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肝细胞核因子6在早期肝脏再生中的作用

肝细胞核因子6在早期肝脏再生中的作用

作者：吕铁辉大理学院

学位级别：硕士

目的：观察肝细胞核因子-6 (Hepatocyte nuclear factor-6, HNF-6)在大鼠肝脏大部切除术(Partial Hepatectomy, PH)后肝脏再生早期中在肝脏内的表达及分布,探讨其在肝脏再生中的调控作用及相关机制。方法：SD大鼠30只,用Higgins等人的... 详细信息

目的：观察肝细胞核因子-6 (Hepatocyte nuclear factor-6, HNF-6)在大鼠肝脏大部切除术(Partial Hepatectomy, PH)后肝脏再生早期中在肝脏内的表达及分布,探讨其在肝脏再生中的调控作用及相关机制。方法：SD大鼠30只,用Higgins等人的方法建立大鼠肝脏再生模型,观察正常肝脏及再生早期大鼠肝脏形态学变化,采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR检测HNF-6在正常肝脏及早期肝再生中的表达及变化。结果：①大鼠肝脏再生早期组织学改变：肝脏再生早期主要形态学改变为肝细胞充血水肿,肝血窦增宽,肝细胞索及肝小叶结构紊乱并有炎症细胞浸润。随着时间增加,肝血窦进一步增宽,肝实质细胞增多,双核肝细胞及空泡现象增多。②大鼠肝脏再生早期HNF-6的表达：HNF-6在正常肝细胞中表达较弱,而在胆管上皮细胞上有较强表达。模型组中肝细胞和胆管上皮细胞内均有HNF-6的表达,且表达明显上调,高峰出现在PH后6h,其后表达水平逐渐下降,但仍高于正常对照组。结论：HNF-6是维持肝脏正常代谢的重要因子,它在肝脏再生早期可能通过对细胞周期调控基因的调控来促进肝细胞再生。

关键词：肝细胞核因子6 肝脏再生肝大部切除术细胞周期调控

HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响

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南方医科大学学报 2012年第1期32卷 66-70页

作者：耿海涛肖乾徐邓勇胡立锋丁克峰浙江大学肿瘤研究所浙江大学医学院附属第二医院肿瘤外科浙江杭州310009

目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细... 详细信息

目的构建HNF6的慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系并观察HNF6对大肠癌细胞系SW620的侵袭转移能力的影响。方法构建HNF6慢病毒载体pLeno-DCE-HA-HNF6,感染293T细胞,收集上清测定病毒滴度;病毒颗粒转染SW620细胞,通过荧光显微镜及流式细胞仪观察转染效率;定量PCR(qPCR)及Western blotting检测HNF6的表达;应用Transwell和划痕试验观察SW620细胞侵袭转移能力的变化。结果通过PCR及酶切鉴定成功构建pLeno-DCE-HA-HNF6载体;包装并得到高滴度的病毒颗粒;转染SW620后,qPCR及Western blotting检测到HNF6表达明显升高;HNF6导致SW620明显的细胞形态变化,Transwell及划痕试验证明HNF6使SW620细胞迁移能力降低。结论成功构建并包装得到HNF6的慢病毒颗粒,建立稳定表达HNF6的大肠癌细胞系SW620-HNF6,证明过表达HNF6后可以抑制大肠癌侵袭转移能力。

关键词：肝细胞核因子6 SW620 慢病毒大肠癌转移

HNF4α和HNF6 mRNA在小鼠肝发育过程中的表达

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四川大学学报（医学版） 2005年第4期36卷 493-496页

作者：蒋吉英李爱冬杨淑霞洪华容宋红瑞梅妍周鸿鹰羊惠君四川大学华西基础医学与法医学院解剖学教研室成都610041 第三军医大学成都军医学院科研实验中心

目的探讨HNF4α和HNF6在肝发育过程中的作用。方法用RT-PCR和原位杂交检测HNF4αmRNA和HNF6mRNA在胚胎第8、9、13、15、17d(E8、E9、E13、E15、E17)、出生后第1d(P1)以及成年小鼠肝中的表达。结果RT-PCR结果显示,HNF4α在肝中的表达始于... 详细信息

