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自旋探针α-苯基-N-4-丁基硝酮纳米粒的制备及其对肝肿瘤细胞的亲和性研究

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药学学报 2008年第3期43卷 308-313页

作者：邓旭芳刘珊林施冬云李浩然吴金龙黄勇超浙江大学自由基生命科学研究中心浙江杭州310027 复旦大学上海医学院复旦大学自由基调控与应用研究中心上海200032

采用薄膜分散-超声法制备、优化自旋捕捉剂α-苯基-N-4-丁基硝酮(Nt-ert-butyl-α-phenyln itrone,PBN)脂质体,并研究其相关性质。以人肝肿瘤细胞SMMC-7721为实验对象,采用反相高效液相法(RP-HPLC)测定细胞内PBN的浓度,以此评价PBN脂质... 详细信息

采用薄膜分散-超声法制备、优化自旋捕捉剂α-苯基-N-4-丁基硝酮(Nt-ert-butyl-α-phenyln itrone,PBN)脂质体,并研究其相关性质。以人肝肿瘤细胞SMMC-7721为实验对象,采用反相高效液相法(RP-HPLC)测定细胞内PBN的浓度,以此评价PBN脂质体对细胞的亲和性;考察了PBN脂质体对细胞生长的影响。结果显示,采用正交设计优化得到PBN脂质体的平均粒径137.5 nm,包封率71.52%,多分散系数0.286。PBN脂质体可稳定进入癌细胞内,同游离的PBN相比,PBN脂质体对肝肿瘤细胞更具亲和性,转染后癌细胞坏死率更高。表明自旋捕捉剂脂质体对肝肿瘤细胞具有较好的亲和性并能明显抑制其生长。为研究肿瘤自旋靶向性干预提供了实验依据。

关键词：肝肿瘤细胞自由基脂质体 α-苯基-N-4-丁基硝酮

不同表面性质纳米脂质体对肝肿瘤细胞摄取的影响

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中国药科大学学报 2013年第3期44卷 244-248页

作者：李文婷王璐张灿中国药科大学新药研究中心南京210009

以紫杉醇为模型药物,选用不同的脂质材料制备不同电性和粒径的紫杉醇脂质体,考察其体外药物释放特性。通过细胞摄取实验研究不同表面性质脂质体在肝肿瘤细胞系中的摄取。制剂的体外释药实验显示,48 h累积释放量均不超过30%,具有缓释特... 详细信息

以紫杉醇为模型药物,选用不同的脂质材料制备不同电性和粒径的紫杉醇脂质体,考察其体外药物释放特性。通过细胞摄取实验研究不同表面性质脂质体在肝肿瘤细胞系中的摄取。制剂的体外释药实验显示,48 h累积释放量均不超过30%,具有缓释特征。采用MTT法考察了制剂的细胞毒性,发现紫杉醇质量浓度低于50μg/mL时,细胞48 h存活率不低于80%。比较了两种肿瘤细胞摄取能力的差异,并测定了肝肿瘤细胞BEL-7402细胞和HepG2细胞48 h内对药物的摄取。结果表明,随着制剂粒径的减小和表面Zeta电位的增大,细胞摄取药物增加。

关键词：紫杉醇脂质体表面性质释放肝肿瘤细胞细胞摄取

H-ras12V促进肝肿瘤细胞脂肪变性机制探讨

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中华肿瘤防治杂志 2015年第8期22卷 579-583页

