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ALR基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其在肝癌细胞中对ALR表达的抑制

重庆医科大学学报 2014年第7期39卷 956-959页

作者：郭虹利刘杞郭晖杨超孙航吴传新重庆医科大学附属第二院病毒性肝炎研究所重庆400010 重庆医科大学附属第二院肝胆外科重庆400010

目的:构建肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,并检测其对人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因表达的干扰效率。方法:针对ALR基因RNAi的有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切线性化的GV118慢病毒载体连接产生LV-ALR-shRNA重组慢病毒载体,经转化感受态细胞后筛选出阳性克隆,并进行测序鉴定。用293T细胞包装产生慢病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度。再将包装浓缩后的慢病毒转染人肝癌细胞株HepG2和QGY,应用Real-time PCR和Western blot方法检测HepG2和QGY细胞中ALR基因mRNA和蛋白的表达情况。结果:酶切鉴定证实成功构建了针对人ALR基因的RNAi慢病毒载体,包装并浓缩慢病毒,病毒滴度为8E+8TU/ml。将病毒感染人肝癌细胞株HepG2和QGY后,2种细胞的干扰组ALR的mRNA表达水平较阴性对照组及空白对照组均明显下降(HepG2细胞,P干扰组vs.阴性病毒对照组=0.004,P干扰组vs.空白对照组=0.001;QGY细胞,P干扰组vs.阴性病毒对照组=0.005,P干扰组vs.空白对照组=0.001),同样,干扰组ALR在蛋白水平的表达也明显减降低。结论:成功构建ALR基因RNAi慢病毒载体,该载体能有效干扰人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因的表达。

关键词： RNA干扰慢病毒载体肝再生增强因子基因

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ALR siRNA慢病毒载体最佳干扰序列的筛选及构建

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临床检验杂志 2014年第4期32卷 267-271页

作者：郭虹利吴传新郭晖刘杞杨超孙航重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所重庆400010 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科重庆400010

目的筛选并构建肝再生增强因子(ALR)基因的最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,为研究ALR基因表达下调后对肝癌细胞生物学特性的影响提供依据。方法针对ALR基因序列设计并合成4个siRNA靶点,酶切连接GV118-GFP载体,PCR筛... 详细信息

目的筛选并构建肝再生增强因子(ALR)基因的最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,为研究ALR基因表达下调后对肝癌细胞生物学特性的影响提供依据。方法针对ALR基因序列设计并合成4个siRNA靶点,酶切连接GV118-GFP载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定;在包含ALR基因的质粒中以PCR法扩增出ALR基因,克隆至慢病毒载体GV143,构建ALR基因的过表达质粒,将RNAi重组慢病毒载体和ALR的基因表达质粒共转染293T细胞,用western blot检测其对目的基因ALR的敲减效率。结果酶切鉴定证实成功构建了ALR RNAi慢病毒载体及ALR基因过表达载体。不同浓度干扰质粒(0.4μg和0.8μg)的western blot结果显示,相较于阴性对照组,KD1组ALR蛋白的表达水平(0.51±0.02,0.36±0.09)、KD2组ALR蛋白的表达水平(0.65±0.04,0.49±0.02)、KD3组ALR蛋白的表达水平(0.62±0.07,0.52±0.02)均降低(P均基因的最佳RNAi重组慢病毒载体,为后续实验奠定基础。

关键词：肝再生增强因子基因 RNA干扰慢病毒载体

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绵羊乳腺特异表达hALR基因载体的构建

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2003年第6期34卷 653-656页

作者：马玉珍扈廷茂扈会平陈明杰苏慧敏内蒙古大学生命科学院呼和浩特010021

以绵羊β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,BLG)基因5'端0.8kb片段,作为目的基因人肝再生增强因子(Humanaugmenterofliverregeneration,hALR)乳腺特异表达启动子,人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus,CMV)启动子为绿色荧光蛋白基因(EnhancedGreenfluores-cenceprotein,EGFP)的启动子,构建了ALR基因乳腺特异表达而EGFP基因非组织特异性真核表达载体.这将为利用乳腺生物反应器生产人肝再生增强因子转基因动物及转基因早期胚胎鉴定奠定基础.

关键词：绿色荧光蛋白基因 β-乳球蛋白基因肝再生增强因子基因表达载体乳腺

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