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胚胎肝干细胞癌变实验(英文)

中国组织工程研究与临床康复 2009年第36期13卷 7119-7125页

作者：吴昌雄郑进方梁力建海南省人民医院肝胆外科海南省海口市570311 中山大学附属第一医院肝胆外科广东省广州市510080

背景:目前针对肝癌是起源于成熟肝细胞的去分化还是肝干细胞的成熟受阻这一问题仍存在争议。目的:观察胚胎肝干细胞癌变的可能性。设计、时间和地点:随机对照动物实验,于2006-01/12在中山大学动物实验中心完成。材料:6～8周龄BALB/c雌... 详细信息

背景:目前针对肝癌是起源于成熟肝细胞的去分化还是肝干细胞的成熟受阻这一问题仍存在争议。目的:观察胚胎肝干细胞癌变的可能性。设计、时间和地点:随机对照动物实验,于2006-01/12在中山大学动物实验中心完成。材料:6～8周龄BALB/c雌性小鼠70只,体质量20～25g,随机分为3组:空白对照组10只、模型组30只、实验组30只。另取孕14d胎鼠用于制备胚胎肝细胞。方法:3组小鼠麻醉后均行2/3肝切除。模型组诱导肝癌,在饮水中加入100μg/L二乙基亚硝胺,连续饮用12周。实验组在诱导肝癌的基础上行肝干细胞移植,即分离的胚胎肝细胞经肠系膜静脉注射到肝脏,每只小鼠移植1×106个细胞。空白对照组仅行肝干细胞移植,同时饮正常水。6个月后处死小鼠,制备肝脏标本,取肝癌结节做连续切片进行指标检测。主要观察指标:采用免疫组化或免疫荧光方法检测Y染色体性别决定区域蛋白、甲胎蛋白、胎盘型谷胱苷肽转移酶或细胞角蛋白19的表达,以分析肝癌的细胞来源和特征。结果:6个月后,实验组有8只小鼠成功诱癌,其中7只为肝细胞性肝癌,1只为胆管细胞性肝癌;模型组有7只小鼠成功诱癌,其中6只为肝细胞性肝癌,1只为胆管细胞性肝癌;两组诱癌率、肿瘤病理类型比较均无明显差异(P>0.05)。实验组17.1%的肝细胞癌结节Y染色体性别决定区域蛋白染色阳性,胆管细胞癌结节Y染色体性别决定区域蛋白染色均为阴性。肝细胞癌结节表达甲胎蛋白和谷胱苷肽转移酶,而不表达细胞角蛋白19;胆管细胞癌结节不表达甲胎蛋白和谷胱苷肽转移酶,而表达角蛋白19。结论:在诱导肝癌过程中移植的肝干细胞有癌变的潜能,并保持了胚胎肝干细胞未成熟的特征,仍表达谷胱苷肽转移酶和甲胎蛋白。

关键词：肝癌胚胎肝脏肝干细胞癌变

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肝干细胞与肝损伤修复的研究进展

科技通报 2017年第6期33卷 90-95页

作者：杨献光朱琳和春翠赵卫明徐存拴河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 河南省-科技部共建细胞分化国家重点实验室培育基地和河南省生物工程重点实验室河南新乡453007

目前新兴的一种治疗肝衰竭的方法就是肝干细胞的移植,移植入病体肝脏中的干细胞能够代替肝细胞进行增殖和分化,进而完成肝脏的修复。本文对当前已经被证实了的,能够在体内或者体外被诱导分化为肝细胞的肝源性的或非肝源性的肝干细胞进... 详细信息

目前新兴的一种治疗肝衰竭的方法就是肝干细胞的移植,移植入病体肝脏中的干细胞能够代替肝细胞进行增殖和分化,进而完成肝脏的修复。本文对当前已经被证实了的,能够在体内或者体外被诱导分化为肝细胞的肝源性的或非肝源性的肝干细胞进行了总结。通过对肝脏再生以及肝干细胞分化的研究的深入,必将为肝病的治疗带来曙光。

关键词：肝干细胞分化肝功能衰竭肝再生

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肝干细胞在肝再生中的作用

第二军医大学学报 2008年第6期29卷 694-698页

作者：李维卿余宏宇第二军医大学长征医院病理科上海200003

肝干细胞移植可能是治疗终末期肝病的重要途径之一,因而肝干细胞成为研究的热点。不同来源的肝干细胞具有强大的临床治疗潜能,但是在临床应用普遍推行之前,有许多研究工作需要进一步开展。本综述就肝干细胞的一些基本特性及其在肝脏损... 详细信息

肝干细胞移植可能是治疗终末期肝病的重要途径之一,因而肝干细胞成为研究的热点。不同来源的肝干细胞具有强大的临床治疗潜能,但是在临床应用普遍推行之前,有许多研究工作需要进一步开展。本综述就肝干细胞的一些基本特性及其在肝脏损伤后的肝再生作用展开讨论。

