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小剂量人参多糖对人肝癌bel-7402细胞生长抑制与诱导分化作用初探

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中国医院药学杂志 2018年第14期38卷 1484-1487,1525页

作者：乔洪旺何军郭林娜齐齐哈尔医学院附属第二医院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院解剖教研室黑龙江齐齐哈尔161006

目的:探讨小剂量人参多糖(ginseng polysaccharides,GPS)对人肝癌bel-7402细胞分化的诱导作用。方法:体外培养人肝癌bel-7402细胞,GPS组加入10 mg·L^(-1)人参多糖孵育,同时设对照组,采用CCK8实验检测人肝癌bel-7402细胞增殖情况;显微... 详细信息

目的:探讨小剂量人参多糖(ginseng polysaccharides,GPS)对人肝癌bel-7402细胞分化的诱导作用。方法:体外培养人肝癌bel-7402细胞,GPS组加入10 mg·L^(-1)人参多糖孵育,同时设对照组,采用CCK8实验检测人肝癌bel-7402细胞增殖情况;显微镜、透射电镜观察细胞形态及亚细胞结构的变化;放射免疫法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)的分泌量;流式细胞术检测细胞周期。结果:人参多糖能抑制人肝癌bel-7402细胞的增殖(P肝癌bel-7402细胞后细胞形态及亚细胞结构趋于成熟分化;甲胎蛋白(AFP)分泌量明显下降,白蛋白(ALB)的分泌量明显升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P细胞比例显著高于对照组(P细胞被阻滞G0/G1期。结论:小剂量人参多糖对人肝癌bel-7402细胞生长有抑制作用,可能与诱导分化有关。

关键词：肝细胞癌人参多糖肝癌bel-7402细胞诱导分化治疗

黄芪总苷对肝癌bel-7402细胞株的抑制作用

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时珍国医国药 2011年第5期22卷 1261-1262页

作者：黄熠胡火珍四川大学生命科学学院四川成都610064

目的研究黄芪总苷对肝癌bel-7402细胞增殖的抑制作用及探讨作用机理。方法肝癌bel-7402细胞与不同浓度的黄芪总苷培养12,24,48 h,应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌bel-7402细胞增殖具有明显的抑制作用... 详细信息

目的研究黄芪总苷对肝癌bel-7402细胞增殖的抑制作用及探讨作用机理。方法肝癌bel-7402细胞与不同浓度的黄芪总苷培养12,24,48 h,应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌bel-7402细胞增殖具有明显的抑制作用并呈剂量、时间依赖性。黄芪总苷对肝癌bel-7402细胞具有促进凋亡作用,并且上调p53基因表达。结论黄芪总苷可抑制肝癌bel-7402的增殖,其抑制肝癌bel-7402作用与其促进肿瘤细胞凋亡、上调p53基因表达有关。

关键词：黄芪总苷肝癌bel-7402细胞增殖凋亡 p53基因

细胞内F-actin的聚合与解聚对肝癌bel-7402细胞的影响

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激光生物学报 2005年第1期14卷 52-55页

作者：林珏龙陈耀文蔡唯佳朴仲贤刘晓珑杨海伟许丽艳汕头大学医学院中心实验室中国广东汕头515031 汕头大学医学院病理学教研室中国广东汕头515031 汕头大学医学院第二附属医院中国广东汕头515031

目的 :为探讨癌细胞内F actin的解聚与聚合对癌细胞的形态、迁移、侵入的影响。方法 :利用激光共聚焦显微镜对贴附培养的人肝癌bel 74 0 2细胞形态及其细胞内F actin进行观察 ;使用流式细胞仪对贴附的bel 74 0 2细胞及其脱落细胞与Cyt ... 详细信息

目的 :为探讨癌细胞内F actin的解聚与聚合对癌细胞的形态、迁移、侵入的影响。方法 :利用激光共聚焦显微镜对贴附培养的人肝癌bel 74 0 2细胞形态及其细胞内F actin进行观察 ;使用流式细胞仪对贴附的bel 74 0 2细胞及其脱落细胞与Cyt B处理后bel 74 0 2细胞内F actin的含量进行分析。结果 :bel 74 0 2细胞在培养的过程中 ,癌细胞形态伸展 ,出现侵入性生长 ,细胞内F actin聚合形成粗大的贯通细胞内的F actin束 ,F actin含量增高 ;癌细胞在生长过程中 ,常出现重叠生长 ,细胞变圆 ,F actin解聚变短 ,F actin小体增高 ,细胞有脱落的趋势 ,其脱落细胞内的F actin含量低于贴附细胞。结论 :人肝癌bel 74 0 2细胞内F actin的聚合可增加癌细胞的贴附和侵入性 ;细胞内F actin的解聚 ,及G actin重新聚合形成F

