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山羊ZFP36L1基因克隆及表达特性分析

生物工程学报 2023年第4期39卷 1696-1709页

作者：马箫彤王瑞龙王菲陈定双李艳艳林亚秋王友利刘伟西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 赤峰应用技术职业学院内蒙古赤峰024031 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室四川成都610041

本研究旨在克隆获取锌指蛋白家族36(zinc finger protein 36-like 1,ZFP36L1)基因,并明确其表达特性,阐明其在山羊不同组织中的表达模式。采集简州大耳羊的心、肝、脾、肺、肾等15种组织样品,应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcrip... 详细信息

本研究旨在克隆获取锌指蛋白家族36(zinc finger protein 36-like 1,ZFP36L1)基因,并明确其表达特性,阐明其在山羊不同组织中的表达模式。采集简州大耳羊的心、肝、脾、肺、肾等15种组织样品,应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增获得山羊ZFP36L1基因,通过在线工具对基因及蛋白质序列进行生物学分析;再应用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测ZFP36L1基因在山羊各个组织及不同分化阶段的肌内前体脂肪细胞中的表达水平,并分析其组织表达谱以及细胞时序表达谱。结果表明,克隆获得山羊ZFR36L1基因序列长度为1224 bp,编码序列(coding sequence,CDS)区为1017 bp,编码338个氨基酸,是主要定位于细胞核、细胞质的非分泌不稳定蛋白;组织表达谱显示,ZFP36L1基因在各组织中均有表达,在内脏组织、小肠表达量最高(P肌肉组织以背最长肌表达量最高(P脂肪组织中,皮下脂肪组织的表达量显著高于其他组织(P肌内前体脂肪细胞成脂分化过程中表达呈上调趋势(P<0.01)。以上研究为阐明山羊ZFP36L1基因的生物学功能提供数据支持。

关键词：山羊 ZFP36L1 基因克隆肌内前体脂肪细胞诱导分化

山羊RPL29基因克隆和序列分析及其对肌内脂肪细胞脂质生成的影响

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生物工程学报 2023年第7期39卷 2695-2705页

作者：龚成思林亚秋胡婷婷王永李艳艳王友利西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室四川成都610041

本研究旨在克隆简州大耳羊RPL29基因并分析其分子特性及对肌内脂肪细胞脂质生成的影响。利用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法克隆山羊RPL29基因序列,用生物信息学方法分析该基因序列... 详细信息

本研究旨在克隆简州大耳羊RPL29基因并分析其分子特性及对肌内脂肪细胞脂质生成的影响。利用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法克隆山羊RPL29基因序列,用生物信息学方法分析该基因序列特征,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测其在山羊各种组织和不同分化阶段肌内脂肪细胞中的mRNA表达水平。利用基因重组法构建的pEGFP-N1-RPL29过表达载体转染进山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,用油红O和Bodipy染色方法从形态学上揭示过表达RPL29对脂滴积聚的影响,用qRT-PCR检测脂代谢相关基因表达水平的变化。结果显示,山羊RPL29长为507 bp,其中氨基酸编码区(coding sequence,CDS)为471 bp,编码156个氨基酸,是一种主要分布在细胞核、带正电荷且较稳定的亲水性蛋白质。组织表达谱表明该基因在山羊皮下脂肪组织及腹部脂肪组织中的表达水平显著高于其他组织(P肌内脂肪细胞分化第84小时表达水平最高,极显著高于未分化时期(P肌内脂肪细胞中的脂质积聚,且油红O染色后OD值显著增加(P肌内脂肪细胞脂质沉积。

关键词：山羊 RPL29 基因克隆表达谱分析肌内前体脂肪细胞

过表达山羊ATF3抑制肌内前体脂肪细胞分化

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生物工程学报 2022年第8期38卷 2939-2947页

作者：王重洋罗成张浩李鑫李艳艳熊燕王友利林亚秋西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室四川成都610041

本研究旨在探究山羊转录激活因子3(activating transcription factor 3,ATF3)对肌内前体脂肪细胞分化的影响,并从分子水平阐明其可能作用途径。利用基因重组方法构建pEGFP-N1-ATF3过表达重组质粒,脂质体转染肌内前体脂肪细胞,通过油红O... 详细信息

本研究旨在探究山羊转录激活因子3(activating transcription factor 3,ATF3)对肌内前体脂肪细胞分化的影响,并从分子水平阐明其可能作用途径。利用基因重组方法构建pEGFP-N1-ATF3过表达重组质粒,脂质体转染肌内前体脂肪细胞,通过油红O脂肪染色法从细胞形态学水平确定对分化的影响,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测脂肪细胞分化标记基因相对表达水平,从分子水平确定对分化的影响。最终成功构建pEGFP-N1-ATF3过表达载体,转染山羊肌内前体脂肪细胞后发现脂滴积聚被抑制,qRT-PCR检测到脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα、SREBP1极显著下调(P肌内前体脂肪细胞脂滴积聚,这种作用通过下调PPARγ、C/EBPα和AP2来实现,研究结果为阐明山羊ATF3调控肌内前体脂肪细胞分化机制提供重要的基础数据。

