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复方丹参滴丸对NAFLD小鼠肝脂肪变性和肠道菌群的影响

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复方丹参滴丸对NAFLD小鼠肝脂肪变性和肠道菌群的影响

作者：张媛媛郑州大学

学位级别：硕士

背景非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是代谢综合征在肝脏的表现,其患病率不断上升,是目前最常见的慢性肝病。近年来,随着肠肝轴理论的提出,以肠道菌群为靶点研究NAFLD的发病机制逐渐成为研究热点。肠道... 详细信息

背景非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是代谢综合征在肝脏的表现,其患病率不断上升,是目前最常见的慢性肝病。近年来,随着肠肝轴理论的提出,以肠道菌群为靶点研究NAFLD的发病机制逐渐成为研究热点。肠道菌群的改变可以引起肝脏炎症及脂肪积累,进而导致NAFLD。复方丹参滴丸主要由丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹酚酸、皂苷等组成。研究表明,丹参可以减轻肝脂肪变性和纤维化,丹参酚冰片酯可以通过调节肠道菌群减轻高脂饮食小鼠的肥胖、肝脂肪变性及低度全身炎症。但是复方丹参滴丸改善非酒精性脂肪肝病的具体机制仍未阐明。我们推测复方丹参滴丸可能是通过调节肠道菌群来改善非酒精性脂肪性肝病。目的观察复方丹参滴丸对高脂饮食小鼠非酒精性脂肪性肝病及肠道菌群的影响,并初步探究复方丹参滴丸、NAFLD、肠道菌群三者之间的关系。方法1.32只KKAy雄性小鼠予高脂饮食4周建立NAFLD小鼠模型,随机分为模型（Model）组、低剂量复方丹参滴丸（LCDDP）组、中剂量复方丹参滴丸（MCDDP）组、高剂量复方丹参滴丸（HCDDP）组。同时,8只C57BL/6级雄性小鼠作为对照（Con）组予普通饲料喂养。LCDDP、MCDDP、HCDDP组分别给予 13.5mg/kg/d、27mg/kg/d、40.5mg/kg/d 复方丹参滴丸灌胃,Model 组及Con组给予等量的蒸馏水灌胃。各剂量复方丹参滴丸干预12周后,测定各组小鼠血脂水平及肝组织炎症指标水平,采用苏木精-伊红染色（HE）、油红O染色以及Masson染色切片、透射电镜观察各组小鼠肝组织病变程度,同时采用qRT-PCR和Western blot观察各组小鼠肝脏Toll样受体4（TLR4）信号通路因子mRNA及蛋白水平的表达。2.运用16SrRNA测序技术来研究复方丹参滴丸对NAFLD小鼠肠道菌群结构的影响。3.运用GC-MS方法对各组小鼠粪便短链脂肪酸（SCFAs）的含量进行测定。4.采用ELISA试剂盒测定各组小鼠血清LPS（内毒素）含量,运用HE染色观察各组小鼠回肠粘膜组织病理变化,以及透射电镜观察各组小鼠回肠粘膜的紧密连接结构的变化。结果1.动物实验表明,与模型组相比,各剂量复方丹参滴丸组NAFLD小鼠血清TCHO（总胆固醇）水平均显著降低（P＜0.01）,HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇）水平降低（P＜0.05）;并且MCDDP组和HCDDP组肝组织肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor,TNF-α）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）和白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的水平降低（P＜0.05）,肝组织油红O及HE切片染色、Masson染色结果显示,复方丹参滴丸可显著改善NAFLD小鼠肝细胞脂质沉积及纤维化。MCDDP组和HCDDP组中NAFLD小鼠肝脏Toll样受体4（TLR4）信号通路中TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、核因子κB p65（NF-κB p65）mRNA及蛋白水平的表达降低（P＜0.05）。2.16srRNA显示:①复方丹参滴丸干预后,增加了 NAFLD小鼠与Con组小鼠肠道菌群的相似性,改善了 NAFLD小鼠肠道菌群紊乱。②与Model组相比,MCDDP组降低了 NAFLD小鼠肠道菌群中的厚壁菌门/拟杆菌门（Firmicues to Bacteroidetes,F/B）的比值（P＜0.05）,并且MCDDP组产丁酸盐细菌毛螺菌科（norank-f-Lachnospiraceae）的丰度显著增加。3.与Model组相比,Con组小鼠肠道内乙酸（Ace）含量降低（P＜0.05）,戊酸（Val）及己酸（Hex）含量均升高（P＜0.05）,总短链脂肪酸（SCFA）含量减低（P＜0.05）;LCDDP组小鼠肠道内乙酸（Ace）含量降低（P＜0.05）,己酸（Hex）和异己酸（Isohex）含量增高（P＜0.05）,总短链脂肪酸（SCFAs）含量降低（P＜0.05）;MCDDP组丁酸（But）含量增高（P＜0.05）;MCDDP组和HCDDP组中己酸（Hex）和异己酸（Isohex）含量增高（P＜0.05）。各剂量复方丹参滴丸组与Con组相比短链脂肪酸无差异。4.与Model组相比,MCDDP组NAFLD小鼠血清内毒素的含量降低（P＜0.05）,回肠组织HE切片染色结果显示,复方丹参滴丸可抑制肠上皮细胞坏死脱落,透射电镜显示,复方丹参滴丸可以提高NAFLD小鼠肠上皮细胞紧密连接完整性。结论复方丹参滴丸可以改善非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏脂质沉积以及炎症反应,其机制可能是通过调节NAFLD小鼠肠道菌群结构,促进丁酸等SCFAs的增加,降低LPS水平,促进肠粘膜机械屏障的恢复,并抑制

