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血小板源性生长因子诱导下人抗原R对气道平滑肌细胞内转化生长因子β1表达的影响

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中华医学杂志 2016年第38期96卷 3078-3082页

作者：王娜闫迪顾宪民刘毅姜淑娟山东大学附属省立医院呼吸内科济南250021

目的探讨血小板源性生长因子（PDGF）诱导下人抗原R（HuR）对气道平滑肌细胞（ASM）内转化生长因子β1（TGF－β1）表达的影响。方法体外培养ASM以PDGF（20 μg/L）分别在0、6、12和24 h刺激ASM以诱导哮喘状态。实时荧光定量PCR检测各... 详细信息

目的探讨血小板源性生长因子（PDGF）诱导下人抗原R（HuR）对气道平滑肌细胞（ASM）内转化生长因子β1（TGF－β1）表达的影响。方法体外培养ASM以PDGF（20 μg/L）分别在0、6、12和24 h刺激ASM以诱导哮喘状态。实时荧光定量PCR检测各时间点细胞内HuR、TGF－β1 mRNA水平，Western印迹法检测各时间点细胞内HuR、TGF－β1的蛋白水平。利用RNA干扰技术特异性阻断HuR表达，Western印迹法检测干扰组和对照组HuR及TGF－β1在PDGF刺激0、6和12 h的表达水平。酶联免疫吸附法检测干扰组和对照组在PDGF刺激0、6和12 h后，细胞培养上清中TGF－β1的蛋白水平。将细胞依次分为对照组、对照＋PDGF 6 h组、干扰组及干扰＋PDGF 6 h组，然后各组依次加入放线菌素D（10 mg/L）刺激0、4、8和12 h，检测各组TGF－β1 mRNA的半衰期。结果PDGF刺激下HuR表达呈现明显的时间依赖性，0、6、12和24 h细胞内HuR mRNA及蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.35±0.14、1.73±0.17、2.07±0.10及0.51±0.10、0.67±0.05、0.83±0.07、0.95±0.02（均P〈0.05）。TGF－β1的mRNA及蛋白水平也呈时间依赖性，0、6、12和24 h细胞内TGF－β1 mRNA及蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.27±0.06、1.60±0.10、1.87±0.10及0.72±0.09、0.87±0.07、1.13±0.12、1.33±0.05（6与12 h、12与24 h两两比较，均P〈0.05）。PDGF刺激0 h，干扰组与对照组HuR表达差异无统计学意义（P〉0.05），PDGF刺激12 h，干扰组HuR表达较对照组降低了21.9%（P〈0.05）。对照组0、6、12 h TGF－β1蛋白相对表达量分别为0.70±0.05、0.89±0.06、1.06±0.05，而干扰组0、6、12 h TGF－β1蛋白相对表达量分别为0.67±0.09、0.77±0.03、0.89±0.05（与对照组相应时间点比较，均P〈0.05）。细胞培养上清TGF－β1含量对照组0、6、12 h依次为（773.33±16.32）、（877.97±16.03）、（3 060.34±82.53）ng/L，而干扰组0、6、12 h依次为（277.33±9.93）、（407.77±7.14）、（828.05±11.67）ng/L（与对照组相应时间点比较，均P〈0.05）。放线菌素D刺激细胞，干扰组TGF－β1的RNA半衰期与干扰＋PDGF 6 h组比较差异无统计学意义（P〉0.05），与对照组及对照＋PDGF 6 h组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论PDGF可上调ASM内TGF－β1表达，HuR通过增加mRNA稳定性参与PDGF诱导的哮喘状态下TGF－β1的表达过程。

关键词：肌细胞平滑肌气管人抗原R 转化生长因子β1 血小板源生长因子

血栓素A2合成酶抑制剂对低氧猪肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

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中华医学杂志 2011年第4期91卷 277-281页

作者：丁毅鹏姚红霞何海武石慧芳林莉海南省人民医院急救中心海口 570102 海南省农垦总医院呼吸内科

目的探讨血栓素A2（TXA2）合成酶抑制剂奥扎格雷钠对低氧肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐微量比色法、免疫组化法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法观察TXA2激动剂u46619及TXA2合成酶抑制剂奥扎格... 详细信息