作者：李学凤陈军赵文王福金王爱国王靖宇大连医科大学实验动物中心辽宁大连116044

目的探讨固醇调节元件结合蛋白1c(transcription factor sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)在Ras癌基因诱导小鼠肝肿瘤细胞脂肪变性中的作用机制。方法采集9个月龄C57BL/6J小鼠(12只)正常肝组织(Wt)和H-ras12V转基因小鼠(12只)的肝肿瘤组织(T)及其周围组织(P),并用病理学方法进行确诊检测。酶偶联比色法检测组织样本中的甘油三酯含量,蛋白质印迹法检测磷酸化的磷脂酰肌醇3激酶(phosphorylation ofphosphatidylinositol-3kinase,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(phosphorylation of protein kinase B,p-AKT)及SREBP-1c的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c靶基因乙酰辅酶A羧化酶a(acetyl-CoA carboxylase a,ACACa)、乙酰辅酶A羧化酶b(acetyl-CoA carboxylase b,ACACb)、硬脂酰辅酶A脱氢酶(stearoyl-CoA desaturase1,SCD1)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASn)基因的mRNA表达水平。结果正常肝组织和周围组织未发生组织病理学变化,肝肿瘤组织与周围组织边界清楚,肝肿瘤组织中的肿瘤细胞分化良好并伴有大泡性脂肪变性。与病理结果相一致,与正常肝组织(1±0.29)及转基因小鼠肝肿瘤周围组织(0.78±0.18)相比较,转基因小鼠肝肿瘤组织中的甘油三酯含量(2.14±0.15)显著增高,P值均肿瘤周围组织与正常肝组织中的甘油三酯含量差异无统计学意义,P=0.092。蛋白质印迹法检测结果表明,与正常肝组织相比,p-PI3K在P和T中呈逐步升高趋势,且差异有统计学意义,P肝肿瘤组织中呈升高趋势,但仅肝肿瘤组织中的p-AKT差异有统计学意义,P=0.028;与正常肝组织及周围组织相比,肝肿瘤组织中的SREBP-1c前体蛋白及成熟体蛋白的表达水平均显著升高,P值均肝肿瘤组织中的表达呈逐步升高趋势,差异有统计学意义,P肝肿瘤组织中ACACa和FASn的mRNA表达水平显著升高,P肝肿瘤Ras癌基因可能通过活化PI3K/AKT信号通路激活转录因子SREBP-1c,进而促进与脂质合成代谢相关靶基因的表达,增加肝肿瘤细胞的脂质沉积,诱导脂肪变性。

关键词： H-ras12V 固醇调节元件结合蛋白肝肿瘤细胞脂肪变性

选择性COX-2抑制剂Nimesulide对肝肿瘤细胞HepG2增殖与凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2004年第4期21卷 430-432页

作者：张必翔陈孝平张万广余红平朱虹罗顺峰王其吴在德裘法祖华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科中心武汉430030

目的　观察环氧合酶 (COX) 2抑制剂尼美舒利 (Nimesulide)对肝肿瘤细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法　用不同浓度 (10 0、2 0 0、3 0 0 μmol/L)的Nimesulide处理HepG2细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝法检测Nimesulide对HepG2细胞增殖的影响 ... 详细信息

目的　观察环氧合酶 (COX) 2抑制剂尼美舒利 (Nimesulide)对肝肿瘤细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法　用不同浓度 (10 0、2 0 0、3 0 0 μmol/L)的Nimesulide处理HepG2细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝法检测Nimesulide对HepG2细胞增殖的影响 ;Western印迹法检测HepG2细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶 (Caspase) 3表达 ,流式细胞术检测细胞凋亡。用放射免疫测定法检测Nime sulide对HepG2细胞PGE2释放水平 ,反映Nimesulide对COX 2活性的影响。结果　 10 0、2 0 0、3 0 0μmol/L的Nimesulide作用于HepG2细胞 ,其A值分别为 1.69± 0 .16,1.0 6± 0 .0 9,0 .62± 0 .0 6,与对照组 (3 .0 9± 0 .2 8)相比 ,差异有非常显著性 (P 细胞的凋亡率分别为 (4 .5 3± 2 .15 )、(6.0 2± 3 .5 0 )、(16.2 4± 7.92 ) ,与对照组比较 (2 .84± 1.88,P 细胞的Caspase 3的蛋白表达均明显升高 ,A值分别为 (4 6.96± 2 .86)、(60 .2 8± 3 .0 5 )、(76.5 9± 4.2 6) ,与对照组相比 (3 2 .5 7± 1.83 )差异有非常显著性 (P 细胞Caspase 3蛋白活性的升高 ,A值分别为 (0 .46± 0 .0 3 )、(0 .73± 0 .0 6)、(0 .91± 0 .12 ) ,?

关键词：选择性COX-2抑制剂 Nimesulide 肝肿瘤细胞 HepG2 增殖凋亡脱噬作用细胞凋亡

壳聚糖纳米载体介导的端粒酶反义核苷酸对肝肿瘤细胞的抑制作用

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中国现代医学杂志 2008年第8期18卷 1066-1068页

作者：郭建平张涛广东省粤北人民医院广东韶关512025

目的探讨纳米载体对端粒酶反义寡核苷酸抑制肝脏肿瘤细胞生长的影响。方法制备壳聚糖纳米载体,并装载端粒酶反义寡核苷酸,用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义核苷酸寡对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细... 详细信息

目的探讨纳米载体对端粒酶反义寡核苷酸抑制肝脏肿瘤细胞生长的影响。方法制备壳聚糖纳米载体,并装载端粒酶反义寡核苷酸,用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义核苷酸寡对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞(HepG2)生长的抑制作用。结果壳聚糖纳米载体能显著增强端粒酶反义寡核苷酸对端粒酶活性和肿瘤细胞生长的抑制作用。结论壳聚糖纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体。