关键词：复方丹参滴丸非酒精性脂肪肝病肠道菌群短链脂肪酸肠黏膜机械屏障

芍药汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织机械屏障及细胞因子的影响

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安徽中医药大学学报 2019年第4期38卷 67-71页

作者：陈大光曹晖李令吴东升刘震宇陈鸿飞田娜湖南中医药大学

目的基于结肠组织机械屏障和炎症细胞因子探讨芍药汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、芍药汤组。采用TNBS/乙醇复制溃疡性结肠炎大鼠模型,各组分别使用生理盐水、美沙拉嗪、芍药汤... 详细信息

目的基于结肠组织机械屏障和炎症细胞因子探讨芍药汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、芍药汤组。采用TNBS/乙醇复制溃疡性结肠炎大鼠模型,各组分别使用生理盐水、美沙拉嗪、芍药汤进行干预。比较各组大鼠一般情况、疾病活动指数(disease activity index, DAI)评分,观察结肠组织形态学变化和结肠组织紧密连接,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白细胞介素-4(interleukin-4, IL-4)和内毒素(endotoxin, ET)表达水平。结果与模型组比较,芍药汤组大鼠体质量逐渐回升,腹泻及便血减少;与模型组比较,美沙拉嗪组、芍药汤组DAI评分,组织形态学评分,IL-4、ET、TNF-α表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P肠黏膜机械屏障而发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。

关键词：溃疡性结肠炎芍药汤炎症反应肠黏膜机械屏障

褪黑素对肠缺血再灌注损伤保护作用的临床研究

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江西医药 2012年第9期47卷 763-765页

作者：何化林官喜龙蔡亿群付江丽江西省鹰潭市人民医院普外科鹰潭335000

目的研究褪黑素对肠缺血再灌注损伤(IIRI)的保护作用。方法研究对象随机分为缺血再灌注A组,生理盐水处理B组,地塞米松治疗C组,褪黑素治疗D组,每组20例。手术解除肠缺血前后10min分别静脉注射生理盐水10ml、地塞米松20mg和褪黑素20μg,... 详细信息

目的研究褪黑素对肠缺血再灌注损伤(IIRI)的保护作用。方法研究对象随机分为缺血再灌注A组,生理盐水处理B组,地塞米松治疗C组,褪黑素治疗D组,每组20例。手术解除肠缺血前后10min分别静脉注射生理盐水10ml、地塞米松20mg和褪黑素20μg,手术结束后1h内采外周静脉血,用MDA、SOD试剂盒测定血浆MDA浓度和SOD活性。用NO试剂盒和酶学分光光度法测定血浆NO2-/NO3-水平和血浆D-乳酸水平。观察处理后各组肠管颜色完全恢复时间和术后肛门排气时间。结果褪黑素治疗组与生理盐水处理组和地塞米松治疗组比较,血浆SOD活性明显上升(P肠黏膜机械屏障。

关键词：褪黑素缺血再灌注损伤肠黏膜保护肠黏膜机械屏障

非酒精性脂肪性肝病患者肠黏膜肌球蛋白轻链激酶与紧密连接蛋白Occludin的变化

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哈尔滨医科大学学报 2019年第4期53卷 342-346页

作者：叶艳伟庄丽维薄挽澜哈尔滨医科大学附属第四医院综合内科

目的研究在非酒精性肝病(NAFLD)进展过程中小肠黏膜中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及紧密连接蛋白Occludin的表达。方法 90例患者,分为健康对照组、单纯性脂肪肝(NAFL)组、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)组,每组30例患者。分别用胃镜取十二指肠降... 详细信息

目的研究在非酒精性肝病(NAFLD)进展过程中小肠黏膜中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及紧密连接蛋白Occludin的表达。方法 90例患者,分为健康对照组、单纯性脂肪肝(NAFL)组、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)组,每组30例患者。分别用胃镜取十二指肠降部、结肠镜取回肠末段小肠黏膜。用免疫组化方法检测MLCK在肠黏膜中的表达。用RT-PCR方法检测Occludin在肠黏膜中的表达。结果随NAFLD进展,MLCK在NASH组表达明显增加且具有统计学意义(P肠黏膜通透性参与NAFLD疾病的进展。

关键词：非酒精性脂肪性肝病肠黏膜机械屏障肌球蛋白轻链激酶紧密连接蛋白

不同亚型肠易激综合征患者肠道机械屏障的改变

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甘肃医药 2016年第5期35卷 324-326页

作者：计敏王建蔚蓝显明于林芳兰春燕深圳市龙岗区第二人民医院消化内科广东深圳518112 深圳市龙岗区第二人民医院病理科广东深圳518112 深圳市龙岗区第二人民医院中医科广东深圳518112

目的:观察不同亚型肠易激综合征(IBS)患者肠黏膜机械屏障的变化,探讨这些改变在IBS发病中的可能作用和临床意义。方法:按照罗马Ⅲ标准选取腹泻型(IBS-D组)、便秘型(IBS-C组)及混合型(IBS-M组)IBS患者及正常对照组各20例,检测其结肠黏膜... 详细信息

目的:观察不同亚型肠易激综合征(IBS)患者肠黏膜机械屏障的变化,探讨这些改变在IBS发病中的可能作用和临床意义。方法:按照罗马Ⅲ标准选取腹泻型(IBS-D组)、便秘型(IBS-C组)及混合型(IBS-M组)IBS患者及正常对照组各20例,检测其结肠黏膜标本及血清D-乳酸、DAO水平,并对比分析。结果:对照组微绒毛高度、肠腺深度、黏膜厚度均显著大于各亚型IBS患者(P肠黏膜机械屏障受损在腹泻型IBS的发病中起着更为重要的作用,肠黏膜通透性增高与腹泻症状密切相关。

关键词：肠易激综合征亚型肠黏膜机械屏障腹泻