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肿瘤坏死因子受体相关蛋白1对大鼠缺氧心肌细胞保护作用的机制

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中华烧伤杂志 2016年第12期32卷 744-751页

作者：向飞张东霞马思远黄跃生第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1（TRAP1）对大鼠缺氧心肌细胞保护作用的机制。方法取1～3d龄SD大鼠乳鼠，分离培养心肌细胞，用于以下实验。（1）取细胞，按随机数字表法（分组方法下同）分为TRAP1组和对照组，提取细胞总蛋白。TRAP... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1（TRAP1）对大鼠缺氧心肌细胞保护作用的机制。方法取1～3d龄SD大鼠乳鼠，分离培养心肌细胞，用于以下实验。（1）取细胞，按随机数字表法（分组方法下同）分为TRAP1组和对照组，提取细胞总蛋白。TRAP1组细胞总蛋白加入小鼠抗大鼠TRAP1单克隆一抗，对照组细胞总蛋白加入小鼠来源的同型IgG，免疫共沉淀法和蛋白质谱分析检测TRAP1可能作用的蛋白。（2）取细胞，分为常氧空白对照组、常氧＋TRAP1干扰对照组、常氧＋TRAP1干扰组、常氧＋TRAP1过表达对照组、常氧＋TRAP1过表达组，每组1孔。常氧空白对照组细胞常规培养，后4组细胞分别加入TRAP1RNA干扰空病毒载体、TRAP1RNA干扰腺病毒载体、TRAP1过表达空病毒载体、TRAP1过表达腺病毒载体。另取细胞，分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1干扰组、缺氧＋TRAP1过表达对照组、缺氧＋TRAP1过表达组，每组1孔。各缺氧组细胞同前对应的常氧组细胞处理后，缺氧6h。实时荧光定量RT—PCR检测各组细胞中细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ（COXⅡ）mRNA表达。本实验重复3次。（3）取细胞，分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1过表达对照组、缺氧＋TRAP1过表达组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰对照组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰组，每组3孔。前4组细胞的处理同（2），后2组细胞分别加入COXⅡRNA干扰空病毒载体、COXⅡRNA干扰腺病毒载体转染后，再分别加入TRAP1过表达腺病毒载体。细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性，碘化丙啶和Hoechst33342染色检测细胞死亡率。另取细胞，分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1干扰组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达对照组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达组，每组3孔，前4组细胞的处理同（2），后2组细胞均加入TRAP1RNA干扰腺病毒载体转染后，再分别加入COXⅡ过表达空病毒载体、COXⅡ过表达腺病毒载体，同前检测细胞增殖活性和死亡率。本实验重复3次。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果（1）TRAP1组细胞有TRAP1表达，对照组细胞未见TRAPI表达。TRAP1可能作用的3个蛋白是角蛋白、COXⅡ和预测分子量为13×10^3的未知蛋白。（2）与常氧空白对照组比较，常氧＋TRAP1干扰对照组、常氧＋TRAP1过表达对照组细胞COXⅡmRNA表达量无明显变化（P值均大于0．05），常氧＋TRAP1干扰组细胞COXⅡmRNA表达量明显降低（P〈0．01），常氧＋TRAP1过表达组细胞COXⅡmRNA表达量明显升高（P〈0．01）。缺氧空白对照组细胞COXⅡmRNA表达量较常氧空白对照组明显降低（P〈0．01）。与缺氧空白对照组比较，缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1过表达对照组细胞COXⅡmRNA表达量无明显变化（P值均大于0．05），缺氧＋TRAP1干扰组细胞COXⅡmRNA表达量明显下降（P〈0．01），缺氧＋TRAP1过表达组细胞COXⅡmRNA表达量明显升高（P〈0．01）。（3）常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1过表达对照组、缺氧＋TRAP1过表达组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰对照组、缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰组细胞增殖活性分别为0．498±0．022、0．303±0．018、0．313±0．032、0．456±0．03l、0．448±0．034、0．335±0．026，细胞死亡率分另0为（4．7±1．5）％、（24．7±3．1）％、（26．0±2．7）％、（13．3±2．5）％、（12．7±2．1）％、（21．0±1．7）％。与常氧空白对照组比较，缺氧空白对照组细胞增殖活性降低、细胞死亡率增加（P值均小于0．01）。与缺氧空白对照组比较，缺氧＋TRAP1过表达对照组细胞增殖活性、细胞死亡率均无明显变化（P值均大于0．05），缺氧＋TRAP1过表达组细胞增殖活性升高、细胞死亡率降低（P值均小于0．01）。与缺氧＋TRAP1过表达组比较，缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰对照组细胞增殖活性、细胞死亡率均无明显变化（P值均大于0．05），缺氧＋TRAP1过表达＋COXⅡ干扰组细胞增殖活性降低、细胞死亡率增加（P值均小于0．01）。（4）常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧＋TRAP1干扰对照组、缺氧＋TRAP1干扰组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXII过表达对照组、缺氧＋TRAP1干扰＋COXⅡ过表达组细胞增殖活性分别为0．444±0．025、0．275±0．016、0．283±0．021、0．150±0．009、