关键词：激光共聚焦显微镜肝癌bel-7402细胞纤维型肌动蛋白细胞松弛素-B

白花丹醌—单壁碳纳米管偶联物的制备及其对人肝癌bel-7402细胞的抑制作用

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广西医科大学学报 2013年第6期30卷 829-833页

作者：赖泽锋钟全强秦悦李苏宁冯建海赵雅婷刘华钢广西医科大学药学院南宁530021

目的:制备白花丹醌—单壁碳纳米管(plumbagin-single walled carbon nanotubes conjugate,PLB-SWNT)偶联物,考察其在水溶液中的分散性和体外对人肝癌bel-7402细胞的抑制活性。方法:以聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)作为偶联剂,通过酰胺化和酯化反应将PLB与SWNT偶联,制备PLB-SWNT偶联物,并利用傅里叶转换红外光谱仪和透射电子显微镜(TEM)考察和分析所制备得到的偶联物的组成、结构和形貌,以紫外—可见分光光度法(UV-Vis)测定PLB-SWNT偶联物的PLB含量,并以MTT比色法、HE染色法和TEM等方法对该偶联物体外抑制bel-7402活性进行初步研究。结果:①制备得到在水溶液中分散性较好的PLB-SWNT偶联物;②PLB-SWNT偶联物能够抑制人肝癌bel-7402细胞的增殖。结论:①以PEG和PLB对SWNT进行共价修饰,可以制备分散性良好的PLB-SWNT偶联物;②PLB-SWNT偶联物在体外对人肝癌bel-7402细胞的增殖抑制效果显著。

关键词：白花丹醌单壁碳纳米管偶联物药物载体肝癌bel-7402细胞抑制作用

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鼠尾藻多酚的抗肿瘤活性研究

中草药 2008年第1期39卷 93-95页

作者：魏玉西孙峋王长云王春波青岛大学医学院山东青岛266071 青岛大学科研处山东青岛266071 中国海洋大学医药学院海洋药物研究所海洋药物教育部重点实验室山东青岛266003

目的研究鼠尾藻Sargassum thunbergii多酚对肺癌A-549细胞和肝癌bel-7402细胞体外增殖的抑制作用。方法采用有机溶剂提取、透析法获得鼠尾藻多酚STK1(相对分子质量>1×104)和STK2(相对分子质量<1×104),采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法... 详细信息

目的研究鼠尾藻Sargassum thunbergii多酚对肺癌A-549细胞和肝癌bel-7402细胞体外增殖的抑制作用。方法采用有机溶剂提取、透析法获得鼠尾藻多酚STK1(相对分子质量>1×104)和STK2(相对分子质量细胞增殖抑制率。结果STK1在质量浓度为87.5μg/mL时,对A-549和bel-7402细胞增殖的抑制率分别为90.7%和89.3%;STK2在质量浓度为340μg/mL时,对A-549和bel-7402细胞增殖的抑制率分别为89.9%和90.1%。在相同质量浓度下STK1比STK2活性强。结论鼠尾藻多酚化合物(STK1和STK2)对人肺腺癌A549细胞、人肝癌bel-7402细胞均有较强的抑制作用,相对分子质量高的STK1具有更强的抑制活性。

关键词：鼠尾藻多酚肺癌A-549细胞肝癌bel-7402细胞增殖

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博来霉素A6抗人体肝癌的实验研究

药学学报 1987年第12期22卷 881-885页

作者：江敏甄永苏中国医学科学院医药生物技术研究所中国医学科学院医药生物技术研究所北京

用克隆形成测定法检查博来霉素A对人肝癌、鼻咽癌和胃癌等细胞系的杀伤作用,发现对肝癌bel-7402细胞有高度活性,半数杀伤浓度(IC)为6×10mol/L。用流式细胞光度术研究表明,博来霉素A对肝癌bel-7402细胞有G期阻断作用。在裸鼠可以耐受的... 详细信息

用克隆形成测定法检查博来霉素A对人肝癌、鼻咽癌和胃癌等细胞系的杀伤作用,发现对肝癌bel-7402细胞有高度活性,半数杀伤浓度(IC)为6×10mol/L。用流式细胞光度术研究表明,博来霉素A对肝癌bel-7402细胞有G期阻断作用。在裸鼠可以耐受的剂量下,博来霉素A对移植性人肝癌的肿瘤生长有显著抑制作用,抑制率为75%。研究结果提示博来霉素A有可能用于肝癌化疗。

