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酵母双杂交技术筛选Hcbp6结合的肝细胞蛋白编码基因

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世界华人消化杂志 2003年第4期11卷 385-388页

作者：王琳李克成军陆荫英张健陈天艳洪源刘妍王刚钟彦伟中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心

目的:Hcbp6是与核心蛋白相结合的未知功能蛋白基因,为了初步提示他的生物学功能和在细胞中的存在形式,采用酵母双杂交体系寻找与他相互作用的肝细胞蛋白,探讨Hcbp6的生物功能。方法:应用酵母双杂交系统3,构建Hcbp6诱饵质粒并转化酵母AH1... 详细信息

目的:Hcbp6是与核心蛋白相结合的未知功能蛋白基因,为了初步提示他的生物学功能和在细胞中的存在形式,采用酵母双杂交体系寻找与他相互作用的肝细胞蛋白,探讨Hcbp6的生物功能。方法:应用酵母双杂交系统3,构建Hcbp6诱饵质粒并转化酵母AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,在涂有x-α-gal营养缺陷型培养基(SD/Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析。结果:筛选出4种与Hcbp6特异性相互作用的蛋白,包括Paralemmin(PALM)、Ran结合蛋白2(Ranbp2)、跨膜运输蛋白21(Tmp21)和血清白蛋白。结论:推测该蛋白可能为一分泌性蛋白,或与分泌蛋白的形成有关,进一步的生物学功能的研究需要更多的实验加以探讨。

关键词： Hcbp6 酵母双杂交技术筛选肝细胞编码基因生物学肝细胞蛋白分泌蛋白血清白蛋白核心蛋白蛋白基因融合蛋白肝细胞结合蛋白6 毒性肝炎

高速投射物压力波对大鼠肝细胞蛋白代谢功能的影响

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战伤参考资料 1993年第3期24卷 38-39页

作者：陈林王正国

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酵母双杂交系统的原理及应用

世界华人消化杂志 2003年第4期11卷 451-455页

作者：陈天艳成军张树林中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心西安交通大学第一医院传染科陕西省西安市710061

0引言蛋白质和蛋白质的相互作用是很多生命现象的基础.随着分子生物学技术的发展,特别是人类基因组计划的完成,使人类对基因的结构和功能的认识不断加深,但基因编码的蛋白质的功能研究尚是一个难题.酵母双杂交(yeast two hybrid)技术是... 详细信息

0引言蛋白质和蛋白质的相互作用是很多生命现象的基础.随着分子生物学技术的发展,特别是人类基因组计划的完成,使人类对基因的结构和功能的认识不断加深,但基因编码的蛋白质的功能研究尚是一个难题.酵母双杂交(yeast two hybrid)技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用,该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.

关键词：酵母双杂交系统原理真核细胞转录因子酵母转录因子氨基酸残基区段转录激活域上游激活序列乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒感染肝细胞蛋白艾滋病蛋白质

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乙型肝炎病毒蛋白结合蛋白的研究

世界华人消化杂志 2002年第2期10卷 161-164页

作者：李克王琳成军陆荫英洪源刘妍张玲霞中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心北京市100039

AIM: Augmenter of liver regeneration (ALR) is a kind of protein, which not only plays important role in liver regeneration, but have some effects on other cells e.g. NK cells. How the factor taking effects is not clear. To investigate the biological function of augmenter of liver regeneration, we performed yeast two hybrid to seek for proteins in hepatocytes interacting with ALR. METHODS: ALR bait plasmid was constructed by ligating the gene of ALR into pGBKT7, then transformed into yeast AH109(a type), the transformed yeast mated with yeast Y187(αtype) containing liver cDNA library plasmid in 2 × YPDA medium. Diploid yeast was plated on synthetic dropout nutrient medium (SD/-Trp-Leu-His-Ade) containing x-α-gal for selection and screening. After extracting and sequencing of plasmids from blue colonies, we underwent sequence analysis by bioinformatics. RESULTS: Thirty-six colonies were sequenced, among them, 14 colonies are metallothionein, 12 are albumin, and 3 of them are selenoprotein P. One colony is a new gene. CONCLUSION: The preliminary successful cloning of gene of protein interacting with ALR pave the way for studying the physiological function of ALR and associated protein.