目的探讨HNF4α和HNF6在肝发育过程中的作用。方法用RT-PCR和原位杂交检测HNF4αmRNA和HNF6mRNA在胚胎第8、9、13、15、17d(E8、E9、E13、E15、E17)、出生后第1d(P1)以及成年小鼠肝中的表达。结果RT-PCR结果显示,HNF4α在肝中的表达始于E9,并持续到新生,至成年时表达减弱。原位杂交结果显示,在胚胎发育的各个阶段多数肝索细胞呈HNF4α阳性反应,成年时仍有少数HNF4α阳性的肝索细胞,而胆管板及胆管上皮细胞、血管内皮细胞、造血细胞等均为阴性。HNF6mRNA的表达在E9开始出现,E13消失,E15又重新出现,并一直维持到出生。E9、E15多数肝索细胞呈HNF6mRNA阳性反应,E17及P1HNF6mRNA在肝索细胞中的反应减弱,胆管板细胞出现强阳性反应。结论HNF4αmRNA表达与肝芽的形成有关,并参与肝干细胞向肝细胞的增殖、分化的过程,其在正常成年肝中的表达可能与肝细胞正常形态的维持有关。HNF6可能在肝干细胞的形成和肝干细胞向胆管细胞的分化,以及胆管细胞的增殖、分化过程中发挥作用,其在正常成年肝中可能介导维持胆管上皮细胞的正常形态。

关键词：肝发育肝细胞核因子4α 肝细胞核因子6

肝活素转录激活肝源性细胞FOXA2抑制内质网应激

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中国生物化学与分子生物学报 2023年第12期39卷 1753-1764页

作者：王效芳韩子轩杨洋张梦洁吴勤录向慎思万悦董典典陈慧于淼河北大学生命科学学院河北保定071002 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850 安徽医科大学基础医学院合肥230032

肝活素(hepassocin,HPS)是一种由肝合成和分泌的活性因子,参与肝再生与物质代谢,重组肝活素可以救治小鼠化学性肝损伤和非酒精性脂肪性肝炎,但其具体的分子机制仍需深入研究。前期采用RNA测序技术(RNA-seq)分析发现,HPS敲除小鼠肝中叉... 详细信息

肝活素(hepassocin,HPS)是一种由肝合成和分泌的活性因子,参与肝再生与物质代谢,重组肝活素可以救治小鼠化学性肝损伤和非酒精性脂肪性肝炎,但其具体的分子机制仍需深入研究。前期采用RNA测序技术(RNA-seq)分析发现,HPS敲除小鼠肝中叉头框蛋白A2(forkhead box A2,FOXA2)的表达显著降低。FOXA2是肝内富集表达的重要转录因子,我们推测FOXA2可能是HPS调节肝多种生物学功能的关键靶点。本研究首先通过Western印迹和Real-time PCR证明FOXA2在HPS敲除小鼠肝组织中的表达显著降低(P细胞水平证明,重组HPS能显著增加FOXA2的表达(P肝细胞核因子6(hepatocyte nuclear factor 6,HNF6)的结合序列。通过凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)的结果证明,HPS可以促进HNF6与该序列的结合,并具有剂量依赖效应。通过慢病毒感染证明,在HPS敲除小鼠原代肝实质细胞中回补FOXA2会减轻内质网应激(P<0.01)。本研究为探索HPS调节肝功能稳态的分子机制提供了新的线索。

关键词：肝活素叉头框蛋白A2 肝细胞核因子6 表达调控

左归丸母代干预对妊娠糖尿病模型大鼠子代胎鼠胰腺发育调控因子PDX-1、HNF-6的影响

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中医杂志 2021年第4期62卷 341-345页

作者：王超群周然王永辉刘涛赵乐许凯霞湖北中医药大学基础医学院湖北省430065 山西中医药大学

目的探讨左归丸母代干预对妊娠糖尿病(GDM)模型大鼠子代胎鼠的影响及机制。方法通过雌雄同笼制备孕鼠90只,随机分为正常组,模型组,门冬胰岛素组,左归丸低、中、高剂量组,每组15只。除正常组外,其余孕鼠通过腹腔注射链脲佐菌素的方法复制... 详细信息