关键词：壳聚糖纳米载体反义寡核苷酸端粒酶肝肿瘤细胞

间充质干细胞对肝肿瘤细胞力生物学行为的影响及相关机理研究

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间充质干细胞对肝肿瘤细胞力生物学行为的影响及相关机理研究

作者：李晓明重庆大学

学位级别：硕士

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，在特定诱导条件下能分化为成骨、软骨、脂肪、肌肉等多种细胞。MSCs能被募集到炎症环境和损伤组织位点，通过抗炎、旁分泌、增殖、分化等... 详细信息

间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，在特定诱导条件下能分化为成骨、软骨、脂肪、肌肉等多种细胞。MSCs能被募集到炎症环境和损伤组织位点，通过抗炎、旁分泌、增殖、分化等多种作用在损伤组织的修复和再生中扮演重要角色，也是基因传递和细胞治疗的重要工具。近年来，MSCs已成为损伤组织修复、再生等组织工程研究中应用最多的干细胞类型。恶性肿瘤是细胞周期紊乱和细胞分裂、生长失控引起的一种致命疾病，严重危害人类健康，其预防和治疗目前仍然是临床上面临的巨大挑战问题。炎性微环境是肿瘤组织的重要特征之一，正常组织发生恶变也可被视为一种特殊的组织损伤，因此，肿瘤组织也能募集MSCs参与肿瘤微环境的重塑,并对肿瘤细胞的生物学行为产生重要影响。肿瘤细胞与MSCs之间的交互对话及相互影响成为近年来肿瘤领域的研究热点，但是，目前人们对于MSCs如何参与肿瘤微环境的重建以及MSCs如何影响肿瘤细胞的生物学行为还缺乏系统认识。因此，本文主要研究大鼠肝肿瘤细胞CBRH-7919在MSCs微环境下增殖、迁移等生物学行为的变化特征，并对其相关分子机理进行深入探讨。本研究工作的主要内容和结果如下：1.细胞分离、培养采用Percoll密度梯度离心与差时贴壁相结合的方法分离大鼠MSCs，用含10%胎牛血清的L-DMEM培养基培养、传代。培养的细胞形态均一，呈现出MSCs特有的漩涡状分布。通过流式细胞仪对分离培养细胞表面相关抗原的表达进行分析，结果显示：CD44和CD90表面抗原呈阳性表达，而CD34呈阴性表达。大鼠肝癌细胞株CBRH-7919，用含10%胎牛血清的L-DMEM培养基按常规方法传代培养。2. MSCs条件培养基对CBRH-7919细胞迁移的影响利用transwell方法考察了MSCs条件培养基（Conditioned medium from MSCs,MSC-CM）对CBRH-7919细胞迁移行为的影响。实验结果发现，与对照组比较，CBRH-7919细胞在MSC-CM诱导条件下迁移能力显著增强。进一步研究发现，MSC-CM诱导CBRH-7919迁移过程中，CBRH-7919细胞CXCR4基因的表达上调（p细胞CXCR4蛋白水平的表达也显著上调（p细胞骨架F-actin的表达增强，原子力显微镜分析发现MSC-CM处理后细胞杨氏模量降低。CXCR4抑制剂AMD3100处理后抑制了MSC-CM诱导的CBRH-7919细胞CXCR4的表达上调，细胞骨架F-actin的表达和细胞杨氏模量的变化恢复至对照组水平，MSC-CM促进的细胞迁移能力也被抑制。这些结果提示，MSC-CM可能通过诱导CBRH-7919细胞CXCR4的表达，重构细胞骨架，降低细胞硬度，从而促进细胞的迁移能力。3. MSCs对CBRH-7919细胞增殖的影响采用transwell系统对大鼠MSCs和CBRH-7919细胞进行共培养，用MTT方法对共培养条件下CBRH-7919细胞的增殖情况进行检测。实验结果显示，CBRH-7919细胞与MSCs共培养后，CBRH-7919细胞的增殖发生了明显变化。，共培养第1天，细胞未发生明显的增殖变化，但共培养第4天，细胞增殖显著加快（p细胞Wnt5a、β-catenin基因的表达上调，Western blot也显示CBRH-7919细胞β-catenin蛋白水平的表达增加（p细胞的增殖。综上所述，本文研究结果表明，在MSCs微环境下，肿瘤细胞可通过上调CXCR4的表达、重构细胞骨架F-actin和减小细胞硬度，增强迁移能力;同时，MSCs微环境可能通过Wnt5a、β-catenin信号促进肿瘤细胞的增殖。该研究结果提示，募集到肿瘤组织中的MSCs参与肿瘤微环境的重塑，可能促进肿瘤的生长和转移。这为MSCs在癌症研究及临床应用中的安全问题提供了实验依据。

