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HGF/c-Met相关信号通路在大鼠肝脏祖细胞增殖中的作用

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中国老年学杂志 2014年第10期34卷 2800-2803页

作者：臧金锋袁寅高军业钱海鑫泰州市人民医院肝胆外科苏州大学附属第一医院普外科江苏苏州215006

目的探讨HGF/c-Met相关信号通路PI3K/AKT和STAT3在大鼠肝脏祖细胞增殖中的作用。方法选择Wistar大鼠,以CD90.1为标志物,通过免疫磁珠法分离正常肝脏内的祖细胞。对肝脏祖细胞进行体外培养,实验组培养液中加入Su11274,通过Western印迹观... 详细信息

目的探讨HGF/c-Met相关信号通路PI3K/AKT和STAT3在大鼠肝脏祖细胞增殖中的作用。方法选择Wistar大鼠,以CD90.1为标志物,通过免疫磁珠法分离正常肝脏内的祖细胞。对肝脏祖细胞进行体外培养,实验组培养液中加入Su11274,通过Western印迹观察PI3K/AKT和STAT3蛋白表达水平变化。结果实验组和对照组肝脏祖细胞PI3K、AKT蛋白表达无差异(P=0.65,P=0.73)。实验组p-PI3K蛋白第10、12、14天分别为1.36±0.14、1.28±0.15、1.14±0.14;p-AKT蛋白第10、12、14天分别为0.36±0.11、0.31±0.09、0.22±0.11,与对照组相比存在差异(P=0.033,P=0.014)。对照组和实验组肝脏祖细胞STAT3蛋白表达水平相似(P=0.73)。对照组p-STAT3蛋白第6、8、10、12、14天分别为0.22±0.11、0.18±0.06、0.13±0.05、0.13±0.07、0.13±0.05,实验组p-STAT3第6、8、10、12、14天分别为0.22±0.08、0.17±0.05、0.15±0.05、0.11±0.07、0.06±0.02,都出现下调,但实验组更为明显(P肝脏祖细胞的增殖阶段HGF/c-Met的相关下游信号。

关键词：肝脏祖细胞肝细胞生长因子增殖信号传导

三氧化二砷对小鼠肝脏祖细胞生物学特性的影响

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中华实验外科杂志 2013年第10期30卷 2079-2081页

作者：张钰王洪山锁涛付亮鲁超宋陆军复旦大学附属中山医院普外科上海200032

目的观察三氧化二砷（As2O3）对小鼠肝脏祖细胞（AHPCs）增殖及代谢的影响.方法应用改良Seglen二步法原位灌注结合机械离心获取AHPCs,体外培养并持续观察超过40 d.应用免疫荧光技术对AHPC及其形成的克隆进行白蛋白、甲胎蛋白（AFP）... 详细信息

目的观察三氧化二砷（As2O3）对小鼠肝脏祖细胞（AHPCs）增殖及代谢的影响.方法应用改良Seglen二步法原位灌注结合机械离心获取AHPCs,体外培养并持续观察超过40 d.应用免疫荧光技术对AHPC及其形成的克隆进行白蛋白、甲胎蛋白（AFP）和细胞角蛋白19 （CK19）染色.取原代培养12d的细胞随机分为3组：对照组（不含As2O3）、低浓度组（含2μmol/L As2O3）和高浓度组（含4 μmol/L As2 O3）.干预48 h后,采用免疫荧光法观察细胞核增殖抗原（Ki-67）阳性细胞所占的比例,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测Ki-67基因的表达,Western blot技术检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达.酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中尿素浓度的变化.结果体外培养的AHPC可持续扩增超过40 d,培养第1天强阳性表达白蛋白,培养第5天细胞克隆开始表达AFP,第35天表达CK19.阴性对照组所含Ki-67阳性细胞的比例较高（25.1±2.8）％,而As2O3（2μmol/L）组[（18.8±1.0）％]和As2O3（4μmol/L）组[（11.8±2.0）％]的Ki-67阳性细胞比例逐渐降低.Ki-67 mRNA的表达量在As2 O3（2μmol/L）组（0.823 ±0.012）明显下降,并以As2O3（4μmol/L）组（0.309 ±0.002）降低最为明显.随着As2O3浓度的增加,PCNA表达逐渐下降,并呈剂量-效应关系.阴性对照组细胞代谢产物尿素浓度较高[（0.586 ±0.056） mmol/L]随着As2O3浓度增加As2O3（2μmol/L）组[（0.506±0.058） mmol/L]与As2O3 （4 μmol/L）组[（0.410±0.045） mmol/L]尿素浓度逐渐下降.结论成功建立AHPC体外培养模型.As2O3能抑制原代AHPC的增殖,并降低其代谢能力.