关键词：肌细胞心脏缺氧细胞增殖细胞死亡肿瘤坏死因子受体相关蛋白1 细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ

沉默维生素D受体的表达对大鼠气道平滑肌细胞增殖及核因子-κB活化的影响

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中华结核和呼吸杂志 2021年第6期44卷 537-542页

作者：邹淑梅郑曦赖国祥余宗阳宋颖芳联勤保障部队第九〇〇医院厦门大学附属东方医院福建医科大学福总临床医学院呼吸内科福州350025

目的研究沉默维生素D受体(VDR)基因表达对气道平滑肌细胞(ASMC)增殖能力的影响,并初步探讨核因子-κB(NF-κB)在其中的作用。方法构建特异性靶向大鼠VDR基因的RNA干扰慢病毒载体。实验分组为空白组、空载体组和干扰组。嘌呤霉素抗性筛... 详细信息

目的研究沉默维生素D受体(VDR)基因表达对气道平滑肌细胞(ASMC)增殖能力的影响,并初步探讨核因子-κB(NF-κB)在其中的作用。方法构建特异性靶向大鼠VDR基因的RNA干扰慢病毒载体。实验分组为空白组、空载体组和干扰组。嘌呤霉素抗性筛选后建立VDR基因稳定沉默的大鼠ASMC细胞株。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞生长周期;免疫荧光双标染色法检测NF-κB p65的核易位情况;双荧光素酶报告基因法检测NF-κB依赖的转录活性,Western blotting法检测IκBα及p-IκBα蛋白的表达水平;放线菌素D处理细胞,检测IκBαmRNA的稳定性。利用SPSS 23.0统计软件,采用多组间单因素方差(One-Way ANOVA)分析;组间两两比较采用SNK检验。结果(1)与空白组与空载体组相比,干扰组ASMC的A_(492 nm)值及G_(2)/M期细胞比例显著高(P细胞比例明显低(P细胞增殖,这一作用与其活化ASMC中的NF-κB信号通路有关。

关键词：维生素D受体,骨化三醇肌细胞肌,平滑细胞增殖核因子-κB

胰高血糖素样肽-1受体激动剂改善高糖和缺氧／复氧致心肌细胞损伤的实验研究

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中华内科杂志 2016年第4期55卷 311-316页

作者：刘玫梅沈云峰陈超赖晓阳张美英余戎南昌大学第二附属医院内分泌代谢科江西省内分泌代谢研究所 330006

目的探讨胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂预处理对高糖培养下缺氧／复氧引起心肌细胞损伤的影响及机制。方法将离体培养的H9C2心肌细胞分为正常葡萄糖（5mmol／L，N组）、高糖（25mmol／L，G组）、高糖＋利拉鲁肽预处理（100nmol/L... 详细信息