关键词：博来霉素A6 肝癌bel-7402细胞异种移植流式细胞光度术

小分子激酶抑制剂的敏感性筛选及WH-4-023抗肝癌机制研究

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小分子激酶抑制剂的敏感性筛选及WH-4-023抗肝癌机制研究

作者：马培元山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1.通过验证几种药物的抑制作用从而选取针对肝癌SNU-423和bel-7402细胞的高效药物。2.分别探讨SRC激酶抑制剂WH-4-023对肝癌SNU-423和bel-7402细胞增殖、凋亡的影响及相应机制的研究。方法:***法验证三种作用于不同靶点的小分子激... 详细信息

目的:1.通过验证几种药物的抑制作用从而选取针对肝癌SNU-423和bel-7402细胞的高效药物。2.分别探讨SRC激酶抑制剂WH-4-023对肝癌SNU-423和bel-7402细胞增殖、凋亡的影响及相应机制的研究。方法:***法验证三种作用于不同靶点的小分子激酶抑制剂对肝癌SNU-423和bel-7402细胞活力的影响。2.应用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Hoechet染色法分别研究WH-4-023(0μmol/L、0.2μmol/L、1μmol/L、2μmol/L)对肝癌SNU-423细胞及WH-4-023(0μmol/L、0.3μmol/L、1.5μmol/L、3μmol/L)对肝癌bel-7402细胞增殖、凋亡的影响。*** blot对应检测所设药物浓度下WH-4-023对SRC/STAT3通路蛋白及下游蛋白Bcl-2翻译总量的影响。结果:***结果显示SRC激酶抑制剂WH-4-023作用于肝癌SNU-423和bel-7402细胞72h后的IC分别为1.15μmol/L、1.456μmol/L。2.不同浓度的WH-4-023分别作用于肝癌SNU-423细胞72h后,MTT实验证实肝癌SNU-423细胞随着所设不同药物浓度的升高而受抑制水平升高,平板克隆形成实验证实肝癌SNU-423细胞的克隆形成数目随药物浓度升高而减少,流式细胞术结果显示对照组与加药组细胞各个周期的百分比均无显著差异。Western blot结果显示WH-4-023在低浓度下即可抑制肝癌SNU-423细胞中p-SRC、p-STAT3、Bcl-2的表达,且具有剂量依赖性;对SRC、STAT3蛋白的表达无影响。3.所设浓度的WH-4-023作用于肝癌bel-7402细胞72h后,MTT实验结果证实肝癌bel-7402细胞随着所设不同药物浓度的升高而受抑制水平升高,平板克隆形成实验结果显示肝癌bel-7402细胞的克隆形成数目随药物浓度升高而减少,流式细胞术结果显示对照组与加药组细胞各个周期的百分比均无显著差异。Western blot结果显示WH-4-023在低浓度下即可抑制肝癌bel-7402细胞中p-SRC、p-STAT3、Bcl-2的表达,且具有剂量依赖性;对SRC、STAT3蛋白的表达无影响。结论:***-4-023具有较强的抑制肝癌SNU-423和bel-7402细胞生存的作用,在所设的低浓度下即可抑制两种肝癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。2.初步的机制研究显示:WH-4-023可能是通过抑制SRC/STAT3通路对应蛋白的激活、抑制下游通路蛋白Bcl-2的翻译水平,从而对肝癌SNU-423和bel-7402细胞的增殖起到抑制作用,进而诱导两种肝癌细胞凋亡。

关键词： WH-4-023 肝癌SNU-423细胞肝癌bel-7402细胞增殖凋亡

茶黄素对癌细胞的抑制及与抗坏血酸的协同作用

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茶黄素对癌细胞的抑制及与抗坏血酸的协同作用

作者：李伟浙江大学

学位级别：硕士

本论文用茶黄素复合物及单体对多种癌细胞进行抑制作用研究,并且首次将抗坏血酸与茶黄素进行人肺癌细胞A549的协同抑制作用试验。此外,分析了多种植物提取物对人肺癌细胞的抑制作用效果,主要结果概括如下:用MTT法检测了浓度分别为1、0.2... 详细信息