关键词：三氧化二砷肝脏祖细胞增殖细胞代谢

TGF-β/Smad信号通路与EGFR/AKT信号通路相互拮抗抑制肝脏祖细胞的上皮间质化

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TGF-β/Smad信号通路与EGFR/AKT信号通路相互拮抗抑制肝脏祖细胞...

作者：曾卓华中科技大学

学位级别：硕士

目的:研究肝祖细胞内TGF-β/Smad信号通路与EGFR/AKT信号通路在上皮间质化中的相互作用。方法:用TGF-β1刺激肝脏祖细胞3天,用荧光检测细胞形态学改变,用蛋白免疫印迹检测受处理的肝脏祖细胞的上皮标记物和间质标记物。验证肝祖细胞在T... 详细信息

目的:研究肝祖细胞内TGF-β/Smad信号通路与EGFR/AKT信号通路在上皮间质化中的相互作用。方法:用TGF-β1刺激肝脏祖细胞3天,用荧光检测细胞形态学改变,用蛋白免疫印迹检测受处理的肝脏祖细胞的上皮标记物和间质标记物。验证肝祖细胞在TGF-β1刺激下是否发生EMT。用WESTERNBLOTTING检测TGF-β/Smad信号通路的激活状态。检测具有双向作用的Smad3蛋白激活状态。探究肝脏祖细胞内TGF-β1如何激活Smad3的LINKER端磷酸化位点。检测TGF-β1刺激下肝脏祖细胞内EGFR的激活状态。利用EGFR特异性受体抑制剂AG,检测EGFR是否能被TGF-β1激活,进而激活AKT蛋白。利用PI3K特异性抑制剂验证EGFR/AKT是否参与了Smad3LINKER端磷酸化位点的激活。检验在AKT蛋白被抑制激活后,TGF-β1是否能诱导肝脏祖细胞的EMT发生。结论:TGF-β1并不能明显诱导肝脏祖细胞的EMT发生。肝脏祖细胞中,TGF-β1通过EGFR/AKT信号转导突进与TGF-β/Smad信号转导途径相互拮抗,从而导致TGF-β1不能明显诱导肝脏祖细胞发生EMT。在经典TGF-β/Smad信号通路里,TGF-β激活Smad3蛋白的C端磷酸化位点来促进EMT过程的发生。但在肝脏祖细胞内,TGF-β通过活化EGFR/AKT信号通路,磷酸化的AKT蛋白激活Smad3蛋白LINKER端,从而拮抗Smad3C端磷酸化激活的作用,导致TGF-β1诱导EMT发生的作用不明显。这一机制的发现进一步加深对肝脏纤维化肿瘤发生发展的机制的认识,有利于相应靶向药物的开发。

关键词：肝脏祖细胞转化生长因子-β 上皮间质转化

一种分离正常成年大鼠肝脏祖细胞新方法的研究

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一种分离正常成年大鼠肝脏祖细胞新方法的研究

作者：郭静浙江大学

学位级别：硕士

研究背景：急性肝衰竭是一种可以由各种急性或慢性肝病引起的少见但致命的疾病。目前肝移植被认为是终末期肝病患者重要的治疗方法。然而,肝移植的可行性受到成本高、供体器官短缺、手术技术要求高、需要服用免疫抑制剂等因素的限... 详细信息