目的探讨胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂预处理对高糖培养下缺氧／复氧引起心肌细胞损伤的影响及机制。方法将离体培养的H9C2心肌细胞分为正常葡萄糖（5mmol／L，N组）、高糖（25mmol／L，G组）、高糖＋利拉鲁肽预处理（100nmol/L，L组）、高糖＋利拉鲁肽＋wortmannin预处理（20nmol/L，W组）4组。H9C2细胞行缺氧／复氧处理。TUNEL法检测细胞凋亡，酶法测定细胞培养液一氧化氮合酶（eNOS）、一氧化氮（NO）及活性氧（ROS）水平，免疫印迹法测定磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-P13K）、磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、蛋白激酶B（Akt）、Bcl-2及caspase-3蛋白表达。结果缺氧／复氧后，G组心肌细胞凋亡率高于N组[（15．79±3．92）％比（9．74±1．14）％，P=0．028]，ROS水平也高于N组[（489．63±21．01）U／ml比（338．50±43．60）U／ml，P〈0．001]；caspase-3表达G组高于N组（1.87±0．03比1．15±0．04，P〈0．001），而Bel-2水平G组低于N组（1．79±0．06比1．88±0．03，P=0．047）；L组的凋亡率、ROS水平、caspase-3表达均低于G组，Bcl-2水平高于G组，且与G组比较，L组p-P13K／P13K（0．87±0．07比0．59±0．09，P=0．002）、p-AkVAkt（0．34±0．01比0．08±0．01，P〈0．001）、eNOS1（41．29±0．56）μmpl／L比（37．20±0．52）μmpl／L，P〈0．001]、NO[（31．24±0．40）μmpL／L比（26．66±0．53）μmpl／L，P〈0．001]水平明显升高；与L组比较，w组p-PI3K／PI3K、P-Akt／Akt、eNOS、NO及Bcl-2水平明显下降，细胞凋亡率及caspase-3水平显著升高。结论GLP-1受体激动剂利拉鲁肽可通过减少ROS产生、激活PI3K-Akt-eNOS-NO信号通路、抑制细胞凋亡，减轻高糖环境下缺氧／复氧诱导的心肌细胞损伤。

关键词：胰高血糖素样肽1 肌细胞 ,心脏高糖缺氧/复氧

芹菜素可抑制脂多糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

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中华心血管病杂志 2017年第4期45卷 323-328页

作者：药红梅贾永平薛铮郭敏吕吉元山西医科大学附属第一医院心内科太原030001

目的探讨天然来源的活性化合物芹菜素对脂多糖（LPS）诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及其机制。方法以原代培养的Sprague Dawley大鼠的主动脉VSMC为研究对象。分别检测芹菜素对VSMC的细胞毒性（根据加入芹菜素的浓... 详细信息

目的探讨天然来源的活性化合物芹菜素对脂多糖（LPS）诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及其机制。方法以原代培养的Sprague Dawley大鼠的主动脉VSMC为研究对象。分别检测芹菜素对VSMC的细胞毒性（根据加入芹菜素的浓度将细胞分为5组，即空白对照组以及芹菜素10、20、40和80 μmol/L组，采用CCK-8试剂盒检测VSMC的活性）、LPS对VSMC增殖的影响（根据加入LPS的不同浓度将细胞分为5组，即空白对照组以及LPS 0.1、1、10和100 μg/ml组，采用CCK-8法检测细胞增殖情况）、芹菜素对LPS诱导的VSMC增殖的影响（实验分为5组，即空白对照组、LPS组、LPS＋芹菜素10 μmol/L组、LPS＋芹菜素20 μmol/L组和LPS＋芹菜素40 μmol/L组，采用CCK-8法检测细胞增殖情况；实验分为3组，即LPS组、LPS＋芹菜素组和空白对照组，采用EdU法检测细胞增殖情况）以及不同干预组VSMC细胞周期的分布情况（实验分为3组，即LPS组、LPS＋芹菜素组和空白对照组，采用流式细胞仪进行检测）。结果（1）芹菜素细胞毒性的检测结果：芹菜素10、20和40 μmol/L组VSMC的活力与空白对照组比较差异均无统计学意义（P均〉0.05）。芹菜素80 μmol/L组VSMC活力为57%，显著低于空白对照组（P〈0.05）。（2）不同浓度LPS对VSMC增殖的影响：LPS 0.1、1和10 μg/ml组VSMC增殖率均明显高于空白对照组（P分别〈0.05、0.01和0.01），其中以LPS 10 μg/ml组VSMC增殖率为最高。LPS 100 μg/ml组VSMC增殖率则明显低于空白对照组（P〈0.05）。（3）芹菜素对LPS诱导的VSMC增殖影响的CCK-8法检测结果：LPS＋芹菜素10 μmol/L组VSMC增殖率与LPS组比较差异无统计学意义（P均〉0.05），LPS＋芹菜素20 μmol/L组和LPS＋芹菜素40 μmol/L组VSMC增殖率则均明显低于LPS组（P均〈0.05）。（4）芹菜素对LPS诱导的VSMC增殖影响的EdU法检测结果：LPS组VSMC EdU结合率明显高于空白对照组（P〈0.01），LPS＋芹菜素组VSMC EdU结合率则明显低于LPS组（P〈0.01）。（5）芹菜素对LPS诱导的VSMC细胞周期影响的检测结果：LPS组VSMC分布于G0/G1期的百分率明显低于空白对照组（P〈0.05），分布于S期的百分率则明显高于空白对照组（P〈0.05）。LPS＋芹菜素组VSMC分布于G0/G1期的百分率明显高于LPS组，分布于S期的百分率则明显低于LPS组。结论芹菜素具有抑制LPS诱导的大鼠主动脉VSMC增殖的作用，而抑制细胞有丝分裂，使其停滞于G0/G1期可能是这一作用的机制之一。

