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健脾益气方对炎症微环境下人肝癌huh-7细胞的增殖、侵袭及凋亡作用研究

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世界科学技术-中医药现代化 2023年第11期25卷 3704-3714页

作者：陈琳蒋锐沅欧少甫梁天坚罗淑娟刘磊张萌蒋筱广西中医药大学研究生院南宁530000 中国科学院大学附属肿瘤医院杭州310000 浙江中医药大学第二临床医学院杭州310000 广西中医药大学赛恩斯新医药学院南宁530222 广西中医药大学基础医学院南宁530000

目的探究健脾益气方对脂多糖(LPS)联合三磷酸腺苷(ATP)刺激下的构造的炎症微环境下人肝癌huh-7细胞的增殖、侵袭及凋亡作用影响,并检测细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL^(-1)8的表达水平。方法构建健脾益气方含药血清,采用向细胞培养基中加... 详细信息

目的探究健脾益气方对脂多糖(LPS)联合三磷酸腺苷(ATP)刺激下的构造的炎症微环境下人肝癌huh-7细胞的增殖、侵袭及凋亡作用影响,并检测细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL^(-1)8的表达水平。方法构建健脾益气方含药血清,采用向细胞培养基中加入LPS与ATP共培养的方法刺激肝癌细胞并构建炎症微环境。将细胞分为空白组、模型组、VX-765组(10μmol·L^(-1))、低浓度中药组(15%健脾益气方低剂量含药血清)、中浓度中药组(15%健脾益气方中剂量含药血清)、高浓度中药组(15%健脾益气方高浓度含药血清)。细胞干预后采用CCK-8法检测各组细胞的增殖水平;通过Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞的凋亡率;采用Transwell法检测各组细胞侵袭水平;采用PI单染色法检测各组细胞的周期水平;采用ELISA法、Western blot法检测huh-7细胞中IL^(-1)b及1L^(-1)8表达水平。结果与空白组相比,采用LPS与ATP刺激后的模型组huh-7细胞的增殖水平、侵袭水平与IL^(-1)β及1L^(-1)8表达水平更高(Phuh-7细胞的增殖水平与侵袭水平,阻滞细胞增殖周期,降低细胞存活率(Phuh-7细胞凋亡(Phuh-7细胞中IL^(-1)β及1L^(-1)8表达水平(P肝癌huh-7细胞中的炎症微环境实现对人肝癌huh-7细胞的抑制增殖与侵袭,阻滞细胞周期和诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制肝癌细胞分析炎症因子IL^(-1)β及1L^(-1)8水平以实现对原发性肝癌的治疗目的。

关键词：肝癌huh-7细胞炎症微环境脾气亏虚健脾益气方

抑制IGF2基因的siRNA表达载体对肝癌huh-7细胞增殖的抑制作用

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中国药房 2015年第22期26卷 3059-3062页

作者：胡卫吴胜兰王旷靖张良鹏潘兹书汤绍辉武汉大学医院内科武汉430072 暨南大学附属第一医院消化内科广州510632 武汉大学生命科学院武汉430072

目的:研究抑制人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因的siRNA表达载体对肝癌huh-7细胞增殖的抑制作用。方法:将重组人甲胎蛋白(hAFP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)双启动子调控抑制IGF2基因的siRNA表达载体pGL3-h AFP-hTERT-siRNA3(简称siRNA3)转... 详细信息

目的:研究抑制人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因的siRNA表达载体对肝癌huh-7细胞增殖的抑制作用。方法:将重组人甲胎蛋白(hAFP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)双启动子调控抑制IGF2基因的siRNA表达载体pGL3-h AFP-hTERT-siRNA3(简称siRNA3)转染huh-7细胞和正常肝L-02细胞,另设阴性对照(载体p GL3-hAFP-hTERT)组和空白对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞转染48 h后IGF2 mRNA表达;酶标仪检测转染0、24、48、72 h后的细胞活性;流式细胞仪检测转染48h后细胞周期、细胞凋亡;Western blot法检测细胞IGF2、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)E2、Cyclin D2、Cdc2、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与阴性对照组和空白对照组比较,转染siRNA3的huh-7细胞中IGF2 mRNA表达明显减弱,转染48、72 h后huh-7细胞活性明显降低,G1期huh-7细胞明显增加,S期huh-7细胞明显减少;huh-7细胞早期、晚期及总凋亡百分比均明显增加,IGF2、PCNA、Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2和Bcl-2蛋白表达均明显减弱,以上差异具有统计学意义(P细胞上述指标均无明显变化(P>0.05)。结论:重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF2基因的siRNA可特异性抑制huh-7细胞IGF2表达及细胞增殖,其可能与下调IGF2 mRNA及蛋白表达,进而引起细胞增殖相关基因PCNA、细胞周期调控相关基因Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2及细胞凋亡调控相关基因Bcl-2蛋白表达下调有关。