本论文用茶黄素复合物及单体对多种癌细胞进行抑制作用研究,并且首次将抗坏血酸与茶黄素进行人肺癌细胞A549的协同抑制作用试验。此外,分析了多种植物提取物对人肺癌细胞的抑制作用效果,主要结果概括如下:用MTT法检测了浓度分别为1、0.25、0.063、0.016、0.039mg/ml的TFs、TFDG、TF2B和UC对肝癌bel-7402细胞和胃癌MKN-28细胞的生长抑制效应。结果显示这些化合物对上述细胞有明显的生长抑制效应,其抑制率随药物浓度的升高和作用时间延长而增加。TFs、TFDG、TF2B和UC与bel-7402细胞共同培养48h后测得IC分别为0.18mM、0.16mM、0.11mM和0.08mM和胃癌MKN-28细胞的IC分别为0.58mM、0.25mM、0.14mM和0.22mM。通过EGCG、GSE、PBE、TFDG、TF和TFs的抗人肺癌A549细胞体外实验,结果表明除槲寄生的作用较小以外其他化合物均有很强促进人肺癌细胞凋亡的作用,并且EGCG的效果为最强,顺序为EGCG、TFs>GSE>PBE、TFDG>TF。细胞凋亡实验表明,单独的抗坏血酸对A549细胞的抑制几乎没有作用,但它可以显著的提高茶黄素类物质对该细胞的抑制效果。其中协同效果与单体TFc最大,抑制率高达84.28%。茶黄素各单体与浓度为2.50～6.25μM抗坏血酸协同抑制肺癌细胞A549时最少可以提高20%的抑制率。其中最好的协同抑制效果存在于TFc和抗坏血酸之间,。茶黄素单体与抗坏血酸的协同普遍高于EGCG与AA的协同。但不同浓度的抗坏血酸与单体TF协同效果差别不明显。电镜观察TFc和TFc与AA协同诱导的A549细胞的凋亡现象,观察到细胞核发生固缩,染色质浓缩边集和产生由膜状物包裹内溶物的凋亡小体。并且协同诱导时凋亡效果最明显。 DNA凝胶电泳结果显示,在此处理中可非常明显的看到细胞凋亡。凋亡细胞的DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现了180—200bp整倍体的DNA片断,而坏死细胞的DNA断裂点为无规律的杂乱片断。还可以清晰的看到标志细胞凋亡的梯形条带(DNA ladders)。综上所述,茶黄素及其单体可以诱导多种肿瘤细胞凋亡并且与抗坏血酸有良好的协同作用。由于细胞膜有不同程度的损伤,细胞膜是茶黄素、抗坏血酸或两者相互作用时对细胞损伤的主要作用位点。

关键词：茶黄素 EGCG 槲寄生提取物葡萄籽提取物松树皮提取物肺癌A549细胞胃癌MKN-28细胞肝癌bel-7402细胞抗坏血酸协同作用

虫草素脂质体的制备工艺优化及其体内外抗肿瘤活性研究

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虫草素脂质体的制备工艺优化及其体内外抗肿瘤活性研究

作者：武鹏凯北京中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:本文的一切努力都旨在寻找能解决虫草素在体内被腺苷脱氨酶（ADA）降解而失去其生物活性问题的途径。为此,我们首先对脂质体是否可以作为一种载体来保护虫草素免于被ADA降解进行了尝试并对如何获得高效装载的虫草素脂质体进行... 详细信息