目的探讨血栓素A2（TXA2）合成酶抑制剂奥扎格雷钠对低氧肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐微量比色法、免疫组化法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法观察TXA2激动剂u46619及TXA2合成酶抑制剂奥扎格雷钠对PASMC增殖及凋亡和对反映细胞增殖状态的重要标记物Ki67表达的影响。结果U46619对常氧和低氧PASMC的增殖和低氧PASMC中Ki67的表达均有明显促进作用，并可明显抑制PASMC的凋亡；奥扎格雷钠对常氧PASMC的增殖无明显影响，但对低氧PASMC的增殖和Ki67的表达均有明显抑制作用，可促进低氧PASMC的凋亡；奥扎格雷钠可明显拮抗u46619在常氧和低氧条件下对PASMC的促增殖和Ki67表达的作用，以及u46619抑制低氧PASMC的凋亡的作用。结论奥扎格雷钠有可能通过抑制低氧PASMC的增殖及血管重塑、促进凋亡，从而对低氧性肺动脉高压起治疗作用。

关键词：受体血栓烷A2 前列腺素H2 肺动脉肌细胞平滑肌细胞增殖细胞凋亡

Sirt1抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞炎症反应

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中华医学杂志 2017年第21期97卷 1659-1663页

作者：杨蓉朱旭段智娟李园园王艳萍杨克云南昆明云南省武警总队医院心内科 650111 上海交通大学医学院附属瑞金医院心内科

目的本研究探讨Sirt1调控平滑肌细胞（SMCs）炎症反应的相关可能机制。方法收集人及小鼠动脉粥样硬化斑块组织检测Sirt1表达情况。过表达Sirt1后，通过检测细胞炎症因子分泌及活性氧（ROS）累积观察其对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱... 详细信息

目的本研究探讨Sirt1调控平滑肌细胞（SMCs）炎症反应的相关可能机制。方法收集人及小鼠动脉粥样硬化斑块组织检测Sirt1表达情况。过表达Sirt1后，通过检测细胞炎症因子分泌及活性氧（ROS）累积观察其对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导SMCs炎症的效应。结果在人斑块组织中，平滑肌层Sirt1表达下降，而在ApoE敲除小鼠动脉粥样硬化斑块组织中，平滑肌层Sirt1表达显著性下降约5倍（P〈0.05）。oxLDL刺激可诱导SMCs炎症因子白细胞介素（IL）－1β、肿瘤坏死因子（TNF）－α、单核细胞化学趋化蛋白（MCP）－1和基质金属蛋白酶（MMP）－2表达量显著性升高（均P〈0.05），同时诱导ROS累积增加。但过表达Sirt1后则显著性抑制这些效应。结论 oxLDL刺激SMCs后所造成的炎症反应及ROS的升高，受到Sirt1表达的调控。因此，Sirt1是动脉粥样硬化发生发展过程中调控SMCs炎症反应的相关分子。

关键词：肌细胞平滑肌脂蛋白类 LDL 炎症

子宫腺肌病子宫平滑肌细胞中钾离子通道mRNA的表达及雌、孕激素对其的影响

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中华妇产科杂志 2015年第11期50卷 843-847页

作者：史精华金力冷金花郎景和中国医学科学院北京协和医院妇产科 100730

目的探索体外培养子宫腺肌病（AM）子宫平滑肌细胞钾离子通道的表达情况及雌、孕激素对其的调节作用。方法选择2009年9月至2010年3月在北京协和医院行手术治疗的AM患者22例（AM组），以同期宫颈上皮内瘤变Ⅲ级切除子宫者12例作为对照组... 详细信息

