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NADH对DENA所致L02细胞H-ras基因突变及c-erbB-2表达的影响

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肿瘤 2009年第3期29卷 210-214页

作者：温居一张积仁周媛李鹏聂青康静波海军总医院放射肿瘤科北京100037 南方医科大学珠江医院肿瘤中心广州510280

目的:研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)对二乙基亚硝胺(N-nitrosodiethylamine,DENA)诱变L02细胞过程中H-ras基因突变及c-erbB-2表达的影响。方法:聚合酶链式反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)法检测NADH对DENA所诱发的L02细胞H-ras基因突变的影响;Southern印迹法分析其对c-erbB-2基因表达的影响;RT-PCR法检测NADH对rasp21、c-erbB-2 mRNA表达水平的调控。结果:经NADH防护的DL02-Ⅲ细胞和DL02-B细胞的H-rasexon1突变率分别降至25.0%(3/12)和41.7%(5/12),与DENA致突变组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Southern检测结果显示,NADH可下调由DENA所诱变的L02细胞中c-erbB-2基因的表达提高;RT-PCR检测结果提示,DENA诱变组细胞的rasp21、c-erbB-2 mRNA表达水平上调,而经NADH处理后,与DENA诱变组相比,可明显降低rasp21和c-erbB-2 mRNA表达水平上调的程度。结论:NADH抗突变作用的可能机制,与其在基因突变以及在转录水平对H-ras、c-erbB-2等相关癌基因的调控有关。

关键词：肝肿瘤,实验性抗诱变药诱变剂癌基因

大鼠肝卵圆细胞体外培养过程中癌基因的表达变化及其意义

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中华病理学杂志 1998年第3期27卷 191-193页

作者：薛玲文剑明赵国强胡瑞德董郡中山医科大学病理学教研室

目的研究大鼠肝卵圆细胞体外培养过程中癌基因的表达变化与细胞转化的关系。方法用化学致癌剂３′ＭｅＤＡＢ诱发ＳＤ大鼠肝卵圆细胞增生，采用Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心法将肝卵圆细胞进行分离和体外长期培养。在培养过程中，通过... 详细信息

目的研究大鼠肝卵圆细胞体外培养过程中癌基因的表达变化与细胞转化的关系。方法用化学致癌剂３′ＭｅＤＡＢ诱发ＳＤ大鼠肝卵圆细胞增生，采用Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心法将肝卵圆细胞进行分离和体外长期培养。在培养过程中，通过ＲＮＡＤＮＡｓｌｏｔｂｌｏｔ杂交方法，动态观察Ｈａｒａｓ、Ｋｉｒａｓ和ｃｍｙｃ癌基因的表达变化。结果卵圆细胞在培养过程中倍增时间逐渐缩短，非整倍体染色体数目增加，在软琼脂中生长的克隆增多。ｃｍｙｃ、Ｋｉｒａｓ和Ｈａｒａｓ的表达在细胞培养和转化的不同阶段均表现同步关系，即同时升高或降低。结论癌基因的表达反复升高与细胞转化过程相关联，而且。

关键词：肝肿瘤,实验性肿瘤干细胞原癌基因细胞转化,肿瘤

携带mda7／IL24的三调控增殖腺病毒治疗肝癌的体外实验

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肿瘤 2008年第5期28卷 382-385页

作者：陈东锋那曼丽苏长青李林芳吴红平钱炎珍姜丽华吴孟超钱其军浙江理工大学生命科学院新元医学生物研究所杭州310018 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒与基因治疗实验室上海200438

目的:构建缺失E1A区24 bp,由端粒酶反转录酶基因启动子和缺氧基因启动子调控的增殖腺病毒SG600-IL24,研究人白细胞介素24(interleukin 24,IL24)在肝癌细胞内的表达水平和SG600-IL24的增殖情况及其对肝癌细胞的杀伤作用。方法:利用DNA克... 详细信息

目的:构建缺失E1A区24 bp,由端粒酶反转录酶基因启动子和缺氧基因启动子调控的增殖腺病毒SG600-IL24,研究人白细胞介素24(interleukin 24,IL24)在肝癌细胞内的表达水平和SG600-IL24的增殖情况及其对肝癌细胞的杀伤作用。方法:利用DNA克隆和重组技术,构建SG600-IL24。ELISA检测IL24在肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404和正常成纤维细胞BJ内的表达。半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)法检测SG600-IL24在3种细胞内48和96 h的增殖情况。MTT法和细胞病理效应(cytopathic effect,CPE)染色法检测SG600-IL24在不同MOI值对3种细胞的杀伤作用。结果:IL24在SMMC-7721和BEL-7404细胞内高表达而在BJ细胞内低表达。感染48和96 h后,SG600-IL24在SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞内分别增殖794和7940倍、622和7 810倍、20和200倍。MTT结果显示,杀伤50%和90%的SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞所需SG600-IL24的MOI值分别为0.3和5,3和20,50和150。CPE染色显示,SG600-IL24对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404有明显杀伤作用,而对BJ细胞无明显影响,并且该病毒的杀伤能力比增殖腺病毒ZD55-IL24和非增殖腺病毒Ad-IL24强。结论:SG600-IL24高效感染肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404后,病毒增殖活跃,IL24的表达量显著升高。SG600-IL24对此2种肝癌细胞有良好的特异性杀伤作用,而对正常细胞没有明显影响,为应用该病毒治疗肝癌的体内研究建立了基础。