关键词：人肝再生增强因子 ALR 生物功能肝细胞蛋白肝脏再生

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乙型肝炎病毒X基因启动子结合蛋白的研究

乙型肝炎病毒X基因启动子结合蛋白的研究

作者：吴煜中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

乙型肝炎病毒(HBV)基因组为部分双链环状DNA病毒，属嗜肝DNA病毒科，其基因组约3200个碱基对(bp)，分为结构基因和调节基因序列两部分。HBV DNA负链核苷酸序列至少有4个开放读框(ORF)，4种ORF分别有各自的启动子。X基因启动子(XP)在1235... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)基因组为部分双链环状DNA病毒，属嗜肝DNA病毒科，其基因组约3200个碱基对(bp)，分为结构基因和调节基因序列两部分。HBV DNA负链核苷酸序列至少有4个开放读框(ORF)，4种ORF分别有各自的启动子。X基因启动子(XP)在1235-1374 nt区段，调节转录0.8的mRNA，无TATA盒，有不同的5’-端。XP的组织特异性不如CP和SP的严格，可在肝细胞以外的组织中起转录调节作用。X启动子调节编码HBxAg的0.8 kb mRNA转录，这个可调节的转录位于转录开始位点前140 nt，并且这个最小的启动子与3`-末端的增强子Ⅰ成分相重叠，由20 nt组成。这个最小的启动子象大多数HBV启动子一样与增强子Ⅰ的转录是分开的，它缺乏通常的TATA-盒或GC丰富的序列结构。但是，X启动子包含了广泛结合的位点和肝特异性转录因子，如调节作用蛋白X启动子结合蛋白(XP-BP)结合位点。HBxAg表达具有调节作用的转录包含顺式相互作用位点，能与转录因子NF1、C／EBP、ATF和AP1／Jun-Fos结合而且肿瘤抑制基因产物p53可与之结合并抑制启动子功能。我们利用人肝细胞cDNA文库，以生物素化的XP的DNA作为固相分子进行筛选，研究影响HBV DNA复制的肝细胞蛋白的结构和功能。方法应用噬菌体表面展示技术，以生物素化的HBV X基因启动子(XP)PCR产物作为固相筛选分子，对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”过程，经噬斑的PCR扩增后，构建T-A克隆载体，最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索，确定XP DNA结合蛋白的名称结果 2001级硕士学位论文乙型肝炎病毒X基因启动子结合蛋白的研究 1.噬菌体经富集后，从随机筛选的21个克隆中得到17个阳性克隆，成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索，确定了和 HBv XP DNA结合的肝细胞蛋白，共编码14种蛋白，其中9个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码尼克酞胺腺嗓吟二核昔酸脱氢酶亚型4、人血清白蛋白、泛素特异性蛋白酶10、翠丸增强基因转录子、激肤酶原。 2.成功构建了HBV XP的报告基因载体。用以T ELISA法测量结果: pCAT一XP实验组CAT酶的表达是pCAT的10余倍。结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV XP的结合蛋白，分析了该蛋白的编码基因，可能是作用于XP的反式调节因子，为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径;成功地运用 DNA为固相靶分子筛选人肝cDNA文库，确定了和HBVX基因启动子结合的肝细胞蛋白一尼克酞胺腺嚓吟二核昔酸脱氢酶亚型4 (NADHPH4)等结合蛋白，噬菌体展示技术作为一种研究DNA一蛋白质相互作用的方法可进一步用于其他相关研究。

关键词：乙型肝炎病毒肝细胞蛋白基因启动子编码基因

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丙型肝炎病毒E2蛋白相互作用蛋白的研究

丙型肝炎病毒E2蛋白相互作用蛋白的研究

作者：张健中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

丙型肝炎病毒(HCV)感染致肝细胞损伤机制，很大程度上与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用相关。因此，研究HCV各抗原成分与肝细胞内的蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HCV的致病机制做出解释，为寻找有效防治HCV的方法提供新线索... 详细信息