关键词：骨髓间充质干细胞条件培养基肝肿瘤细胞迁移增殖

刺参酸性粘多糖通过线粒体介导的肝肿瘤细胞凋亡作用研究

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刺参酸性粘多糖通过线粒体介导的肝肿瘤细胞凋亡作用研究

作者：陈沉青岛大学

学位级别：硕士

目的：研究刺参酸性粘多糖(SJAMP)对人肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用,观察SJAMP对于肝癌细胞线粒体凋亡通路的影响并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养HepG2细胞及张氏肝细胞,以张氏肝细胞作为正常细胞参照组,将0.25μg/mL、1.0μg/m... 详细信息

目的：研究刺参酸性粘多糖(SJAMP)对人肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用,观察SJAMP对于肝癌细胞线粒体凋亡通路的影响并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养HepG2细胞及张氏肝细胞,以张氏肝细胞作为正常细胞参照组,将0.25μg/mL、1.0μg/mL、4.0μg/mL的SJAMP分别作用于HepG2细胞及张氏细胞一段时间后,透射电镜观察细胞结构的变化,荧光显微镜观察刺参酸性粘多糖对细胞内钙离子浓度的变化,流式细胞术检测线粒体膜电位,免疫细胞化学法检测Bcl-2家族中Bax及Bcl-2蛋白、抗凋亡蛋白生物素Survivin、第二线粒体Caspse家族激活蛋白Smac、细胞色素C (Cytc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达,荧光定量PCR (Real-time PCR,RT-PCR)检测Bax、Bcl-2、Cytc以及Caspase-3mRNA表达。结果：1、透射电镜下观察发现,SJAMP作用后的HepG2细胞出现凋亡现象、染色体发生固缩、核膜消失等形态学改变;而张氏细胞与HepG2空白对照组并不表现出凋亡等相关形态学改变。2、荧光显微镜下观察细胞内钙离子结果显示：与空白对照组相比,随着SAJMP作用剂量的增加,HepG2细胞内钙离子荧光IOD值逐渐降低,各组间的差异具有显著性(P细胞内钙离子荧光IOD值并没有随着SJAMP剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05)。3、流式细胞仪检测结果显示：与空白对照组相比：随着SJAMP作用剂量的增加,各HepG2细胞组内的线粒体膜电位逐渐下降,各组间的差异具有显著性(P细胞线粒体膜电位并没有随着SJAMP剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05)。4、免疫细胞化学结果表明：与空白对照组相比：随着SJAMP作用剂量的增加,HepG2细胞内Bax、Cytc、Smac以及Caspase-3蛋白的表达逐渐增强,且Bcl-2和Survivin蛋白的表达被抑制,各组间的差异具有显著性(P细胞Bax、Bcl-2、Cyt、Smac、 Survivin以及Caspase-3蛋白的表达并没有随着SJAMP作用剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05)。5、实时定量RT-PCR结果显示：与空白对照组相比,随着SJAMP作用剂量的增加,HepG2细胞内Bax、Cytc和Caspase-3mRNA的表达量逐渐升高,而Bcl-2基因mRNA表达的量逐渐降低,各组间的差异具有显著性(P细胞线Bax、Bcl-2、Cytc和Caspase-3mRNA的表达量并没有随着SJAMP剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论：1、SJAMP可诱导人肝肿瘤HepG2细胞发生凋亡。2、SJAMP可通过抑制Bcl-2及Surviving和促进Bax、Cytc、Caspase-3以及Smac基因和蛋白的表达,激活线粒体介导的凋亡通路,从而促进癌细胞凋亡;3、SJAMP对人正常肝细胞-张氏细胞生长及线粒体凋亡途径相关基因和蛋白表达没有影响。

关键词：刺参酸性粘多糖肝肿瘤细胞凋亡线粒体凋亡通路

肝肿瘤细胞LO_2中谷胱甘肽及相关酶调控的研究

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中国城乡企业卫生 2005年第2期20卷 18-19页

作者：张静石强殷丽辉天津市卫生防病中心 300011 南开大学分子所 300071

肝病在我国及亚洲地区是高发病,爆发性肝衰的死亡率往往超过90%.人工肝支持系统的引人为肝衰病人带来希望.而提高生物活性反应器内肝细胞的数量与功能是进一步发展生物人工肝面临的主要任务之一.

关键词：肝肿瘤细胞谷胱甘肽相关酶人工肝支持系统调控生物人工肝亚洲地区生物活性高发病死亡率爆发性肝细胞反应器肝衰

刺参酸性粘多糖通过线粒体介导的肝肿瘤细胞凋亡作用研究

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刺参酸性粘多糖通过线粒体介导的肝肿瘤细胞凋亡作用研究