目的探索体外培养子宫腺肌病（AM）子宫平滑肌细胞钾离子通道的表达情况及雌、孕激素对其的调节作用。方法选择2009年9月至2010年3月在北京协和医院行手术治疗的AM患者22例（AM组），以同期宫颈上皮内瘤变Ⅲ级切除子宫者12例作为对照组，应用逆转录PCR技术检测体外培养的子宫平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道仪亚基（BKCaα）、电压依赖性钾离子通道4．3（Kv4．3）mRNA的表达及对不同浓度雌、孕激素作用的反应性。结果AM组子宫平滑肌细胞BKCa仪和Kv4．3mRNA的表达量（分别为4．43±2．05、4．52±1．97）显著高于对照组（分别为0．83±0．25、0．86±0．19），分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。10．0nmol／L17β-雌二醇使AM组子宫平滑肌细胞BKCa仪mRNA表达量（0．56±0．27）显著下降，与未用药（1．01±0．35）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；0．1、1．0nmol／L浓度的1713．雌二醇使对照组子宫平滑肌细胞Kv4．3mRNA表达量明显下降（分别为0．17±0．10、0．13±0．08），与未用药（0．55±0．29）比较，差异均有统计学意义（P〈0.05）。0.1μmol／L孕酮使对照组子宫平滑肌细胞BKCadmRNA表达量（0．44±0．24）和Kv4．3mRNA表达量（1．29±0．51）明显升高（P〈0.05）；而AM组使用不同浓度孕酮后BKCaα和Kv4．3mRNA的表达量均无变化（P〉0.05）。结论AM子宫平滑肌细胞存在钾离子通道的异常表达，其受高浓度雌激素的调节并可能存在孕激素抵抗。

关键词：子宫内膜异位症肌细胞平滑肌钾通道雌激素类孕酮体外研究细胞培养的子宫腺肌病

降钙素基因相关肽和受体活性修饰蛋白1对血管平滑肌细胞迁移的影响及机制

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中华心血管病杂志 2015年第6期43卷 537-541页

作者：龙仙萍崔璨陈攀科汪松王冬梅许官学姚小剑石蓓遵义医学院第一附属医院心内科 563003 遵义医学院第一附属医院急诊科 563003 加拿大曼尼托巴大学医学院微生物系

目的探讨转染降钙素基因相关肽（CGRP）的骨髓间充质干细胞（MSC）对血管平滑肌细胞（VSMC）迁移的影响,及活性修饰蛋白1（RAMP1）在其中的作用和机制.方法分离、培养大鼠MSC和VSMC,分别应用携带CGRP和RAMP1的慢病毒载体转染MSC和VSMC... 详细信息

目的探讨转染降钙素基因相关肽（CGRP）的骨髓间充质干细胞（MSC）对血管平滑肌细胞（VSMC）迁移的影响,及活性修饰蛋白1（RAMP1）在其中的作用和机制.方法分离、培养大鼠MSC和VSMC,分别应用携带CGRP和RAMP1的慢病毒载体转染MSC和VSMC,然后将MSC与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的VSMC共培养.实验分为5组：（1） AngⅡ对照组（MSC＋ VSMC＋ AngⅡ）;（2） MSCCGRP＋组（MSCCGRP＋＋ VSMC＋ AngⅡ）;（3）MSCCGRP＋ RAMP1 组（MSCCGRP＋＋ VSMCRAMP1-＋AngⅡ）;（4） MSCCGRP＋ RAMP1＋组：（MSCCGRP＋＋ VSMCRAMP1＋＋ AngⅡ）;（5） RAMP1＋（MSC＋VSMCRAMP1＋＋ AngⅡ）.应用Transwell实验评价VSMC的迁移能力,Western blot检测蛋白的表达水平.结果 Transwell实验结果显示,MSCCGRP＋组VSMC迁移数量[（50.8±2.6）个]少于AngⅡ对照组[（71.4±2.3）个],而多于MSCCGRP＋ RAMP1＋组[（30.4±3.0）个]（P均＜0.05）;MSCCGRP＋ RAMP1-组VSMC迁移数量[（69.0±5.6）个]多于MSCCGRP＋ RAMP1＋组（P＜0.05）,而与AngⅡ对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RAMP1＋组VSMC迁移数量[（71.6±3.4）个]与AngⅡ对照组差异也无统计学意义（P＞0.05）.Western blot结果显示,MSCCGRP＋组磷酸化核因子-κB P65（P-P65）蛋白表达水平低于AngⅡ对照组（0.475±0.022比0.642±0.035,P＜0.05）;MSCCGRP＋ RAMP1-组P-P65蛋白表达水平高于MSCCGRP＋ RAMP1＋组（0.670±0.030比0.373 ±0.041,P＜0.05）,而与AngⅡ对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RAMP1＋组P-P65蛋白表达量（0.643 ±0.039）与AngⅡ对照组比较差异也无统计学意义（P＞0.05）.结论 RAMP1对CGRP抑制VSMC迁移起促进作用,RAMP1-CGRP通过核因子-κB信号通路抑制VSMC迁移.