研究背景：急性肝衰竭是一种可以由各种急性或慢性肝病引起的少见但致命的疾病。目前肝移植被认为是终末期肝病患者重要的治疗方法。然而,肝移植的可行性受到成本高、供体器官短缺、手术技术要求高、需要服用免疫抑制剂等因素的限制。由于各种肝衰竭多由肝功能紊乱所致,而肝细胞或肝细胞样细胞移植后可发挥正常功能,因此,肝细胞或肝细胞样细胞移植是急性和慢性肝功能衰竭很有前途的替代疗法之一。不过这种疗法同样受到供体细胞的缺乏和免疫排异的限制。肝干/祖细胞有良好的增殖潜能,且有较低的免疫源性,有可能用于细胞移植以取代肝移植治疗终末期肝病。因此,对诸如成熟细胞或干/祖细胞的移植以及移植异种器官的研究方兴未艾。大量研究表明肝干/祖细胞存在于成年啮齿类动物和成人的肝脏中,这群细胞共表达肝细胞和干细胞的表面标志。然而,目前研究认为在正常成年肝脏中,肝干/祖细胞处于静止状态,仅有少量肝干/祖细胞出现于汇管区,且只有受到严重创伤时才会出现肝干/祖细胞的增殖。最近,不少有关肝衰竭模型的研究指出,从这些模型中可以分离出大量的肝干/祖细胞,如二乙基亚硝胺模型大鼠、2-AAF/肝切模型大鼠以及倒千里光碱/肝切模型大鼠。尽管应用的化学试剂多种多样,但这些实验方法的目的都是为了使造模动物产生严重、持续的肝损伤。虽然从这些疾病模型动物中可以分离出大量的肝干/祖细胞,但这些细胞都来自于异常个体。有假说称在整个肝癌的发展过程中,肝干/祖细胞发挥重要的作用。那么即使大量的肝干/祖细胞可以分离自肝脏,但细胞的品质无法得到保证。目前为止,尚无一种好的实验方法能够获得大量的纯度高、活性好的肝干/祖细胞,肝干/祖细胞体外分离、纯化、鉴定、体外培养技术有待于进一步完备,这些因素都是制约肝干/祖细胞临床应用的瓶颈。研究目的：利用正常肝脏探索建立一套肝干/祖细胞的分离、培养、鉴定的新方法。研究方法：通过四步胶原酶灌注法与密度梯度离心技术相结合,分离正常成年大鼠肝祖细胞。通过形态学观察、RT-PCR和免疫细胞化学分析肝祖细胞的形态、表型。研究结果：采用本课题组建立的四步胶原酶灌注法与密度梯度离心技术相结合,可从正常大鼠肝脏中分离出细胞数为2.5±0.5×104/100g的肝祖细胞,肝祖细胞的活率是95%±2%。新鲜分离的大鼠肝祖胞用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液制成肝祖细胞悬液接种于培养瓶中体外培养。结果显示体外培养的第3天,肝祖细胞可形成松散的克隆,细胞形态上为圆形或卵圆形。在体外30天的培养期间,这些细胞缓慢增殖,并显示出祖细胞的特性。RT-PCR结果显示这群祖细胞不仅表达成熟肝细胞的表面标志ALB、AFP、CK18、CK19、HNF-1a、HNF-4a的mRNA,还表达造血干细胞的表面标志Thy-1、CD45的mRNA。免疫细胞化学染色表明这群细胞表达ALB、AFP、CK18、CK19、Thy-1和OV-6。结论：通过简单有效的四步灌流法结合密度梯度离心法所获得的肝祖细胞有良好的增殖能力,能表达干细胞和肝细胞的表面标志,为肝干／祖细胞移植提供了良好的细胞来源。

关键词：肝脏祖细胞四步灌流法分离培养

肝脏祖细胞标志物Ep-CAM、N-CAM1、C-Kit和Ki-67表达与原发性肝癌的关系

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现代实用医学 2019年第12期31卷 1683-1685,I0003页

