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表达乙型肝炎表面抗原及前 S2蛋白120～146片段重组酵母菌的构建及全菌体免疫效应评价

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中华传染病杂志 2014年第11期32卷 660-665页

作者：陈向敏张跃进田晓娟夏平潘唯文夏天俞陈慧张丽芳薛向阳温州医科大学生物学实验教学中心 325035 温州医科大学诊断学实验室 325035 温州医科大学分子病毒与疫苗研究所微生物与免疫学教研室 325035 仁济学院

目的：构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120～146片段（PreS2120-146）-HBsAg 的重组酵母菌，并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列，串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3．5K 表达载体，构建 pPIC... 详细信息

目的：构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120～146片段（PreS2120-146）-HBsAg 的重组酵母菌，并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列，串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3．5K 表达载体，构建 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 质粒，重组质粒经 BgkⅡ酶切线性化后，电转化至 GS115菌株中，筛选 PreS2120-146-HBsAg 重组毕赤酵母，通过 SDS-PAGE、Western 印迹、ELISA 分析目的蛋白的表达；以表达目的蛋白的灭活酵母全菌体免疫 BALB／c 小鼠，采用 ELISA 检测其产生的 HBsAg 特异性抗体；以 HBsAg CTL 表位肽刺激免疫小鼠脾细胞，通过实时PCR 检测γ干扰素表达，分析其诱导的 CTL 反应。采用独立样本 t 检验。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 重组质粒。重组毕赤酵母甲醇诱导后，SDS-PAGE、Werstern 印迹和 ELISA 证实 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白表达。与 HBsAg 纯抗原免疫比较，灭活重组酵母菌免疫小鼠产生抗 HBsAg 特异性 IgG 抗体水平相当（t＝0．946，P ＝0．381）。CTL 反应检测显示， HBsAg CTL 表位肽刺激灭活重组酵母菌免疫组小鼠的脾细胞产生更高水平的γ干扰素（t＝2．305，P ＝0．044）。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白，全菌体免疫小鼠后能诱导产生特异的体液免疫和细胞免疫反应。

关键词：肝炎表面抗原,乙型 PreS2 毕赤酵母免疫反应

乙型肝炎表面抗原对单核细胞来源的树突状细胞Toll样受体4信号通路的影响

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中华传染病杂志 2014年第2期32卷 94-99页

作者：燕飞汤永志潘柯传朱坚胜朱敏陈华忠赵海红刘均艳陈景丹温州医科大学附属台州医院感染科浙江省临海市317000

目的探讨HBsAg对脂多糖刺激成熟的单核细胞来源的树突状细胞（MoDC）功能和细胞表面TLR4信号通路的影响。方法将健康者PBMC诱导分化为未成熟MoDC，加入不同浓度HBsAg体外刺激，再经脂多糖刺激获得成熟MoDC。Western印迹检测各组TLR4、... 详细信息

目的探讨HBsAg对脂多糖刺激成熟的单核细胞来源的树突状细胞（MoDC）功能和细胞表面TLR4信号通路的影响。方法将健康者PBMC诱导分化为未成熟MoDC，加入不同浓度HBsAg体外刺激，再经脂多糖刺激获得成熟MoDC。Western印迹检测各组TLR4、核因子-κB、丝裂原激活蛋白激酶信号通路蛋白表达，ELISA检测细胞因子，细胞增殖与毒性检测试剂盒检测刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果未经HBsAg刺激的对照组TLR4、核因子-κB、pp38、磷酸化c—Jun氨基末端激酶1／2（piNKl／2）蛋白分别为0．43±0，14、0．69±0．27、0．21±0．09和0．44±0．13，5μg／mLHBsAg刺激后分别增至1．22±0．39、1．37±0．40、0．74±0．17和0．92±0．15（t值分别为-3．14、-3．09、-5．07和-2．93，均P〈0．05）；但细胞外信号调节激酶1／2表达下降（2．43±0．80比1．13±0．23，t=3．18，P〈0．05）。5μg／mLHBsAg刺激后的MoDC刺激同种异体T淋巴细胞，其刺激指数高于对照组，且随MoDC／淋巴细胞比值增高而增高（t值分别为-5．72、-4．93和-4．96，均P〈O．05）。5μg／mLHBsAg刺激后MoDC分泌IL-12、TNF—α分别为（637．8±19．2）和（710．6±47．4）μg／mL，对照组分别为（597．8±15．4）和（568．5±35．0）μg／ml。（t值分别为-5．07和～6．70，均P〈0．05）。结论HBsAg可激活MoDC表面TLR4信号通路，促进细胞因子分泌，增强刺激T淋巴细胞增殖的能力。

