;MT组28只,腹腔注射(1 g.L-1)MT 10 ***-1,15 ... 详细信息

目的探讨褪黑素(MT)对肺炎链球菌溶血素(PLY)致脑损伤细胞凋亡的影响。方法幼鼠84只随机分成3组:9 g.L-1盐水组(NS组)28只,颈内动脉注射9 g.L-1盐水;PLY组28只,颈内动脉注射0.2 mL(7μg)PLY;MT组28只,腹腔注射(1 g.L-1)MT 10 ***-1,15 min后颈内动脉注射0.2 mL(7μg)PLY。每组按照注射后不同的时间点(24 h、48 h)分为2个亚组。预定时间点处死动物,制备脑组织标本。干湿质量法测定其脑组织含水量(BWC),甲酰胺法测定伊文思兰(EB)水平,免疫组织化学技术测定凋亡诱导因子(AIF)表达,原位末端标记法检测细胞凋亡。结果 HE染色光镜下可见PLY组血管间隙增宽,大脑皮质炎性细胞浸润,胶质细胞和神经元细胞有不同程度肿胀、空泡变性。NS组无上述病理变化。MT组大鼠脑组织改变较PLY组轻。PLY组各时间点脑组织BWC水平、EB水平、AIF水平明显增加,24 h高于48 h,差异有统计学意义。PLY组各时间点凋亡细胞数明显增加,48 h高于24 h,差异有统计学意义。各时间点PLY组与对照组比较均有统计学差异。予以MT干扰后各时间点脑组织各指标以及凋亡细胞数均降低,与PLY组比较,差异有统计学意义。结论 MT能够降低AIF表达,减少神经细胞凋亡,保护脑组织。

关键词：褪黑素肺炎链球菌溶血素感染性脑损伤细胞凋亡凋亡诱导因子