关键词：血管肌细胞平滑肌细胞增殖芹菜素脂多糖类

二十二碳六烯酸对大鼠冠状动脉平滑肌细胞离子通道的影响

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中华心血管病杂志 2012年第5期40卷 421-426页

作者：董平栓来利红王红雷邢适颖朱继红杨旭明王绍欣李转珍尚喜燕河南科技大学附属第一医院心内科洛阳471003

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾通道电流（IBKCa）和电压依赖性钾通道电流（IKv）的动力学影响，阐述DHA舒张血管的机制。方法采用膜片钳技术在全细胞模式下，记录0、10、20、40、60和80μmol... 详细信息

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活性钾通道电流（IBKCa）和电压依赖性钾通道电流（IKv）的动力学影响，阐述DHA舒张血管的机制。方法采用膜片钳技术在全细胞模式下，记录0、10、20、40、60和80μmol／L的DHA对大鼠冠状动脉平滑肌细胞上IBKCa和IKv的影响。结果（1）DHA可呈浓度依赖性地增加IBKCa和BKCa尾电流，对IBKCa稳态激活无影响。在指令电压＋150mV，不同浓度DHA（0、10、20、40、60和80μmol／L）作用下，IBKCa电流密度分别为（68．2±22．8）、（72．4±24．5）、（120．4±37．9）、（237．5±53．2）、（323．6±74．8）和（370．6±88．2）pA／pF（P〈0．05，n=30）。DHA对IBKCa的半效作用浓度（EC50）为（36．22±2．17）μmol／L。（2）DHA对IKv和Kv尾电流呈浓度依赖性抑制，使IKv稳态激活曲线右移、稳态失活曲线左移。在指令电压＋50mV，不同浓度DHA（0、10、20、40、60和80μmol／L）作用下，IKv电流密度分别为（43．9±2．3）、（43．8±2．3）、（42．9±2．0）、（32．3±1．9）、（11．7±1．5）和（9．6±1．2）pA／pF（P〈0．05，／7,=30）。DHA对IKv的EC50为（44．19±0．63）μmol／L。结论DHA对BKc。通道有激活作用，对Kv通道有抑制作用。DHA舒张血管的作用是对血管平滑肌细胞BKCa及Kv通道综合作用的结果。

关键词：冠状血管肌细胞平滑肌二十二碳六烯酸类大电导钙激活钾通道钾通道电压门控

蛋白激酶Cα-胞外调节蛋白激酶1／2与人气道平滑肌细胞中周期蛋白D1及P21^cip1表达的关系

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中华结核和呼吸杂志 2008年第12期31卷 915-920页

作者：杜春玲徐永健刘先胜谢俊刚张珍祥张建乔礼芬倪望陈士新华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科卫生部呼吸疾病重点实验室武汉430030

目的探究蛋白激酶C（PKC）α-胞外调节蛋白激酶（ERK）1／2级联对支气管哮喘（简称哮喘）患者血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMC）周期蛋白D1（cyclinD1）、周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制剂P21^cip1的调节作用及细胞增殖的影响。... 详细信息