关键词：重组hAFP/hTERT双启动子 RNA干扰人胰岛素样生长因子2基因肝癌huh-7细胞

保肝蒙药Ⅰ号对人肝癌huh-7细胞的作用及机制研究

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中国医药导报 2015年第35期12卷 26-30页

作者：阿南达苏依拉其木格包景荣苏秀兰内蒙古自治区鄂尔多斯市伊金霍洛旗蒙医院蒙医肝胆内科内蒙古鄂尔多斯017200 内蒙古医科大学附属医院临床医学研究中心内蒙古呼和浩特010050 内蒙古国际蒙医医院制剂中心内蒙古呼和浩特010020

目的探讨保肝蒙药Ⅰ号对人肝癌huh-7细胞增殖的抑制作用及机制,为临床应用与推广提供科学的理论及实验数据。方法体外培养人肝癌huh-7细胞,实验分为四组:对照组(生理盐水)、保肝蒙药Ⅰ号组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组、保肝蒙药Ⅰ号联合5-Fu... 详细信息

目的探讨保肝蒙药Ⅰ号对人肝癌huh-7细胞增殖的抑制作用及机制,为临床应用与推广提供科学的理论及实验数据。方法体外培养人肝癌huh-7细胞,实验分为四组:对照组(生理盐水)、保肝蒙药Ⅰ号组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组、保肝蒙药Ⅰ号联合5-Fu组。分别采用MTT法、流式细胞术和Q-PCR技术观察药物干涉后对肝癌细胞增殖的抑制作用,对肝癌细胞凋亡、细胞周期阻滞和相关基因表达的影响。结果 5-Fu组、保肝蒙药Ⅰ号(4 mg/m L)组和保肝蒙药Ⅰ号联合5-Fu组对huh-7肝癌细胞增殖抑制率分别达到67.70%、73.67%和75.35%。保肝蒙药Ⅰ号组单独作用于huh-7肝癌细胞以及保肝蒙药Ⅰ号联合5-Fu组联合作用,细胞的凋亡率均显示增加(Phuh-7肝癌细胞后显示细胞G_0/G_1期比率明显增加(Phuh-7肝癌细胞后显示细胞S期比率明显增加(P细胞色素C的表达。结论保肝蒙药Ⅰ号对人肝癌huh-7细胞增殖有显著的抑制作用,其机制与细胞周期阻滞及影响肿瘤细胞凋亡相关基因的表达相关。研究成果将对阐明临床应用的保肝蒙药Ⅰ号治疗肝癌的机制及推广应用有重要意义。

关键词：保肝蒙药I号肝癌huh-7细胞 5-氟尿嘧啶

沉默GPC3对肝癌huh-7细胞增生、迁移和侵袭能力的影响

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中华临床医师杂志（电子版） 2014年第20期8卷 28-31页

作者：雷长江李磊龙浩成曾诚黄剑彬江汉大学第二附属医院普外科武汉430050

目的探讨Hippo通路靶向GPC3后对肝癌huh-7细胞增生、迁移、侵袭能力的影响。方法采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量肝癌huh-7不同对数生长期的肝癌细胞株GPC3蛋白表达水平及GPC3 mRNA水平,并筛选出可有效沉默GPC3基因的siRNA。将... 详细信息