关键词：肝肿瘤,实验性白细胞介素24 增殖性腺病毒缺氧反应元件

多层螺旋CT灌注成像对兔VX2肝移植瘤无水酒精介入治疗疗效的评价

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中华放射学杂志 2010年第5期44卷 536-539页

作者：肖喜刚张金玲赵明王立峰张志明哈尔滨医科大学附属第一医院CT室 150001 哈尔滨医科大学附属第一医院病理 150001 哈尔滨医科大学附属第二医院MRI室

目的探讨MSCT灌注成像对兔VX2肝移植瘤无水酒精介入治疗后疗效评价的价值.方法 15只日本长耳大白兔按数字表法随机分成实验组及对照组,均接种VX2肝移植瘤,对照组5只兔于肿瘤接种后14 d行肝MSCT灌注扫描后牺牲,取肿瘤边缘组织行免疫组... 详细信息

目的探讨MSCT灌注成像对兔VX2肝移植瘤无水酒精介入治疗后疗效评价的价值.方法 15只日本长耳大白兔按数字表法随机分成实验组及对照组,均接种VX2肝移植瘤,对照组5只兔于肿瘤接种后14 d行肝MSCT灌注扫描后牺牲,取肿瘤边缘组织行免疫组织化学分析,观察微血管密度（MVD）.实验组10只兔于肿瘤接种后14 d行MSCT灌注扫描后行开腹肿瘤内无水酒精介入治疗,再于介入治疗后3及30 d行CT灌注扫描,牺牲后取肿瘤边缘组织行免疫组织化学分析,对比肿瘤边缘组织CT灌注参数,包括肝血流量（BF）、血容量（BV）、平均通过时间（MTT）、毛细血管表面通透性（PS）、肝动脉灌注指数（HAF）和肝动脉灌流量（HAP）的变化规律.应用重复测量方法比较实验组兔无水酒精介入治疗前后不同时间肿瘤边缘区CT灌注参数的变化,采用独立样本t检验比较实验组与对照组间的MVD结果,对照组灌注参数与MVD结果比较采用线性相关性分析.结果肿瘤周边区治疗前、治疗后3及30 d BF分别为（280.62±59.87）、（322.03±86.94）、（177.05±75.%）ml·min-1;HAF分别为0.59±0.08、0.89±0.12、0.23±0.07;HAP分别为（189.26±25.46）、（251.57±31.78）、（40.90±5.17）ml·min-1·m-1.治疗后3 d HAP较治疗前明显升高（P＜0.05）;治疗后30 d较治疗后3 d BF、HAF、HAP均降低（P均＜0.05）;治疗后30 d较治疗前BF、HAF、HAP均降低（P均＜0.05）.对照组移植瘤种植后14 d BF、PS、HAF、HAP与MVD呈正相关（r值分别为0.916、0.726、0.870、0.889,P＜0.05）.实验组介入治疗后30 d MVD（21.8±3.5）条/高倍视野（HP）较对照组MVD（43.9±4.0）条/HP减低（t=12.271,P＜0.05）.结论 CT灌注成像可评价兔VX2肝移植瘤无水酒精介入前后的肝血流动力学改变,可以代替MVD评价肿瘤的血管生成.

关键词：肝肿瘤,实验性模型,动物灌流体层摄影术,X线计算机

shRNA抑制小鼠肝癌细胞株JNK的表达及细胞迁移和侵袭

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吉林大学学报（医学版） 2009年第3期35卷 410-414页

作者：张宇虹唐建武王绍清王志强孙成荣王梅王波大连医科大学附属第二医院超声科辽宁大连116027 大连医科大学病理学教研室辽宁大连116044 大连医科大学附属第一医院耳鼻喉科辽宁大连116011

目的:研究shRNA对小鼠肝癌细胞株Hca-F JNK基因表达的抑制作用及对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明JNK表达水平与小鼠肝癌细胞淋巴转移潜能的关系。方法:构建3条shRNA表达载体,以脂质体法稳定转染Hca-F细胞;RT-PCR和Western blottin... 详细信息