关键词：肝干细胞肝损伤肝再生

肝干细胞作为肝癌靶向基因治疗载体的体内实验研究

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中华医学杂志 2005年第36期85卷 2570-2572页

作者：钟晓刚何生殷舞邓靖宇陈波四川大学华西医院普外科

肝癌基因治疗作为现代分子药物治疗,为肝癌的治疗带来了新的前景,但目前肝癌基因治疗的研究结果尚不能令人满意,缺乏良好的基因转移载体是其重要原因[1],改进现有思路,提供一个靶向肝癌细胞的新的基因转移策略十分必要。

关键词：基因治疗载体肝癌细胞肝干细胞靶向实验研基因转移载体癌基因治疗体内药物治疗

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肝干细胞的研究进展

自然科学进展 2003年第1期13卷 15-20页

作者：何祖平汤越峰刘亚兵丰美福中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100080

肝干细胞存在与否的问题已经争论了几十年,近来的研究证明,在肝组织中存在肝干细胞。卵圆形细胞(oval cells)被认为是双潜能的肝干细胞,它分布于闰管、门管区和胆管树状分支,骨髓可能是卵圆形细胞的又一来源,提示肝脏和成年造血之间存... 详细信息

肝干细胞存在与否的问题已经争论了几十年,近来的研究证明,在肝组织中存在肝干细胞。卵圆形细胞(oval cells)被认为是双潜能的肝干细胞,它分布于闰管、门管区和胆管树状分支,骨髓可能是卵圆形细胞的又一来源,提示肝脏和成年造血之间存在紧密的联系,肝干细胞体外培养能大量扩增,并可诱导分化为肝细胞,这将为肝病的细胞移植、组织工程和基因治疗开辟新的途径。针对肝干细胞的存在依据、来源、鉴定、体外扩增和诱导分化等方面进行评述,并对肝干细胞的应用前景和今后的研究方向进行展望。

关键词：肝干细胞研究进展卵圆形细胞肝细胞体外扩增诱导分化细胞移植基因治疗

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肝干细胞与肝损伤的研究进展

世界华人消化杂志 2008年第15期16卷 1655-1660页

作者：姚鹏李绍祥中国人民解放军北京军区总医院全军肝病中心北京市100700

肝脏疾病是影响人类健康的严重疾病,目前尚没有令人满意的治疗措施,肝移植技术由于供体的数量、昂贵的价格等因素使其应用受到限制.近年来,越来越多的研究对干细胞进行了探索,研究表明,肝干细胞在一定条件下可以分化为肝实质细胞,并在... 详细信息

肝脏疾病是影响人类健康的严重疾病,目前尚没有令人满意的治疗措施,肝移植技术由于供体的数量、昂贵的价格等因素使其应用受到限制.近年来,越来越多的研究对干细胞进行了探索,研究表明,肝干细胞在一定条件下可以分化为肝实质细胞,并在肝损伤修复中起重要作用,本文就干细胞在肝脏疾病中的应用研究作一综述.

关键词：肝干细胞肝脏损伤肝脏疾病

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稳定表达绿色荧光的大鼠胚胎来源肝干细胞

中国组织工程研究与临床康复 2010年第23期14卷 4295-4298页

作者：杨欢叶章群陈志强王博涵姚炜敏华中科技大学同济医院泌尿外科湖北省武汉市430030

背景:胎肝来源肝干细胞作为细胞移植的供体来源具有优势,但有鉴于干细胞特质,其培养困难,传代后易分化生长;且现有干细胞示踪定位技术欠成熟,这些均是制约肝干细胞移植的重要因素。目的:观察原代肝干细胞电转pEGFP-Cl质粒是否能获得稳... 详细信息

背景:胎肝来源肝干细胞作为细胞移植的供体来源具有优势,但有鉴于干细胞特质,其培养困难,传代后易分化生长;且现有干细胞示踪定位技术欠成熟,这些均是制约肝干细胞移植的重要因素。目的:观察原代肝干细胞电转pEGFP-Cl质粒是否能获得稳定表达绿色荧光的肝干细胞。方法:联合机械分离和胶原酶消化法体外分离孕13.5dSD大鼠胚胎来源肝细胞,应用特异培养基培养分离细胞,随后通过半量换液法纯化出肝干细胞,采用细胞免疫荧光法对贴壁细胞进行鉴定,并用pEGFP-Cl质粒电转染原代肝干细胞后持续表达绿色荧光作示踪定位标志。结果与结论:原代培养的胎肝干细胞24h后可见细胞半贴壁,形态基本相同,呈圆形或卵圆形;第2天观察细胞为大小几乎一致的圆形;培养第3天出现一些由3,5个形态一致的细胞集落,细胞直径6～10μm;细胞集落不断增大,至第5天集落中细胞数量增至10个左右,集落由大小不等的致密圆形细胞组成,界限清楚;第8天后细胞呈上皮样铺展;第12天时,细胞变大呈煎蛋样摊开,形态不规则,细胞浆内可见颗粒,生长变得缓慢;传代后细胞扩增速度无明显变化,至第3代仍保持较均一的上皮细胞状;通过细胞免疫荧光法检测出培养第5天的贴壁细胞表达干细胞标志物CD34和胆管细胞标志物CK19;经筛选pEGFP-Cl质粒电转染后的原代肝干细胞能稳定表达绿色荧光。实验成功构建转染了绿色荧光蛋白的肝干细胞。