目的探究蛋白激酶C（PKC）α-胞外调节蛋白激酶（ERK）1／2级联对支气管哮喘（简称哮喘）患者血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMC）周期蛋白D1（cyclinD1）、周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制剂P21^cip1的调节作用及细胞增殖的影响。方法用含10％哮喘患者血清的DMEM培养基被动致敏HASMC后，按随机数字表法分为对照组、12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯（PMA）处理组、PMA±PKCα错配寡核苷酸组、PMA±PKCα反义寡核苷酸组以及PMA±U0126组，每组4个样本。用Westernblot方法检测各组细胞磷酸化PKCα（p-PKCα）、ERK1／2、磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）、cyclinDl和P21eipI的蛋白表达水平，用流式细胞术和四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测HASMC增殖。结果PMA处理组p-PKCα水平、ERK1／2和p-ERKl／2蛋白水平高于对照组，cyclinD1、P21^rip1表达明显强于对照组（相对于各对照组的A值分别为2．10±0．29、1．67±0．19、2．20±0．27、1．99±0．22和3．11±0．29，均P〈0．05），HASMC的增殖[S期细胞比例为（30．3±2．4）％，A490值为0．80±0．06]高于对照组[S期细胞比例为（13．9±2．6）％，A490值为0．41±0．04]，均P〈0．05；PMA±PKCct反义寡核苷酸组中p-PKCot水平低于PMA处理组，ERK1／2和p-ERK1／2表达明显弱于PMA处理组，cyclinD1和P21cipl表达也明显低于PMA处理组（相对于各对照组的A值分别为1．23±0．19、1．34±0．18、1．52±0．20、1．45±0．18和1．49±0．18，均P〈0．05），HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为（21．2±2．8）％，A490值为0．51±0．04；g值分别为6．07，12．63；均P〈0．05]；同样与PMA处理组相比，PMA±U0126组中P-PKCα水平无明显改变（A值为1．99±0．18，g=0．94，P〉0．05），但ERK1／2、P—ERKI／2的表达，cyclinD1和P21^eip1的表达明显低于PMA处理组（A值分别为0．95±0．21、1．15±0．19、1．37±0．15和1．96±0．21，均P〈0．05），HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为（22．0±3．2）％，A490值为0．49±0．03；g值分别为5．51、13．45，均P〈0．05]。结论ERK1／2是PKCα的下游信号分子，PKCα-ERK1／2级联参与了PMA所诱导的哮喘患者血清被动致敏的人气道平滑细胞cyclinD1、P21cip1的表达上调及细胞增殖。

关键词：蛋白激酶Cα 细胞外信号调节MAP激酶类细胞周期蛋白D1 肌细胞平滑肌

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木材烟雾凝聚物对人气道平滑肌细胞的弱增殖和强坏死效应

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中华结核和呼吸杂志 2013年第8期36卷 581-586页

作者：潘仪玲李冰冉丕鑫呼吸疾病国家重点实验室(广州医学院第一附属医院) 510120 广州医学院实验医学研究中心

目的观察木材烟雾凝集物（WSC）对人气道平滑肌细胞（HASMC）增殖与坏死的影响。方法原代培养的HASMC取2至8代细胞，分为对照组、WSC组和烟草烟雾凝集物（CSC）组，每组4个复孔。用细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性，用核酸类似物标记检... 详细信息