关键词：树突状细胞肝炎表面抗原,乙型 Toll样受体4 核因子-κB 丝裂原激活蛋白激酶类信号传导

乙型肝炎表面抗原、抗体共阳性者的病毒基因组S区、基本核心启动子区和前C区变异分析

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中华传染病杂志 2015年第2期33卷 71-74页

作者：钱福初邹伟华秦基取李栋立范晓娴戴利成浙江省湖州市中心医院中心实验室 313000 浙江省湖州市中心医院检验科 313000

目的探讨HBsAg和抗-HBs共阳性患者HBV基因组S区、基本核心启动子（BCP）区和前C区变异特点.方法慢性HBV感染者62例,其中血清HBsAg和抗-HBs共阳性者27例,HBsAg单阳性者35例.对患者血清中的HBV基因组S区、BCP区和前C区序列进行PCR扩增... 详细信息

目的探讨HBsAg和抗-HBs共阳性患者HBV基因组S区、基本核心启动子（BCP）区和前C区变异特点.方法慢性HBV感染者62例,其中血清HBsAg和抗-HBs共阳性者27例,HBsAg单阳性者35例.对患者血清中的HBV基因组S区、BCP区和前C区序列进行PCR扩增和测序,并对其变异位点进行分析.组间均数比较采用t检验,样本率和变异率的比较采用卡方检验.结果 HBsAg和抗-HBs共阳性组27例患者HBV基因S区发生156个氨基酸变异,HBsAg单阳性组35例患者发生100个氨基酸变异,共阳性组氨基酸变异率显著高于单阳性组（2.56％比1.26％,x2=32.07,P＜0.05）.在主要亲水区a决定簇,尤其是第一个茎环内,氨基酸变异频率共阳性组明显高于单阳性组（4.76％比1.02％,x2=11.58,P＜0.05）.共阳性组患者HBV基因组BCP区A1762T/G1764A双突变发生率显著高于单阳性组（59.3％比28.6％,x2=5.895,P＜0.05）;前C区A1846T变异也高于单阳性组（40.7％比17.1％,x2=4.265,P＜0.05）.共阳性组患者BCP区和前C区A1762T/G1764A＋G1896A联合突变发生率也高于单阳性组（37.0％比14.3％,x2=4.302,P＜0.05）.结论 HBsAg和抗-HBs共阳性患者S区a决定簇变异率、BCP区及前C区与肝细胞癌发生相关位点变异发生率明显高于HBsAg单阳性患者.

关键词：肝炎病毒,乙型肝炎表面抗原,乙型肝炎抗体,乙型基因突变

慢性乙型肝炎不同自然史阶段血清乙型肝炎表面抗原定量与肝组织病理学的关系

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中华传染病杂志 2017年第5期35卷 257-260页

作者：陈明胜欧旸甘巧蓉吕旭江李孝楼陈立福建医科大学附属传染病医院肝病科福州350025

目的探讨CHB患者在不同自然阶段时血清HBsAg水平及其与肝组织病理学的关系，建立一种基于HBsAg的无创肝纤维化诊断模型。方法2013年1月至2015年1月住院接受肝活组织检查的CHB患者145例，其中HBeAg阳性73例。比较在不同自然史阶段以及不... 详细信息

