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新型管内微萃取技术在检测肝癌醛酮标志物中的应用

新型管内微萃取技术在检测肝癌醛酮标志物中的应用

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作者：吴仕菊华中师范大学

学位级别：硕士

肝癌确诊目标物的缺乏是导致耽误治疗的最主要原因,另外,选择人体血清,血液,尿液等复杂基质进行醛酮标志物分析时具有极大的干扰性,直接影响检测的准确性。因此,探究更为准确的前处理方法和确定更易检测的肝癌标志物是目前研究的重点。... 详细信息

肝癌确诊目标物的缺乏是导致耽误治疗的最主要原因,另外,选择人体血清,血液,尿液等复杂基质进行醛酮标志物分析时具有极大的干扰性,直接影响检测的准确性。因此,探究更为准确的前处理方法和确定更易检测的肝癌标志物是目前研究的重点。最近几年In-tube SPME得到了较大的研究进展,研究人员选用更方便使用的,内径较大的聚四氟乙烯(PTFE)管作为新的吸附剂载体,解决了常用载体装载量少的缺点。因此本文研究重点是:省去将吸附材料反应到PTFE管内的复杂操作,简化对血清样品前处理的实验步骤,提高对肝癌醛酮小分子标志物检测的灵敏性,围绕这些,本文进行了以下实验内容:(1)合成磁性核介孔壳材料(C8-Fe304@mSi02),将材料用磁铁吸附到PTFE管内进行IT-SPME,省去将材料键合到管内的步骤,疏水性介孔材料在尺寸排阻和疏水吸附作用下将小分子醛酮衍生物吸附到介孔通道内,大分子蛋白质被阻隔在外,原味衍生血清样品,以此完成富集过程。通过对原位衍生和萃取条件进行优化,对2-丁酮和己醛目标物检出限分别为1.214,1.031 nmol L-1,RSD小于7.874%,成功检测出2-丁酮和己醛2种醛酮目标物在肝癌病人体内的含量明显高于正常人体内对应的含量,再次确定了 2-丁酮和己醛可以作为肝癌标志物分子。(2)合成新型磁性核介孔壳材料(C8/C18-Fe304@mSi02)吸引到PTFE管内用于微萃取过程,对前面工作合成的材料作进一步疏水性修饰,在介孔通道中修饰强疏水性C18功能基,增大核壳材料与醛酮目标物间的疏水作用。同样将材料用磁铁吸引到管内,利用介孔修饰省去去除蛋白质的步骤,在原味衍生和最佳实验条件下,对2-丁酮和己醛目标物检出限分别为1.043,1.027 nmol L-1,RSD小于6.975%,运用到实际样品检测时得到与前面工作相同的实验结论。(3)合成新型材料(PD/DAS/CHI)于PTFE管内,选用聚多巴胺(PD)作为连接剂,对PTFE管进行内壁修饰,将DAS/CHI键合到管内壁,增强材料的稳定性。合成的材料利用疏水性和氢键作用对醛酮目标物进行吸附,得到了较好的实验结果,材料可以用于血清等复杂基质的样品检测,在最佳实验条件下,对2-丁酮和己醛目标物检出限分别为1.590,1.398 nmol L-1,RSD小于7.215%,确定2-丁酮和己醛目标物在肝癌患者血清中存在含量异常。

关键词： In-tube SPME 介孔材料原位衍生肝癌醛酮标志物 HPLC

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