目的观察木材烟雾凝集物（WSC）对人气道平滑肌细胞（HASMC）增殖与坏死的影响。方法原代培养的HASMC取2至8代细胞，分为对照组、WSC组和烟草烟雾凝集物（CSC）组，每组4个复孔。用细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性，用核酸类似物标记检测细胞增殖试剂盒和流式细胞术检测增殖期（s期）细胞比例并分析细胞周期，以荧光定量PCR和Westernblot法定量检测细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表达。用膜联蛋白-V／碘化丙啶双荧光染色法鉴别细胞坏死和凋亡。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD—t检验。结果细胞活性峰浓度时，WSC组和CSC组的细胞活性[（126±12）％和（142±11）％]均显著高于对照组[（100±0）％]，细胞活性抑制浓度时（WSC10mg／L、CSC60mg／L），WSC组和CSC组的细胞活性（86％和76％）均显著低于对照组[（100±0）％]，差异均有统计学意义（q值为3．63～9．33，均P〈0．05）。WSC1mg／L组细胞增殖比例和cyclinD1蛋白表达量[（124±20）％和1．31＋0．64]显著高于对照组[（100±0）％和1．0±0．0]．差异均有统计学意义（g值分别为5．85和5．91，均P〈0．05），S＋G：／M期细胞比例和cyclinD1的mRNA表达量[（103±4）％和1．18±0．21]与对照组[（100±0）％和1．0±0．0]比较，差异均无统计学意义（q值分别为1．16和2．05，均P〉0．05）；CSC10mg／L组细胞增殖比例、cyclinD1蛋白表达量、S＋G：／M期细胞比例和cyclinD1的mRNA表达量分别为（204±45）％、1．80±0．25、（140±6）％和1．48±0．2，均显著高于WSC1mg／L组和对照组[（100±0）％、1．0±0．0、（100±0）％和1．0±0．01。WSC10mg／L组坏死细胞比例[（13．39±0．15）％]均显著高于对照组[（1．57±0．41）％]和CSC60mg／L组[（6．61±1．91）％]，CSC40mg／L组凋亡细胞比例[（61．8±10．6）％]均显著高于对照组[（0．0±0．0）％]和WSC10mg／L组[（1．7±0．4）％]，差异均有统计学意义（q值为3．33～18．03，均P〈0．05）。结论WSC对HASMC的效应与CSC不同，表现为一定剂量下的弱促增殖效应，高剂量暴露时则表现出强有力的细胞坏死效应，但凋亡效应不明显。

关键词：烟雾肌细胞平滑肌细胞增殖

细胞外信号调节激酶反义寡核苷酸对支气管哮喘血清被动致敏的人气道平滑肌细胞的影响

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中华结核和呼吸杂志 2010年第7期33卷 524-529页

作者：白晶刘先胜徐永健张珍祥谢敏倪望华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科武汉430030 广西医科大学第一附属医院呼吸内科

目的观察细胞外信号调节激酶（ERK）反义寡核苷酸（ODNs）对支气管哮喘（简称哮喘）血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMCs）增殖和凋亡的影响.方法用10%哮喘患者血清被动致敏HASMCs（空白对照组）,并用脂质体将反义（AODNs组）、... 详细信息

目的观察细胞外信号调节激酶（ERK）反义寡核苷酸（ODNs）对支气管哮喘（简称哮喘）血清被动致敏的人气道平滑肌细胞（HASMCs）增殖和凋亡的影响.方法用10%哮喘患者血清被动致敏HASMCs（空白对照组）,并用脂质体将反义（AODNs组）、正义（SODNs组）及错配ERKODNs（RODNs组）导入HASMCs,以10%非哮喘患者血清为对照（对照血清组）.采用流式细胞仪、四甲基偶氮唑盐（MTT）法、3H-TdR掺入法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术检测HASMCs的增殖,原位末端标记法和Annexin-V FITC PI双染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测ERKmRNA和ERK1/2、磷酸化ERK1/2蛋白的表达.结果用ERK ODNs干预经哮喘血清致敏的HASMCs后,AODNs组S＋G2/M期细胞所占比例、吸光度（A490）值、细胞DNA合成量和PCNA蛋白表达量[分别为（14.21±1.21）%、（0.271±0.021）、（2811±182）cpm/106和（5.25±0.60）]均低于空白对照组[分别为（22.48±2.04）%、0.507±0.090、（3869±396）cpm/106和11.25±1.21]（F值分别为65.594、39.676、61.111、120.321,均P〈0.01）,AODNs组的凋亡指数和早期凋亡细胞百分率[分别为13.96±1.72和（9.17±0.47）%]均高于空白对照组[分别为5.37±0.05和（3.26±0.04）%],差异有统计学意义（F值分别为98.181和65.444,均P〈0.01）,AODNs组的ERK mRNA和ERK活化率[分别为0.43±0.06和（63±6）%]均低于空白对照组[分别为0.89±0.09和（87±8）%]（F值分别为78.043和87.288,均P〈0.01）.而正义和错配ERK ODNs没有上述作用.结论反义ERK可通过抑制ERK mRNA表达和翻译抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs的增殖,促进其凋亡,ERK信号通道可能对哮喘患者HASMCs增殖与凋亡具有重要的调控作用.