关键词：肝干细胞细胞培养 CD34 CK19 转染

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小鼠胚胎肝干细胞体外向肝样细胞的诱导分化

中国组织工程研究与临床康复 2009年第36期13卷 7103-7107页

作者：赵文秀尹震宇余强峰王效民厦门大学附属中山医院肝胆外科福建省厦门市361004 厦门大学消化疾病研究所福建省厦门市361004

背景:目前肝干细胞尚无特异性标志物,故其分离、培养尤其是纯化技术尚不成熟。目的:观察体外培养的小鼠胚胎肝干细胞生物学特性,及其向肝样细胞的诱导分化能力。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/06在厦门大学附属中山医院消... 详细信息

背景:目前肝干细胞尚无特异性标志物,故其分离、培养尤其是纯化技术尚不成熟。目的:观察体外培养的小鼠胚胎肝干细胞生物学特性,及其向肝样细胞的诱导分化能力。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/06在厦门大学附属中山医院消化中心实验室完成。材料:SPF级BALB/c胎鼠20只,13.5d龄,由厦门大学生命科学学院实验动物中心提供。方法:无菌操作取出胎鼠肝脏,用细胞刮梳理后用IV型胶原酶消化。取分离纯化后的第2代细胞进行免疫荧光染色。细胞培养到第3代时,分别用3mmol/L丁酸钠盐与0.1%DMSO进行诱导,5d后收集细胞进行Western blotting实验。主要观察指标:胚胎肝干细胞的形态及表面分子的表达,诱导后胚胎肝干细胞mRNA与蛋白水平的变化。结果:分离培养的细胞第2代即可得以纯化,呈克隆样生长,高表达白蛋白、甲胎蛋白、C-met及角蛋白19,且多数细胞共表达白蛋白与角蛋白19、C-met与角蛋白19,双阳性率约80%。细胞诱导后肝细胞标志物白蛋白表达明显增加,而作为不成熟肝细胞的经典标志物甲胎蛋白表达减少,同时干细胞标志物c-kitmRNA水平也明显下降,角蛋白19水平无明显变化。结论:胚胎肝干细胞具有双向分化潜能,经丁酸钠盐与DMSO诱导后可以向肝样细胞分化。

关键词：肝干细胞分化小鼠胚胎

PI3K/AKT途径在HGF介导肝干细胞抗凋亡调控中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第2期25卷 89-93页

作者：姚鹏杨晓明胡大荣北京军区总医院肝病研究所北京100700 军事医学科学院放射研究所

目的　研究PI3K(磷脂酰肌醇 3激酶 )和MAPK(丝裂原活化蛋白激酶 )途径如何参与肝干细胞的凋亡调控 ;探讨PI3K和MAPK信号途径在HGF介导的抗凋亡信号中的调控。方法　用大鼠肝干细胞系WBF 344细胞进行实验 ;用流式细胞仪检测细胞及DNA凝... 详细信息

目的　研究PI3K(磷脂酰肌醇 3激酶 )和MAPK(丝裂原活化蛋白激酶 )途径如何参与肝干细胞的凋亡调控 ;探讨PI3K和MAPK信号途径在HGF介导的抗凋亡信号中的调控。方法　用大鼠肝干细胞系WBF 344细胞进行实验 ;用流式细胞仪检测细胞及DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡 ;用Westernblot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达。结果　发现TNF α对ActD致敏的WBF 344细胞能诱导凋亡 ,并且这种细胞凋亡呈现剂量效应关系 ;HGF对ActD TNF α诱导WBF 344细胞凋亡具有保护作用 ,并且这种保护作用呈剂量效应关系 ;Westernblot结果显示 ,在WB细胞 ,HGF确实能够激活ERK、p38MAPK、PI3K AKT信号转导途径 ;进一步用特异的抑制剂阻断ERK及p38MAPK途径后 ,并不能改变HGF对TNF α诱导凋亡的拮抗作用 ,而阻断PI3K AKT途径后 ,HGF的抗凋亡作用被抑制。结论　TNF α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡 ,而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用 ;ERK1 2和p38MAPK途径的激活并不参与HGF介导的抗凋亡作用 ,HGF的抗凋亡作用是通过PI3K途径转导的。

关键词： HGF 凋亡调控肝干细胞 AKT 介导流式细胞仪检测 Western 丝裂原活化蛋白激酶磷脂酰肌醇3激酶剂量效应关系 MAPK途径 TNF-α 抗凋亡作用 DNA凝胶电泳 p38MAPK 细胞凋亡信号转导途径 ERK1/2 PI3K途径 blot 诱导凋亡