目的探讨左归丸母代干预对妊娠糖尿病(GDM)模型大鼠子代胎鼠的影响及机制。方法通过雌雄同笼制备孕鼠90只,随机分为正常组,模型组,门冬胰岛素组,左归丸低、中、高剂量组,每组15只。除正常组外,其余孕鼠通过腹腔注射链脲佐菌素的方法复制GDM孕鼠模型。造模成功后左归丸低、中、高剂量组给予左归丸灌胃剂量分别为2.5、5.0、10.0g/(kg·d),正常组和模型组分别给予10ml/(kg·d)生理盐水灌胃,门冬胰岛素组给予门冬胰岛素注射液20U/(kg·d)皮下注射,每日1次,共给药14天。Western-blot法检测胎鼠胰腺胰十二指肠盒因子1(PDX-1)蛋白表达,Real-time PCR法检测胎鼠胰腺肝细胞核因子6(HNF-6)mRNA表达,BSP法检测胎鼠胰腺HNF-6基因甲基化表达。结果与正常组比较,模型组PDX-1蛋白、HNF-6 mRNA及HNF-6甲基化率表达降低(P6 mRNA及HNF-6甲基化率表达升高,门冬胰岛素组HNF-6 mRNA表达下降(P6 mRNA及HNF-6甲基化率表达升高(P6 mRNA及HNF-6甲基化率表达高于左归丸高、低剂量组(P6 mRNA及HNF-6甲基化率表达高于左归丸低剂量组(P6 mRNA表达与其甲基化率呈显著正相关(P因子HNF-6基甲基化水平,以提升其mRNA表达,从而上调PDX-1蛋白表达,调节胎鼠胰腺的发育,减缓子代相关疾病的发生。

关键词：妊娠糖尿病左归丸肝细胞核因子6 胰十二指肠盒因子1 基因甲基化

HNF6对结肠癌肿瘤细胞生物学行为影响的初步研究

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HNF6对结肠癌肿瘤细胞生物学行为影响的初步研究

作者：耿海涛浙江大学

学位级别：硕士

[研究背景] 结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,我国结直肠癌发病率逐年提高。大规模人群普查资料表明,结直肠癌已成为我国发病率位居第四的常见恶性肿瘤。结直肠癌的浸润和转移是治疗失败的主要原因,其中肝脏是最常见的远处转移器官。旦发... 详细信息