研究目的:本文的一切努力都旨在寻找能解决虫草素在体内被腺苷脱氨酶（ADA）降解而失去其生物活性问题的途径。为此,我们首先对脂质体是否可以作为一种载体来保护虫草素免于被ADA降解进行了尝试并对如何获得高效装载的虫草素脂质体进行了探索;此外,对虫草素衍生物联合脂质体来保护其体内抗肿瘤活性的新思路也进行了初步的探讨。总体设计研究方法:本研究的设计思路如下:1,首先对虫草素的提取分离方法进行了验证;2,以肝癌H22荷瘤小鼠和肝癌bel-7402细胞为体内外模型验证硫酸铵梯度法制备虫草素脂质体的体内外抗肿瘤活性;3,研究可以高效装载虫草素的技术,并对获得相应脂质体的抗肿瘤活性进行验证;4,以优化的pH梯度法为基础,以上述体内模型对制备的虫草素衍生物脂质体进行体内抗肿瘤活性验证。1,虫草素的提取分离将蛹虫草菌种进行斜面接种活化后进行一级液体发酵培养和二级液体发酵培养,二级发酵培养15天后,收集培养液离心后取上清液,浓缩后用无水乙醇沉淀,离心去除沉淀后收集上清液,浓缩至小体积后使用阳离子交换树脂富集,多次重结晶后制得虫草素。2,硫酸铵梯度法制备虫草素脂质体采用硫酸铵梯度法制备虫草素脂质体后,对其包封率、体外渗漏、体外抗肿瘤活性（对bel-7402细胞的细胞毒作用、细胞凋亡、细胞周期阻滞作用）与体内抗肿瘤活性（对H22荷瘤小鼠的肿瘤与免疫器官的影响）进行验证。3,高效装载虫草素脂质体的制备以制备方法（逆向蒸发法、pH梯度法、硫酸铵梯度法、乙醇注入法、薄膜分散法、逆向蒸发法-pH梯度法、逆向蒸发法-微囊化法（the microencapsulation vesicle method（MCV））-pH梯度法）和卵磷脂（蛋黄卵磷脂（EPC）、氢化大豆卵磷脂（HSPC）、二硬脂酰磷脂酰甘油（DSPG））为变量,以虫草素脂质体的包封率为响应量,对虫草素脂质体的制备技术进行筛选;以逆向蒸发法-pH梯度法和逆向蒸发法-微囊化法-pH梯度法分别制备以HSPC和DSPG为卵磷脂的四种脂质体,记为脂质体1-4。对具有不同结构的脂质体1和脂质体3的体外抗肿瘤活性进行验证（对bel-7402细胞的细胞毒作用、细胞凋亡、细胞周期阻滞作用）;对四种脂质体的粒径、Zeta电位、体内抗肿瘤活性（一）（对H22荷瘤小鼠的肿瘤与免疫器官的影响）进行验证;再对脂质体3的体内抗肿瘤活性（二）（对H22荷瘤小鼠的肿瘤与免疫器官的影响）进行验证;将等体积的氯仿变为1:1（v/v）的氯仿/乙醚,采用逆向蒸发法-pH梯度法制备HSPC脂质体和PEG2000-DSPE修饰脂质体,对其体内抗肿瘤活性（三）（对H22荷瘤小鼠的肿瘤与免疫器官的影响）进行验证。4,虫草素酰胺衍生物脂质体的制备以pH梯度法为制备方法,观察不同比例的蛋黄卵磷脂/氢化大豆卵磷脂（6:0、5:1、3:3、1:5、0:6,m/m）对虫草素脂质体包封率的影响;以A:卵磷脂/胆固醇（m/m）,B:孵育温度（℃）,C:药脂比（m/m）为三因素进行L9（34）表正交实验设计,以包封率和载药量为指标筛选最优制备方案;以最优方案制备虫草素普通脂质体、负电荷脂质体与长循环脂质体,对它们的细胞（以bel-7402细胞为模型）毒作用进行研究;对虫草素酰胺衍生物与硼酸衍生物脂质体的包封率及体内活性（对H22荷瘤小鼠的肿瘤与免疫器官的影响）进行验证。结果1,虫草素的提取分离所制备的虫草素样品外为白色晶体;薄层色谱结果表明其与虫草素标准品的Rf值相近;高效液相结果表明它的纯度可达98%。2,硫酸铵梯度法制备虫草素脂质体所制备的虫草素脂质体的包封率为42.5%;体外渗漏实验表明:在0-40天内,虫草素脂质体会有一个快速的泄漏;而在40天后,仅仅有少量的渗漏被观察到;体外抗肿瘤活性实验表明虫草素脂质体能够降低虫草素对bel-7402细胞的效力、能够诱导细胞发生凋亡作用、可以改变虫草素的细胞周期阻滞从G0/G1期到G2/M期;体内抗肿瘤活性实验表明虫草素脂质体H22瘤有良好的抑制作用,且对H22小鼠的免疫器官没有表现出不良副作用（脾指数与胸腺指数与对照组相比没有显著性的增加）。3,高效装载虫草素脂质体的制备采用EPC为膜材时,五种常见的虫草素脂质体制备方法所制备的虫草素脂质体的包封率结果从大到小为:逆向蒸发法＞pH梯度法＞硫酸铵梯度法＞乙醇注入法＞薄膜分散法;以HSPC为膜材时,逆向蒸发法和pH梯度法所制备的虫草素脂质体的包封率都显著性高于EPC为磷脂所制备的脂质体;以逆向蒸发法联合pH梯度法联合所制备的虫草素脂质体的包封率显著性高于单一制备方法所得的脂质体;以逆向蒸发法-微囊化法-pH梯度法联合所制备的虫草素脂质体的包封率显著性高于逆向蒸发法-pH梯度法联用所制备的脂质体;此外,在HSPC中加入一定比例带负电荷的二硬脂酰磷脂酰甘油（DSPG）也可促进虫

关键词：虫草素肝癌bel-7402细胞肝癌H22荷瘤小鼠脂质体