目的探讨CHB患者在不同自然阶段时血清HBsAg水平及其与肝组织病理学的关系，建立一种基于HBsAg的无创肝纤维化诊断模型。方法2013年1月至2015年1月住院接受肝活组织检查的CHB患者145例，其中HBeAg阳性73例。比较在不同自然史阶段以及不同HBeAg状态下患者HBsAg和HBV DNA水平。Logistic回归分析HBeAg阳性患者肝纤维化的影响因素，评价基于HBsAg的无创肝纤维化诊断模型——肝纤维化判别函数的预测价值。统计学处理采用ANOVA检验，两组间比较采用独立样本t检验。结果CHB患者在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期、再激活期的血清HBsAg分别为（4.29±0.69）、（3.56±0.61）、（3.22±0.64）和（3.54±0.50） lg IU/mL（F＝16.72，P〈0.01）；HBV DNA分别为（8.48±0.58）、（6.69±1.44）、（3.80±0.59）和（6.21±1.06） lg拷贝/mL（F＝76.73，P〈0.01）。HBeAg阳性患者肝组织炎症分级（G）≤G1、G2、G3、G4时的HBsAg分别为（4.44±0.65）、（4.00±0.72）、（3.74±0.62）和（3.28±0.50） lg IU/mL（F＝9.198，P〈0.01）；HBeAg阳性患者肝组织纤维化分期（S）≤S1、S2、S3、S4时的HBsAg分别为（4.55±0.54）、（4.04±0.89）、（3.59±0.63）和（3.34±0.50） lg IU/mL（F＝10.66，P〈0.01）。Logistic回归显示，年龄（OR＝1.091，95%CI：1.013～1.175）和HBsAg（OR＝0.190，95%CI：0.066～0.542）是HBeAg阳性患者肝纤维化的独立影响因素。肝纤维化判别函数的受试者工作特征曲线下面积为0.849，高于AST与血小板比值指数（0.749）和基于4因子的肝纤维化指标（0.763）。结论血清HBsAg水平在CHB不同自然史阶段存在明显差异，HBeAg阳性患者血清HBsAg水平随着肝纤维化程度的进展而降低，以HBsAg定量建立的无创肝纤维化模型可以初步判断肝组织的纤维化程度。

关键词：肝炎,乙型,慢性肝炎表面抗原,乙型自然史病理损伤

血清乙型肝炎表面抗原水平预测慢性乙型肝炎病毒感染状态的研究进展

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临床荟萃 2013年第10期28卷 1185-1190页

作者：陆伟张占卿上海市公共卫生临床中心肝炎二科上海201508

乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）的发现显著提高了乙型肝炎的诊断水平。早期开展的血清HBsAg检测属于定性检测,HBsAg阳性表示存在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染,但不能判断HBV感染状态。血清HBsAg... 详细信息

乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）的发现显著提高了乙型肝炎的诊断水平。早期开展的血清HBsAg检测属于定性检测,HBsAg阳性表示存在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染,但不能判断HBV感染状态。血清HBsAg定量检测始于增敏化学发光技术的引入。

关键词：肝炎,乙型肝炎表面抗原,乙型诊断,鉴别

扬州地区2010年乙型肝炎表面抗原阳性率调查

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国际检验医学杂志 2012年第16期33卷 1972-1973页

作者：孙蓉鲁军江苏省苏北人民医院临床医学检测中心扬州225001

目的了解扬州地区的乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)和表面抗原(hepatitis Bvirus surface antigen,HBsAg)阳性率,评价乙肝疫苗策略效果。方法以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg,将受检者以不同的年龄、性别分组计算HB-sAg的阳性... 详细信息

目的了解扬州地区的乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)和表面抗原(hepatitis Bvirus surface antigen,HBsAg)阳性率,评价乙肝疫苗策略效果。方法以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg,将受检者以不同的年龄、性别分组计算HB-sAg的阳性率。结果 HBsAg的阳性率8.05%,41～50岁组的HBsAg的阳性率最高,达到10.38%,男性多年龄组HBsAg的阳性率高于女性且变化幅度较大。结论年龄和性别是乙肝感染的重要影响因素,注射乙肝疫苗的预防免疫在控制乙肝发挥了重大作用,乙肝的防治仍需重视。

关键词：肝炎病毒,乙型肝炎表面抗原,乙型酶联免疫吸附测定江苏

某高校乙型肝炎表面抗原阳性大学生健康教育及评估

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临床护理杂志 2009年第2期8卷 18-19页

作者：张平利肖万英毕剑鸣广东海洋大学校医院湛江524088

目的了解乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性大学生的心理健康状况,健康教育对学生心理健康的影响,为学校健康教育和心理咨询工作提供依据。方法2007年10月,采用心理测量工具对我校部分HBsAg阳性学生健康教育前后进行心理测量。结果HBsAg阳性... 详细信息