关键词：降钙素基因相关肽肌细胞平滑肌干细胞

急性缺氧对豚鼠肠系膜动脉平滑肌细胞电生理特性的影响

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中华医学杂志 2011年第46期91卷 3289-3292页

作者：马克涛李丽关兵才李新芝朱贺赵磊司军强石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆维吾尔自治区832002 河北医科大学药理学教研室

目的观察急性缺氧对豚鼠肠系膜动脉平滑肌细胞电生理特性的影响.方法直径＜100 μm的豚鼠肠系膜动脉进一步去除结缔组织后,应用全细胞膜片钳技术观察急性缺氧对微动脉段上平滑肌细胞膜电流、膜电位、膜电容、膜电导或膜电阻的影响.结... 详细信息

目的观察急性缺氧对豚鼠肠系膜动脉平滑肌细胞电生理特性的影响.方法直径＜100 μm的豚鼠肠系膜动脉进一步去除结缔组织后,应用全细胞膜片钳技术观察急性缺氧对微动脉段上平滑肌细胞膜电流、膜电位、膜电容、膜电导或膜电阻的影响.结果当钳制电压为-40 mV时,急性缺氧引起一个反应幅度（76 ±23）pA的外向电流,细胞静息膜电位从（-22.5±1.2）mV超级化到（-42.0 ±2.8）mV（P ＜0.01）.急性缺氧可以电压依赖地增强细胞外向电流,且主要增强0～＋40 mV电压区间的电流,激活电流幅度0 mV时从（140±18）pA增加到（660±124）pA（P ＜0.01）,＋20 mV时从（282±23）pA增加到（1120±186）pA（P ＜0.01）,＋40 mV时从（423±40）pA增加到（1800±275）pA（P ＜0.01）.背景灌流1 mmol/L大电导Ca2＋激活K＋通道（BKca）阻断剂四乙胺后,这一增强作用显著减弱.急性缺氧使细胞膜电阻从（446 ±55）MΩ增加到（2187±290）MΩ（P＜0.01）,膜电容从（184.3±75.0）pF减少至（17.6±2.2）pF（P＜0.01）.联合应用30 μmoL/L缝隙连接阻断剂18β-甘草次酸和10 mmol/L四乙胺后,急性缺氧对细胞膜电流的影响基本消失.结论急性缺氧通过激活肠系膜动脉平滑肌细胞膜上BKca通道,引起K＋外流,细胞超极化,血管舒张,保证肠系膜微循环的血液供应.同时通过抑制细胞间缝隙连接使其产生的伤害信息局限化.

关键词：细胞缺氧肌细胞平滑肌肠系膜动脉电生理学

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原代乳鼠心肌细胞培养方法的改进

中华心血管病杂志 2014年第1期42卷 53-56页

作者：陶静马依彤李晓梅杨毅宁马翔陈邦党刘芬陈小翠盖敏涛新疆医科大学第一附属医院心脏中心乌鲁木齐830054 新疆心血管病研究所重点实验室

目的通过对传统乳鼠心肌细胞体外培养的条件、方法进行改进，得到纯度高、活力好、结构功能完整的心肌细胞。方法改进心室肌组织剪切方法，分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织，严格要求所需溶液pH值，差速贴壁法和化学抑制法... 详细信息

目的通过对传统乳鼠心肌细胞体外培养的条件、方法进行改进，得到纯度高、活力好、结构功能完整的心肌细胞。方法改进心室肌组织剪切方法，分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织，严格要求所需溶液pH值，差速贴壁法和化学抑制法相结合纯化心肌细胞。结果心肌细胞12h后开始贴壁生长，24h出现单个细胞自发性搏动，48h部分心肌细胞间形成交联，72h心肌细胞黏合成簇，96h后细胞伪足相互接触交织成密集的网，形成放射状排列的细胞簇，可见岛屿样搏动。细胞存活率、纯度均达98％以上。结论此种方法培养的心肌细胞纯度高、活力好、结构及功能完整，是一种可靠的原代乳鼠心肌细胞培养方法。