丙型肝炎病毒(HCV)感染致肝细胞损伤机制，很大程度上与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用相关。因此，研究HCV各抗原成分与肝细胞内的蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HCV的致病机制做出解释，为寻找有效防治HCV的方法提供新线索。为研究HCV E2在HCV感染后病毒致病过程中的作用，我们应用酵母双杂交系统3，构建HCV E2诱饵质粒，转化酵母AH109，与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合，于涂有X-α-gal营养缺陷型培养基上筛选生长。挑选蓝色克隆，提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序，然后进行生物信息学分析。我们将得到的其中一个未知功能的基因，命名为 HCV EZ蛋白结合蛋白1(HCV EZBPI)。我们对HCV EZBPI 进行了初步探讨。从人肝癌细胞中得到了HCv EZBPI基因的全长编码序列，构建真核表达载体pcDNA3.1卜)一HCV EZBPI，以及酵母表达载体pGBKT7一HCV EZBPI。进一步应用酵母双杂交(yea 5 t two一hyb:id)技术筛选HCV EZBpl 与肝细胞文库结合的蛋白，并应用抑制性消减杂交 (suppression subtraetive hybridization，SSH)技术，构建HCV EZBPI激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，筛选相关的靶基因片段。在研究HCV EZ的酵母双杂交研究中，我们得到76 个与EZ特异性结合的阳性克隆，其中包括14个未知功能基因。在新基因功能的研究方面，我们对其中一个未知功能的基因HCV EZBPI应用酵母双杂交及抑制性消减杂交技术进行了初步的研究，得到了一系列与HCv EZBPI 有关系的蛋白编码基因。通过对HCV EZ及其新基因的研究，我们对该基因的功能有了初步的了解，为下一步更加具体的生物学功能、基因表达调控的深入研究开辟道路。

关键词：病毒蛋白肝细胞蛋白编码基因

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血清胆碱酯酶检测结果与肝硬化临床关系

临床医学 2007年第9期27卷 64-65页

作者：余忠明浙江省淳安县第二人民医院检验科淳安311719

胆碱酯酶(ChE)是催化水解酰基胆碱生成胆碱和乙酸的酶类,又称酰基胆碱水解酶.血清胆碱酯酶ChE是由肝脏合成的一种水解酶,该酶在肝脏合成后立即释放入血,且半衰期短,其血清浓度能反映其合成速率,肝脏受损时,血清ChE合成减少,活性降低,因... 详细信息

胆碱酯酶(ChE)是催化水解酰基胆碱生成胆碱和乙酸的酶类,又称酰基胆碱水解酶.血清胆碱酯酶ChE是由肝脏合成的一种水解酶,该酶在肝脏合成后立即释放入血,且半衰期短,其血清浓度能反映其合成速率,肝脏受损时,血清ChE合成减少,活性降低,因此血清ChE和白蛋白(Alb)一起是评价肝细胞蛋白合成功能的灵敏指标[1].

关键词：血清胆碱酯酶肝硬化患者检测结果临床血清ChE 合成速率肝脏受损肝细胞蛋白

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成功的奥秘

中国卫生监督杂志 1997年第2期4卷 97-97页

一部具有我国自主知识产权的再生生物学研究成果的鸿篇巨制——评《动物组织器官再生的比较蛋白质组学研究》

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基础医学与临床 2019年第5期39卷 725-725页

作者：杨秦予大象出版社

《动物组织器官再生的比较蛋白质组学研究》为国家新闻出版广电总局“十三五”规划重点项目,获国家出版基金资助,由郑州大学出版社出版发行。该套书包括上、中、下三卷,全精装四色印刷,总定价1800元,由吴祖泽院士作序,我国从事组织器官... 详细信息

《动物组织器官再生的比较蛋白质组学研究》为国家新闻出版广电总局“十三五”规划重点项目,获国家出版基金资助,由郑州大学出版社出版发行。该套书包括上、中、下三卷,全精装四色印刷,总定价1800元,由吴祖泽院士作序,我国从事组织器官再生蛋白组学研究领域的专家和学者徐存拴、章静波、陈广文、张富春合著。该套书从动物组织器官再生的比较蛋白质组学角度,系统分析了大鼠肝再生、分布于我国的Orientalis蝾螈肢体再生、分布于我国的Japonica三角涡虫头尾部再生和再生肝的肝细胞蛋白表达变化及其支配的32种生理生化活动异同,揭示了其中的关键蛋白作用、信号转导活性、调节再生的途径及方式和动物组织器官再生的内在规律。

关键词：比较蛋白质组学器官再生动物组织自主知识产权再生生物学肝细胞蛋白基金资助郑州大学