作者：李银亚孟蓉蓉金洁宁波市鄞州第二医院

原发性肝癌(PHC)依据病理组织学类型可将其分为肝细胞性肝癌(HCC)、胆管细胞性肝癌(CC)和混合细胞性肝癌(cHCC-CC),目前关于PHC的病因与发病机制尚未完全明确[1]。近年来,肿瘤干细胞学说为研究肿瘤发病机制提供了新的方向,2004年美国肝... 详细信息

原发性肝癌(PHC)依据病理组织学类型可将其分为肝细胞性肝癌(HCC)、胆管细胞性肝癌(CC)和混合细胞性肝癌(cHCC-CC),目前关于PHC的病因与发病机制尚未完全明确[1]。近年来,肿瘤干细胞学说为研究肿瘤发病机制提供了新的方向,2004年美国肝脏病研究协会统一将人肝脏中与啮齿类动物卵圆细胞/干细胞相似的这群细胞建议命名为肝脏祖细胞(HPC)。在正常人肝组织中,HPC位于成体肝脏中门静脉区的胆小管和Hering管内,具有双向分化潜能[2]。

关键词：肝癌肝脏祖细胞 Ep-CAM N-CAM1 C-Kit Ki-67 预后

乙型肝炎肝硬化患者肝组织中肝脏祖细胞激活特征的研究

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中华临床感染病杂志 2008年第3期1卷 -页

作者：武楠刘峰马慧朱凤雪刘志达费然陈红松王豪魏来北京大学人民医院北京大学肝病研究所 100044 北京大学人民医院北京大学肝移植中心 100044

目的观察肝脏祖细胞(hepatic progenitor cells,hpcs)在乙型肝炎肝硬化患者肝组织中的激活特征,探讨hbv感染是否影响hpcs的激活.方法以细胞角蛋白(ck7)为标记,对16例乙型肝炎肝硬化患者的肝组织做免疫组织化学染色,定量分析hpcs数目... 详细信息

目的观察肝脏祖细胞(hepatic progenitor cells,hpcs)在乙型肝炎肝硬化患者肝组织中的激活特征,探讨hbv感染是否影响hpcs的激活.方法以细胞角蛋白(ck7)为标记,对16例乙型肝炎肝硬化患者的肝组织做免疫组织化学染色,定量分析hpcs数目及胆管反应面积.hbsag和hbcag染色,观察两种病毒蛋白的表达与hpcs激活的关系.结果乙型肝炎肝硬化患者肝组织中hpcs激活程度高,胆管反应明显.肝组织中hbsag的表达与hpcs激活程度呈正相关.结论在乙型肝炎肝硬化患者的肝组织中,hpcs被明显激活和扩增,hbv感染可能参与hpcs的激活.abstract：objective to observe the characteristics of hepatic progenitor cells(hpcs)activation in liver tissues of patients with hepatitis b cirrhosis,and to investigate the relationship between the number of hpcs and hbv *** cytokeratin 7(ck7)-was stained immunohistochemically in liver tissues of 16 patients with hepatitis b *** and duetular reactions were quantitively *** expression of hbsag and hbcag were also detected to evaluate its relationship with hpcs *** hpcs were extensively activated and marked duetular reactions can be observed in cirrhotic liver *** expression of hbsag was positively correlated with hpcs *** hpcs are extensively activated in cirrhotic liver tissues,and hbv infection may facilitate its activation.

关键词：肝硬化肝脏祖细胞胆管反应

间充质干细胞治疗肝硬化:应用中的问题与前景

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中国组织工程研究 2015年第19期19卷 3102-3106页

作者：李翠芳姚远十堰市太和医院儿科(湖北医药学院附属医院) 湖北省十堰市442000

背景:研究表明,间充质干细胞在一定诱导条件下可分化成为肝细胞,促进局部血管再生,生成新的毛细血管网,建立丰富的侧支循环,以达到改善和治疗肝硬化的目的。目的:综述间充质干细胞移植治疗肝硬化的最新进展。方法:利用计算机在Pub Med、... 详细信息