关键词：细胞外信号调节激酶类肌细胞平滑肌寡核苷酸类反义哮喘

丹参多酚通过减轻线粒体DNA氧化损伤抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

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中华心血管病杂志 2017年第1期45卷 57-63页

作者：岳荣川杨小利张荣驿刘思刘杰曾静梁豪王伟胡厚祥曾春雨川北医学院附属医院心血管内科南充637000 第三军医大学大坪医院心血管内科

目的探讨丹参多酚减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的机制。方法H9c2心肌细胞株来源于中国科学院细胞库。将H9c2心肌细胞分为4组，即对照组（细胞在普通培养基中正常培养）、丹参多酚组[先用含有0.5 g/L丹参多酚的培养基预处理4 h（37 ℃）后... 详细信息

目的探讨丹参多酚减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的机制。方法H9c2心肌细胞株来源于中国科学院细胞库。将H9c2心肌细胞分为4组，即对照组（细胞在普通培养基中正常培养）、丹参多酚组[先用含有0.5 g/L丹参多酚的培养基预处理4 h（37 ℃）后换普通培养基正常培养]、H/R组（进行缺氧复氧处理）和丹参多酚＋H/R组（先用含有0.5 g/L丹参多酚的培养基预处理4 h后再进行缺氧复氧处理）。检测各组心肌细胞的凋亡率、细胞内三磷酸腺苷（ATP）水平、线粒体膜电位的变化以及线粒体DNA氧化损伤情况。结果（1）各组心肌细胞凋亡情况：H/R组Tunel阳性细胞率为（26.36±5.14）%明显高于对照组的（2.71±1.66）%（P＝0.000 4），丹参多酚＋H/R组Tunel阳性细胞率为（17.28±4.75）%，虽高于对照组（P＝0.003 9），却明显低于H/R组（P＝0.012 8）。H/R组AnnexinⅤ及PI双阳性的细胞比率为（28.23±6.73）%明显高于对照组的（3.53±2.83）%（P＝0.001 1），丹参多酚＋H/R组AnnexinⅤ及PI双阳性的细胞比率为（18.10±4.56）%虽高于对照组（P＝0.038 3），却明显低于H/R组（P＝0.037 2）。（2）各组心肌细胞内ATP水平及线粒体膜电位：H/R组心肌细胞内ATP水平为（49.05±10.12）%明显低于对照组（100%）（P＝0.000 5），而丹参多酚＋H/R组心肌细胞内ATP水平为（68.67±13.32）%明显高于H/R组（P＝0.019 9）。激光共聚焦显微镜下可见H/R组心肌细胞的红色荧光较对照组弱，绿色荧光较对照组强，酶标仪检测结果示H/R组心肌细胞中线粒体膜电位为（37.13±8.47）%明显低于对照组（100%）（P＝0.000 1）。而丹参多酚＋H/R组心肌细胞的红色荧光较H/R组强，绿色荧光较H/R组弱，酶标仪检测结果示丹参多酚＋H/R组心肌细胞中线粒体膜电位为（63.77±12.32）%明显高于H/R组的（37.13±8.47）%（P＝0.007 3）。（3）各组心肌细胞线粒体DNA氧化损伤情况：对照组及丹参多酚组心肌细胞中几乎未见绿色的8-OHdG表达，H/R组心肌细胞中绿色的8-OHdG表达则较多，而且与代表线粒体的红色的MitoTracker Red重合。丹参多酚＋H/R组心肌细胞线粒体内绿色的8-OHdG表达较H/R组少。结论丹参多酚可能是通过减轻线粒体DNA氧化损伤，保护线粒体功能，从而抑制心肌细胞凋亡，最终减轻心肌细胞缺氧复氧损伤。

关键词：肌细胞心脏再灌注损伤丹参细胞凋亡线粒体