目的:研究shRNA对小鼠肝癌细胞株Hca-F JNK基因表达的抑制作用及对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,阐明JNK表达水平与小鼠肝癌细胞淋巴转移潜能的关系。方法:构建3条shRNA表达载体,以脂质体法稳定转染Hca-F细胞;RT-PCR和Western blotting检测shRNA对JNK基因和蛋白表达的抑制作用,筛选出RNA干扰效果最好的shRNA;Transwell实验检测Hca-F细胞穿膜细胞数观察shRNA对Hca-F细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。结果:成功构建pSilencer-shRNA表达载体并稳定转染Hca-F细胞,筛选出对JNK表达抑制效果最好的shRNA;其转染后JNK mRNA表达水平与其他组比较明显下调(P<0.01);JNK蛋白质表达水平与其他组比较明显减少(P<0.01);转染shRNA后Hca-F细胞穿膜细胞数均显著下降(P<0.05)。结论:通过建立pSilencer-shRNA表达载体并稳定转染Hca-F细胞株,获得JNK表达稳定下调的Hca-F细胞株,抑制JNK表达水平可降低小鼠肝癌细胞的迁移和侵袭能力,JNK可能是决定肝癌淋巴转移潜能的重要基因之一。

关键词： c-Jun N端激酶 shRNA 转染肝肿瘤,实验性淋巴转移

缺氧条件下电离辐射与肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的关系

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肿瘤 2007年第7期27卷 545-548页

作者：程惠华傅志超王凤玫南京军区福州总医院放疗科福州350025 南京军区福州总医院妇产科福州350025

目的:探讨缺氧条件下,电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子HIF-1α及血管生成因子VEGF表达的影响。方法:将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组。缺氧组:氯化钴处理细胞模拟缺氧条件;单纯照射组:按照射率4Gy/... 详细信息

目的:探讨缺氧条件下,电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子HIF-1α及血管生成因子VEGF表达的影响。方法:将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组。缺氧组:氯化钴处理细胞模拟缺氧条件;单纯照射组:按照射率4Gy/min、总共8Gy的剂量,用X线射线照射细胞;缺氧加照射组:氯化钴处理细胞一定时间后,按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞。利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况,MTT法分析细胞存活分数,RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况。结果:细胞凋亡情况:对照组未观察到细胞凋亡的情况,缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡,单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡,但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少(P缺氧组>缺氧加照射组>单纯照射组。HIF-1α表达情况:缺氧加照射组>缺氧组>对照组(P缺氧组>单纯照射组>对照组(P性。

关键词：肝肿瘤,实验性缺氧诱导因子1,α亚基辐射,电离血管内皮生长因子类

银杏叶提取物对黄曲霉毒素B_1诱发大鼠肝癌过程中生物标志物的影响

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肿瘤 2010年第1期30卷 1-5页

作者：蒿艳蓉欧超曹骥杨芳段小娴杨春李瑗苏建家广西壮族自治区人民医院临床肿瘤中心放疗科南宁530021 广西医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所南宁530021

目的:探讨银杏叶提取物(extract 761 fromGinkgo biloba,EGb761)对黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)在大鼠体内代谢的影响。方法:经AFB1和EGb761不同处理,获得AFB1组、AFB1+EGb761组和空白对照组3组大鼠,分别于实验第14、28及42周给予抽血及肝活检,并于第64周全部处死。观察大鼠肝癌发生率,用分光光度法检测肝组织Ⅰ相酶CYP450和Ⅱ相酶GST活性,用高效液相色谱法检测血清AFB1-赖氨酸加合物水平,以及应用免疫组织化学法检测8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)蛋白表达情况。结果:肝癌诱发率在AFB1+EGb761组明显低于AFB1组(P肿瘤发生;EGb761对Ⅰ相代谢酶CYP450及Ⅱ相代谢酶GST活性无明显影响。血清AFB1-赖氨酸加合物的最高水平(4 356.01 pg/mg albumin)发生于实验第14周的AFB1组。在实验第14、42周时EGB761显著抑制了血清AFB1-赖氨酸加合物的形成,抑制率分别为13.07%(P=0.033)、73.63%(P=0.002)。在各检测点的8-OHdG蛋白表达强度显示,AFB1+EGb 761组均显著低于AFB1组(P性的途径实现的。EGb761能够抑制AFB1-赖氨酸加合物的形成,降低8-OHdG蛋白的表达,减轻DNA的氧化损伤,这可能是其最终抑制或延缓AFB1诱发肝癌发生、发展的机制之一。