目的探讨Hippo通路靶向GPC3后对肝癌huh-7细胞增生、迁移、侵袭能力的影响。方法采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量肝癌huh-7不同对数生长期的肝癌细胞株GPC3蛋白表达水平及GPC3 mRNA水平,并筛选出可有效沉默GPC3基因的siRNA。将肝癌huh-7细胞株分为实验组、未转染组及对照组,实验组导入GPC3-siRNA-1633转染huh-7,其余两组不作处理。EdU实验检查三组细胞增殖率,划痕实验测定各组细胞迁移率,Transwell实验测定各组细胞侵袭能力。结果实验组GPC3 mRNA表达量及GPC3蛋白水平显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P细胞增生率、迁移率及侵袭率显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P肝癌huh-7细胞增殖、侵袭及转移,从而促进肝癌细胞生长。CPG3可通过上调Hippo通路中YAP表达水平从而促进肝癌细胞增生。通过沉默GPC3 mRNA后可有效抑制肝癌huh-7细胞生长。

关键词：细胞增殖 Hippo通路 GPC3 肝癌huh-7细胞

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E1AF在药物诱导的肿瘤细胞凋亡中的作用

E1AF在药物诱导的肿瘤细胞凋亡中的作用

作者：刘丹复旦大学

学位级别：硕士

E1AF,鼠PEA3的人的同源物,属于ETS转录因子家族PEA3亚家族,具有保守的ETS结构域,通过结合靶基因启动子区域的Ets结合位点(EBS)调控转录。E1AF除了参与生理过程如乳腺发育外还参与了肿瘤的发生和转移。在尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)中,E... 详细信息

E1AF,鼠PEA3的人的同源物,属于ETS转录因子家族PEA3亚家族,具有保守的ETS结构域,通过结合靶基因启动子区域的Ets结合位点(EBS)调控转录。E1AF除了参与生理过程如乳腺发育外还参与了肿瘤的发生和转移。在尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)中,E1AF基因易位后可以导致E1AF和EWS发生融合,从而导致尤文氏肉瘤的原癌发生。在乳腺癌中,E1AF在HER2/Neu介导的乳腺癌发生中起重要的作用,另外,E1AF可直接与肿瘤迁移和侵袭相关性基因的启动子区域结合,参与肝细胞生长因子(HGF)诱导的肿瘤侵袭和转移。这两项以往的研究成果说明E1AF与肿瘤的发生及侵袭是密切相关的。但是E1AF在肿瘤里是否还存在其他的功能是我们所关心的内容。我们的研究发现:E1AF在肿瘤细胞里具有促凋亡作用。具体而言,首先,我们发现,在光辉霉素诱导的肝癌细胞系huh-7和Hep3B凋亡的过程中,E1AF的蛋白表达水平明显上调。接着,我们在huh-7细胞里过表达E1AF发现,E1AF的过表达能明显促进光辉霉素诱导的huh-7细胞的凋亡。Bcl-2家族成员由于其在细胞凋亡中的重要作用而广为人知。Bax是Bcl-2家族中的一员,起促凋亡作用。有研究表明,Bcl-2和Bax的蛋白比例有可能决定了细胞是否进入凋亡过程。进一步深入的研究E1AF诱导肿瘤细胞凋亡的机制发现,过表达E1AF可上调Bax和caspase-3的表达。说明E1AF有可能是通过改变Bcl-2和Bax的比例增强肿瘤细胞对光辉霉素的敏感性。E1AF具有一个功能性的酸性结构域(AD),富含谷氨酰胺结构域(Gln-rich domain),DNA结合的ETS结构域。为了进一步阐明E1AF哪个结构域在其促凋亡过程中起了关键性作用,我们构建一系列GFP标记的E1AF结构域缺失突变体,结果发现ETS结构域对于E1AF的促凋亡作用是至关重要的。除此之外,我们在H1299细胞里发现E1AF参与了E2F1和DNA损伤剂共同诱导的细胞凋亡过程。我们的实验结果进一步证实了E1AF的促凋亡作用,并且E2F1在转录水平上调控E1AF的表达。综上所述,我们首次发现了E1AF的促凋亡作用,并且证明了E1AF的促进光辉霉素诱导的细胞凋亡是通过促凋亡蛋白Bax起作用的,这种促凋亡作用依赖其ETS结构域。E1AF在E2F1和DNA损伤剂诱导的肿瘤细胞凋亡中也起了重要作用。

关键词： E1AF 凋亡光辉霉素A 肝癌huh-7细胞 Bax ETS结构域 E2F1