背景:研究表明,间充质干细胞在一定诱导条件下可分化成为肝细胞,促进局部血管再生,生成新的毛细血管网,建立丰富的侧支循环,以达到改善和治疗肝硬化的目的。目的:综述间充质干细胞移植治疗肝硬化的最新进展。方法:利用计算机在Pub Med、CNKI、万方数据库和维普数据库中检索2000年1月至2014年12月关于间充质干细胞移植治疗肝硬化的相关文章,在标题和摘要中以"间充质干细胞,肝硬化"或"marrow stem cell,hepatic cirrhosis"为检索词进行检索,最终选择53篇文章进行综述。结果与结论:间充质干细胞具有自我复制能力和多向分化潜能,是细胞替代治疗的理想种子细胞,同时它还具有旁分泌和免疫调节功能。目前间充质干细胞的分离、培养、鉴定以及体外扩增等技术已相当成熟,且有动物实验研究证实脐带间充质干细胞治疗失代偿肝硬化安全有效,可从根本上治疗靶器官损伤,改善肝脏功能,但应用于临床仍然有很多问题尚待解决。

关键词：肝硬化肝再生间质干细胞肝星形细胞干细胞移植肝脏祖细胞间充质干细胞肝衰竭

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不同肝脏损伤模型下新生肝细胞来源研究进展

中国细胞生物学学报 2022年第5期44卷 924-932页

作者：李婷杨劲树杨卫军浙江大学生命科学学院细胞与发育生物学研究所杭州310058

肝脏是执行很多重要生理功能的器官,它具有强大的再生能力,在损伤后可以迅速恢复到原本的体积。它的再生特性得益于肝细胞和胆管上皮细胞在损伤后的快速增殖;然而,在极端急性损伤或长期慢性损伤的情况下,肝脏可能无法再生或再生不佳。... 详细信息

肝脏是执行很多重要生理功能的器官,它具有强大的再生能力,在损伤后可以迅速恢复到原本的体积。它的再生特性得益于肝细胞和胆管上皮细胞在损伤后的快速增殖;然而,在极端急性损伤或长期慢性损伤的情况下,肝脏可能无法再生或再生不佳。有众多研究表明,不同的肝损伤模型会动员不同的细胞亚群促进肝再生。该文主要介绍了五种不同的肝脏损伤模型,并对在不同损伤情况下新生肝细胞的来源、胆管上皮细胞与肝细胞的互相转换等方面进行了总结,为肝脏后续相关研究和疾病治疗提供了借鉴。

关键词：肝脏祖细胞损伤和修复细胞可塑性

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肝脏神经内分泌区室的研究进展

世界华人消化杂志 2006年第30期14卷 2954-2957页

作者：陈谦李强天津市环湖医院天津市300060

肝脏的祖细胞和肝脏星状细胞都具有神经内分泌的特征．祖细胞表达嗜铬粒蛋白-A、神经细胞黏附分子、甲状旁腺素相关肽、S-100蛋白、神经营养因子和其受体,肝脏星状细胞表达突触素、胶质纤维酸性蛋白、神经细胞黏附分子、nestin、神经营... 详细信息

肝脏的祖细胞和肝脏星状细胞都具有神经内分泌的特征．祖细胞表达嗜铬粒蛋白-A、神经细胞黏附分子、甲状旁腺素相关肽、S-100蛋白、神经营养因子和其受体,肝脏星状细胞表达突触素、胶质纤维酸性蛋白、神经细胞黏附分子、nestin、神经营养因子和其受体．这种表型提示,这些细胞类型形成了可能受控于中枢神经系统的肝脏神经内分泌区室．我们证明了副交感神经系统促进了肝脏损伤后的祖细胞伸展,而去神经的移植肝脏和肝炎肝脏．其祖细胞数量都较原本的完全神经支配的肝脏为少,解释再生和瘢痕形成的神经控制机制是非常重要的．而且,对于再生机制的深入认识可能具有治疗学上的意义,甚至可能避免原位肝脏移植的必要．

关键词：肝脏祖细胞肝脏星状细胞副交感神经系统肌纤维母细胞神经内分泌