关键词：肝肿瘤,实验性植物提取物银杏素黄曲霉毒素B1 AFB1-赖氨酸加合物 8羟-基脱氧鸟嘌呤核苷

沙苑子黄酮抗肝癌生长作用及对免疫功能的影响

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肿瘤 2009年第12期29卷 1112-1115页

作者：韦翠萍汤琪云梁中琴顾振纶苏州卫生职业技术学院药理教研室苏州215009 南京医科大学附属第一医院胃肠科南京210036 苏州大学医学院药理学教研室苏州215123

目的:探讨中药提取物沙苑子黄酮(flavonoids extracts fromsemen Astragali complanati,FAC)对小鼠肝癌H22细胞生长的影响及其机制。方法:建立H22荷瘤小鼠模型,观察FAC对H22肝癌移植瘤生长的抑制作用及其对荷瘤小鼠免疫器官、巨噬细胞... 详细信息

目的:探讨中药提取物沙苑子黄酮(flavonoids extracts fromsemen Astragali complanati,FAC)对小鼠肝癌H22细胞生长的影响及其机制。方法:建立H22荷瘤小鼠模型,观察FAC对H22肝癌移植瘤生长的抑制作用及其对荷瘤小鼠免疫器官、巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化功能及生存期的影响。结果:高、中、低剂量组FAC对荷瘤小鼠肝癌细胞生长具有显著抑制作用,与正常对照模型组比较差异具有统计学意义(P0.05)。FAC可以明显延长荷瘤小鼠的存活期,高、中、低剂量组的生命延长率分别为64.9%、56.7%和28.1%,与CTX对照组比较差异具有统计学意义(P性免疫功能。FAC可能通过调节机体免疫功能来发挥抗肿瘤作用。

关键词：肝肿瘤,实验性沙苑子黄酮类免疫活性小鼠

兔VX2 肝癌放疗后的MR扩散加权成像特征与细胞凋亡情况

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中华放射学杂志 2010年第5期44卷 540-544页

作者：江新青刘真魏新华吴红珍陈亮徐海侠广州医学院附属广州市第一人民医院放射科 510180

目的研究VX2肝癌三维立体定向适形放疗后的DWI特征及肿瘤细胞凋亡情况.方法成功制成60只兔肝癌模型后,待瘤体直径≥1 cm时,应用随机数字表法随机抽取40只瘤兔进行放疗,将放疗后40只兔用同样方法随机分成4组,每组10只,各组兔分别于放疗... 详细信息

目的研究VX2肝癌三维立体定向适形放疗后的DWI特征及肿瘤细胞凋亡情况.方法成功制成60只兔肝癌模型后,待瘤体直径≥1 cm时,应用随机数字表法随机抽取40只瘤兔进行放疗,将放疗后40只兔用同样方法随机分成4组,每组10只,各组兔分别于放疗后1、5、10和15 d进行MR扫描,另20只作为对照组,不行放疗,随机分配到各组中,测量VX2肿瘤、肝脏ROI的ADC值,并计算两者比值.肿瘤标本行DNA缺口末端标记（TUNEL）法测定肿瘤细胞凋亡情况,计算凋亡指数（AI）,采用方差分析比较组间差异有统计学意义后,再采用SNK检验分别比较不同放疗时间点各组ADC比值和AI,不同放疗时间点放疗组与对照组之间比较采用两样本t检验.结果放疗后1、5、10和15 d,放疗组ADC比值分别为0.74±0.15（8只）、1.04±0.09（7只）、1.43±0.12（7只）、1.25±0.23（8只）,差异有统计学意义（F=24.221,P＜0.01）;相应对照组ADC比值分别为0.78±0.07（5只）、0.79±0.07（4只）、0.83±0.14（4只）、0.97±0.19（4只）.2组放疗后5和10 d差异有统计学意义（t值分别为4.417和7.259,P值均＜0.01）,放疗后1和15 d差异无统计学意义（t值分别为0.569和1.957,P值均＞0.05）.1、5、10和15 d放疗组凋亡指数分别为0.39±0.13（8只）、0.29±0.08（7只）、0.28±0.07（7只）、0.58±0.19（8只）,差异有统计学意义（F=8.128,P＜0.05）;相应对照组凋亡指数分别为0.26±0.13（5只）、0.18±0.03（4只）、0.16±0.06（4只）、0.18±0.08（n=4）,差异无统计学意义（F=1.006,P＞0.05）;2组放疗后5、10和15 d差异有统计学意义（t值分别为2.348、2.386和3.756,P值均＜0.05）,放疗后1 d差异无统计学意义（t值为1.716,P＞0.05）.结论 DWI可以反映兔VX2肝放疗后不同时间点细胞凋亡的动态变化.

关键词：肝肿瘤,实验性磁共振成像,弥散细胞凋亡