目的了解乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性大学生的心理健康状况,健康教育对学生心理健康的影响,为学校健康教育和心理咨询工作提供依据。方法2007年10月,采用心理测量工具对我校部分HBsAg阳性学生健康教育前后进行心理测量。结果HBsAg阳性大学生健康教育前强迫、人际敏感、抑郁、焦虑、恐怖、精神病性六项因子分高于全国常模(P<0.05,P<0.01);健康教育后人际敏感、抑郁、焦虑三项因子分高于全国常模(P<0.05,P<0.01);教育前后比较强迫和精神病性因子分有显著性差异(P<0.05,P<0.01);不同性别教育前精神病性、焦虑因子分有显著性差异(P<0.05)。结论HBsAg阳性大学生存在较多的心理健康问题,通过有效的健康教育方法可以改善心理状况。

关键词：肝炎表面抗原,乙型健康教育评估

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定量监测乙型肝炎表面抗原的临床意义

现代医药卫生 2014年第9期30卷 1336-1338页

作者：杨丹秦波重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400016

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）的外膜蛋白，主要存在于患者的血液及体液中，不具有传染性，但它在HBV感染中起主要作用，人感染HBV 4~7 d后，血清中出现HBsAg且常伴HBV存在，因此，在临床诊断中可作为HBV感... 详细信息

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）的外膜蛋白，主要存在于患者的血液及体液中，不具有传染性，但它在HBV感染中起主要作用，人感染HBV 4~7 d后，血清中出现HBsAg且常伴HBV存在，因此，在临床诊断中可作为HBV感染的标志。既往临床通过检测HBV标志物HBsAg、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、HBV DNA来判断HBV的复制情况，特别是在抗HBV感染治疗中HBeAg、HBV DNA作为评估和预测疗效及停药的重要指标，临床上认为HBsAg不能反映HBV复制程度及病情程度、预后等问题，但近年来越来越多的研究发现，HBsAg水平变化在HBV感染中与多个因素有关联，定量监测HBsAg在一定程度上也可作为病情严重程度、评估与预测疗效、停药及复发的一项参考因素。因此，定量监测HBsAg在HBV复制活动及抗HBV治疗等中的意义受到重视。

关键词：肝炎表面抗原,乙型肝炎病毒,乙型,慢性肝炎,乙型流行病学综述

苦参乌梅汤影响乙型肝炎病毒转基因小鼠乙型肝炎表面抗原表达的研究

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中国医药 2011年第2期6卷 129-130页

作者：郭朋刘燕玲孔伟郑蕊张引强中国中医科学院西苑医院肝病科北京100091

目的探讨苦参乌梅汤对HBV转基因小鼠HBsAg表达的影响，确定苦参乌梅汤的最佳组方。方法采用正交试验设计，以HBV转基因小鼠血清中HBsAg的含量为评定指标，考察苦参乌梅汤中苦参、乌梅不同比例，不同用量以及不同给药时间对HBsAg表达的... 详细信息

目的探讨苦参乌梅汤对HBV转基因小鼠HBsAg表达的影响，确定苦参乌梅汤的最佳组方。方法采用正交试验设计，以HBV转基因小鼠血清中HBsAg的含量为评定指标，考察苦参乌梅汤中苦参、乌梅不同比例，不同用量以及不同给药时间对HBsAg表达的影响。结果苦参乌梅汤按照苦参、乌梅1：1的比例，以9．0g／（kg·d）给药1周，对HBV转基因小鼠血清中HBsAg表达影响最为显著。其中，影响HBV转基因鼠HBsAg表达最主要的因素是苦参和乌梅的配比，差异具有统计学意义；日处方量和给药时间差异均不具有统计学意义。结论苦参乌梅汤最佳组方应为苦参、乌梅1：1的比例，以9．0g/（kg·d）给药1周。此组方能够明显降低HBV转基因小鼠血清中HBsAg的表达。

关键词：肝炎表面抗原,乙型正交试验小鼠,转基因苦参乌梅汤