[研究背景] 结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,我国结直肠癌发病率逐年提高。大规模人群普查资料表明,结直肠癌已成为我国发病率位居第四的常见恶性肿瘤。结直肠癌的浸润和转移是治疗失败的主要原因,其中肝脏是最常见的远处转移器官。旦发生肝转移,结直肠癌患者往往预后较差。目前临床上应用的免疫组化标记不能很好的区分高转移风险的患者,因此从分子水平研究结直肠癌肝转移机制,摸清转移规律并从中找到预测和临床治疗靶点从而进行早期干预和治疗成了刻不容缓且意义重大的工作。肿瘤细胞转移是复杂的过程,只有高转移潜能的肿瘤细胞才能最终形成远处转移灶。通过裸鼠原位移植肿瘤可以最好的模拟人体内结直肠癌转移过程,是研究结直肠癌肝转移机制的重要载体。前期研究中,我们课题组通过裸鼠盲肠原位接种法构建了肝转移动物模型,并建立了一株肝转移细胞系SW620M,通过亲代细胞基因表达对比,我们发现肝细胞核因子(HNF6)在SW620M表达升高。并且HNF6的表达在SW620M细胞体外培养一段时间后恢复到原来水平,提示结直肠癌肝转移灶中HNF6的表达与肝脏特异的微环境相关。 HNF6属于在肝细胞富集表达的转录因子家族,主要表达与肝脏和胰腺,人类HNF6定位于15q21.1-q21.2,编码465个氨基酸的蛋白质,主要参与胚胎期胰腺形成,肝细胞发育、胆道系统形成、能量代谢等过程。作为基因特异性的转录因子目前已发现HNF6调控NEUROG3, FOXM1、PDX1、HNF1、FOXA1、FOXA2等靶基因的转录。其中多数靶基因为转录因子并已发现参与恶性肿瘤的发生与转移。Prevot PP等发现HNF6在胰腺管状腺癌早期的腺泡-导管化生过程中过表达,提示HNF6与胰腺管状腺癌早期癌变相关。Lehner F等通过免疫组化法对比结直肠癌转移灶与肝转移灶的蛋白表达发现：在肝转移中HNF6和他的靶基因FOXA2、 CXCL1、CXCL2等表达升高。然而HNF6在结直肠癌肿瘤细胞增殖,侵袭转移等过程中的生物功能及机制尚未见报道。本研究旨在通过构建HNF6的慢病毒表达载体,建立慢病毒介导的HNF6过表达细胞系,初步研究HNF6对结肠癌细胞系SW620细胞生物学行为的影响,为下一步机制研究及在结直肠癌肝转移诊断治疗中的应用奠定基础。 [研究目的] 构建HNF6的重组慢病毒表达载体,生产慢病毒颗粒并建立稳定表达HNF6的结肠癌细胞SW620-HNF6。研究稳定表达HNF6后,SW620细胞形态、迁移能力、增殖能力、克隆形成能力、体内致瘤能力等生物学行为的变化。 [研究方法] 1.利用pUC57-HNF6为模板,根据Genbank (NM04498.1)中HNF6序列设计引物,经聚合酶链反应(PCR)扩增CDS区利用基因重组技术连接到改造后的穿梭质粒—pLenO-DCE-HA中。 2.将pLenO-DCE-HA-HNF6与pRsv-REV, pMD1g-pRRE, pMD2G共转染病毒包装细胞293T收集上清并测定病毒滴度。 3.慢病毒颗粒感染SW620细胞建立稳定表达细胞系,western blot (?)去,RT-PCR法检测HNF6表达情况。 4.利用荧光显微镜观察细胞形态变化,划痕试验及Transwell法观察细胞迁移能刀。 5.绘制细胞生长曲线观察HNF6对SW620细胞增殖能力的影响。平板克隆形成试验观察HNF6对SW620细胞克隆形成能力的影响。 6.裸鼠成瘤试验观察稳定表达HNF6后SW620细胞成瘤能力改变。 [研究结果] 1.经过PCR鉴定、酶切鉴定及测序成功构建了pLenO-DCE-HA-HNF6重组慢病毒表达载体。 2.利用293T细胞成功生产高滴度的慢病毒颗粒,滴度为5.1×108TU/ml。 3.慢病毒颗粒感染SW620细胞72小时后荧光显微镜观察到较强的GFP表达。经过流式细胞检测到实验组SW620-HNF6与对照组SW620-EGFP的GFP表达率为82.3%和93.8%;细胞免疫组化显示HNF6高表达于细胞核,经过Westernblot检测HA-HNF6融合蛋白表达正确,RT-PCR检测发现mRNA水平上升高明显。 4.相差显微镜下观察过表达HNF6后,SW620细胞形态由短梭形变为多边形,失去伪足并且生长更加紧密。Transwell试验显示过表达HNF6后转移细胞数目由72.3±12.9下降到25.0±2.0,具有统计学差异(p细胞迁移能力明显降低。 5.生长曲线显示SW620-HNF6细胞增殖能力强于SW620-EGFP细胞,结果从第四天开始有统计学意义(p<0.05)。 6.平板克隆形成试验显示SW620-HNF6和SW620-EGFP的克隆数分别为82.33±4.73和53.00±4.00,对应克隆形成率为41.17%

关键词：结直肠癌肝细胞核因子6 HNF6 Transwell 划痕试验平板克隆试验

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HNF-6的生物学特点及功能的研究进展

四川解剖学杂志 2010年第2期18卷 38-40页

作者：吕铁辉寸向农杨开明云南省大理学院临床学院大理671000 云南省大理学院附属医院大理671000

肝细胞核因子6(HNF-6)属于肝细胞核因子家族中的ONECUT蛋白家族,是肝脏内调控基因特异性表达的一类转录因子,在肝脏较多表达,并含有在进化上相当保守的DNA结合区,通过与各种靶基因调控区顺式作用元件的结合,调控靶基因的表达,在转录水... 详细信息

肝细胞核因子6(HNF-6)属于肝细胞核因子家族中的ONECUT蛋白家族,是肝脏内调控基因特异性表达的一类转录因子,在肝脏较多表达,并含有在进化上相当保守的DNA结合区,通过与各种靶基因调控区顺式作用元件的结合,调控靶基因的表达,在转录水平对肝细胞分化和代谢过程起重要作用.

关键词：肝细胞核因子6 器官发育肝脏再生1