关键词：肌细胞心脏细胞培养技术

微管干预剂对大鼠缺氧心肌细胞能量生成的影响

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中华烧伤杂志 2007年第3期23卷 164-167页

作者：滕苗黄跃生郑霁党永明张琼第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的了解缺氧条件下微管干预剂对大鼠心肌细胞能量生成的影响。方法常规分离、培养大鼠心肌细胞,分为单纯缺氧组、缺氧+秋水仙碱(微管解聚剂)组及缺氧+5、10、15 mmol/L紫杉醇(微管稳定剂)组。每组细胞加入刺激剂后,缺氧培养0.5、1.0、... 详细信息

目的了解缺氧条件下微管干预剂对大鼠心肌细胞能量生成的影响。方法常规分离、培养大鼠心肌细胞,分为单纯缺氧组、缺氧+秋水仙碱(微管解聚剂)组及缺氧+5、10、15 mmol/L紫杉醇(微管稳定剂)组。每组细胞加入刺激剂后,缺氧培养0.5、1.0、3.0、6.0、12.0、24.0 h。采用锥虫蓝染色检测细胞死亡率,常规比色法检测细胞肌酸激酶(CK)活性,高效液相色谱法检测细胞腺苷三磷酸(ATP)及腺苷二磷酸(ADP)含量。结果(1)缺氧+秋水仙碱组及缺氧+15 mmol/L紫杉醇组细胞培养1.0～24.0 h死亡率均高于单纯缺氧组(P细胞]高于单纯缺氧组[(42.9±5.8)、(29.5±1.8)、(18.2±0.9)、(14.1±0.7)μg/10~6个细胞,P肌细胞ATP含量锐减。适宜浓度的微管稳定剂在缺氧早期可促进心肌细胞能量生成,对心肌具有保护作用。

关键词：肌细胞心脏微管缺氧能量代谢秋水仙碱紫杉醇

SHH信号通路在血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖中的作用

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中华医学杂志 2013年第19期93卷 1490-1493页

作者：李凤贺赵渝王学虎时德傅麒宁刘洪重庆医科大学附属第一医院血管外科重庆400016

目的探讨sonic hedgehog（SHH）信号通路在血小板源性生长因子（PDGF）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖中的作用。方法体外培养人大隐静脉VSMC，施加PDGF刺激后应用激光共聚焦显微成像及蛋白印迹（Western blot）检测SHH信号通路分子m... 详细信息

目的探讨sonic hedgehog（SHH）信号通路在血小板源性生长因子（PDGF）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖中的作用。方法体外培养人大隐静脉VSMC，施加PDGF刺激后应用激光共聚焦显微成像及蛋白印迹（Western blot）检测SHH信号通路分子mRNA的表达变化；分别应用慢病毒介导的RNAi技术及SHH信号通路特异抑制剂cyclopamine阻断SHH通路后，用BrdU掺入法联合Ki-67染色评价细胞增殖情况。结果激光共聚焦显微成像发现与对照组相比，PDGF刺激能够显著诱导VSMC中SHH信号通路蛋白shh，Patehedl及Gli2的表达；同时，蛋白印迹也显示PDGF刺激能够明显增加SHH信号通路分子的表达；Gli2-siRNA慢病毒载体能够抑制Gli2的表达，Gli2-siRNA组BrdU掺入量为对照组的（49±0．6）％；与对照组相比，***组Ki-67阳性细胞数也明显减少；蛋白印迹显示SHH信号通路特异抑制剂cyclopamine能够抑制SHH信号通路下游转录因子Gli2的表达；cyclopamine组Brdu掺入量为对照组的（52±0．3）％，与对照组相比，cyclopamine组Ki-67阳性细胞数明显减少。结论SHH信号通路在PDGF诱导的VSMC增殖中有重要作用。

关键词：血小板源性生长因子肌细胞平滑肌增殖 sonic hedgehog