关键词： ATF3 山羊肌内前体脂肪细胞过表达诱导分化

LncFAM200B对牦牛肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响

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中国农业科学 2022年第13期55卷 2654-2666页

作者：冉宏标赵丽玲王会柴志欣王吉坤王嘉博武志娟钟金城西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省教育部重点实验室

【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分... 详细信息

【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncFAM200B超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析lncFAM200B超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2,lncFAM200B潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平；采用油红O染色、甘油三酯（TAG）测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况。【结果】从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞；lncFAM200B超表达后，脂肪分化标志基因C/EBPα、AP2表达量显著升高（P细胞脂滴沉积显著增加（P内形成较大脂滴；超表达4 d后，细胞内甘油三酯含量显著增加（P脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2的表达水平（P细胞脂肪沉积，且诱导分化第6天细胞内甘油三酯含量显著降低（P细胞增殖效率显著降低（P细胞增殖效率显著增强（P脂肪分化标志基因C/EBPα和AP2，脂肪合成相关基因SIRT1和PTEN的表达从而影响牦牛肌内脂肪沉积，但其具体机制还需要进一步研究。

关键词：牦牛 lncFAM200B 肌内前体脂肪细胞超表达干扰

PSMD9对山羊前体脂肪细胞脂质沉积的调控作用研究

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畜牧兽医学报 2023年第9期54卷 3653-3663页

作者：邵鹏唐崟梅林亚秋王永向华黄炼朱江江西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省/教育部重点实验室成都610207 西南民族大学青藏高原研究院成都610207

旨在克隆山羊PSMD 9基因序列并对其进行生物信息学分析,检测PSMD 9在山羊各组织中的表达情况和肌内前体脂肪细胞不同分化时期的表达水平,并进一步揭示过表达和干扰PSMD 9基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响。本研究以1周岁健康... 详细信息

旨在克隆山羊PSMD 9基因序列并对其进行生物信息学分析,检测PSMD 9在山羊各组织中的表达情况和肌内前体脂肪细胞不同分化时期的表达水平,并进一步揭示过表达和干扰PSMD 9基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响。本研究以1周岁健康简州大耳羊公羊(n=12)为试验对象,采用T-A克隆技术获得山羊PSMD 9基因序列,进行生物信息学分析,并通过双酶切方法构建PSMD9过表达载体。利用脂质体转染在山羊肌内脂肪细胞中过表达PSMD 9,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰PSMD 9表达。通过油红O染色法观察PSMD 9对脂滴形成的影响,GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量;同时利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PSMD 9在山羊不同组织中的表达水平和肌内前体脂肪细胞不同分化时期的表达水平。结果,获得山羊PSMD 9基因核苷酸序列763 bp,其中5′UTR 67 bp,CDS区564 bp,3′UTR 132 bp,编码187个氨基酸残基;山羊PSMD 9基因在肝脏中的表达量最高,在脾脏中表达量最低,在诱导分化前4 d其表达水平随着山羊前体脂肪细胞分化而逐渐降低,随后上升,并在第8天表达量最高;过表达PSMD 9基因,肌内前体脂肪细胞的脂滴明显增加,甘油三酯含量显著提高,同时可显著上调DGAT2、FASN和ACC的相对表达量,DGAT1、PPARγ和SCD 1表达量无显著变化;干扰PSMD 9基因肌内前体脂肪细胞脂滴减少,甘油三酯含量降低,同时可显著下调DGAT1、PPARγ、FASN和ACC表达量,DGAT 2和SCD 1无显著变化。本试验成功获得山羊PSMD 9基因CDS区序列,其在肝脏组织中表达量最高,山羊PSMD 9基因的表达随着肌内前体脂肪细胞的分化而逐渐降低,在第4天表达量最低,之后表达量逐渐升高,PSMD 9的表达能够显著促进山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积,这些结果为进一步阐明PSMD 9基因对调控山羊肌内脂肪形成的作用机制提供了重要数据支撑。

关键词：山羊 PSMD9 RNA干扰过表达肌内前体脂肪细胞

山羊FATP2基因的克隆及对前体脂肪细胞脂质沉积的影响

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畜牧兽医学报 2023年第9期54卷 3642-3652页

作者：唐崟梅李琪李海洋林亚秋王永向华黄炼朱江江西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省/教育部重点实验室成都610207 西南民族大学青藏高原研究院成都610207

旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析,检测FATP 2基因在山羊不同组织中的表达差异,并进一步揭示干扰FATP 2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康... 详细信息

旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析,检测FATP 2基因在山羊不同组织中的表达差异,并进一步揭示干扰FATP 2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳羊(n=12)为试验动物。采用RT-PCR法扩增并克隆山羊FATP 2基因,进行序列对比、系统发育树构建及生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测FATP 2基因在山羊不同组织中及在山羊肌内前体脂肪细胞不同分化时期的相对表达水平,合成SI-RNA干扰序列并转染至山羊肌内前体脂肪细胞;使用RT-qPCR检测FATP 2干扰效率及脂质代谢相关基因的表达情况;通过Bodipy染色法观察干扰FATP 2对脂滴形成的影响,利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示,获得山羊FATP 2基因序列全长2335 bp,CDS区1863 bp,5′UTR 188 bp,3′UTR 284 bp;共编码621个氨基酸,山羊FATP 2基因在肝脏表达量最高;RT-qPCR检测结果显示,FATP 2表达在细胞中被显著干扰;Bodipy染色结果显示,干扰FATP 2基因后脂滴显著减少;甘油三酯测定结果显示,干扰FATP2基因山羊肌内前体脂肪细胞甘油三酯含量显著降低。本研究成功获得山羊FATP 2基因CDS区序列,干扰FATP 2后山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积显著减少并显著影响脂代谢相关基因的表达,这些结果为进一步阐明FATP 2对调控山羊肌内脂肪形成的作用机制提供了重要数据。

关键词：山羊 FATP2基因 RNA干扰肌内前体脂肪细胞

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SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响

畜牧兽医学报 2022年

作者：刘珂含王永李艳艳王重洋朱江江熊燕李安林亚秋西南民族大学畜牧兽医学院青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室

旨在克隆山羊SRSF10基因序列，明确其生物学特性，并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊（Capra hircus）为试验对象，利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列，并进行生物信息学分析；利... 详细信息

旨在克隆山羊SRSF10基因序列，明确其生物学特性，并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊（Capra hircus）为试验对象，利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列，并进行生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）技术研究其在成脂诱导分化不同阶段细胞中的表达水平；转染pcDNA3.1-SRSF10过表达载体和SRSF10-siRNA至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化，通过油红O和Bodipy染色法从形态学上明确其对脂滴积聚的影响；通过qPCR方法检测脂肪细胞分化标志基因表达的变化。结果显示，获得山羊SRSF10基因序列为1 026 bp，其中CDS区553 bp，共编码183个氨基酸；SRSF10在诱导分化96 h的肌内脂肪细胞中表达量最高；过表达和干扰山羊SRSF10分别促进和抑制了肌内脂肪细胞中的脂滴积聚；过表达后基因SREBP1、PPARγ和C/EBPα的相对表达量极显著上调（P肌内脂肪细胞分化的正调控作用因子，并且这种调控作用可能主要通过调节SREBP1、PPARγ和C/EBPα的表达来实现。

关键词：山羊 SRSF10 基因克隆表达特性肌内前体脂肪细胞细胞分化

SRSF10对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响

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畜牧兽医学报 2022年第6期53卷 1768-1778页

作者：刘珂含王永李艳艳王重洋朱江江熊燕李安林亚秋西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室成都610041

旨在克隆山羊SRSF10基因序列,明确其生物学特性,并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊(Capra hircus)为试验对象,利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列,并进行生物信息学分析;利用实时... 详细信息

旨在克隆山羊SRSF10基因序列,明确其生物学特性,并通过过表达和干扰手段阐明SRSF10对山羊肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以简州大耳羊(Capra hircus)为试验对象,利用RT-PCR技术克隆山羊SRSF10基因序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术研究其在成脂诱导分化不同阶段细胞中的表达水平;转染pcDNA3.1-SRSF10过表达载体和SRSF10-siRNA至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,通过油红O和Bodipy染色法从形态学上明确其对脂滴积聚的影响;通过qPCR方法检测脂肪细胞分化标志基因表达的变化。结果显示,获得山羊SRSF10基因序列为1026 bp,其中CDS区552 bp,共编码183个氨基酸;SRSF10在诱导分化96 h的肌内脂肪细胞中表达量最高;过表达和干扰山羊SRSF10分别促进和抑制了肌内脂肪细胞中的脂滴积聚;过表达后基因SREBP1、PPARγ和C/EBPα的相对表达量极显著上调(P肌内脂肪细胞分化的正调控作用因子,并且这种调控作用可能主要通过调节SREBP1、PPARγ和C/EBPα的表达来实现。

关键词：山羊 SRSF10 基因克隆表达特性肌内前体脂肪细胞细胞分化

绵羊肌内前体脂肪细胞CNR1和FABP4基因表达研究

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中国农业科技导报 2022年第3期24卷 95-102页

作者：闫伟王玉涛张永浩刘海霞韩大勇朱爱文江苏农牧科技职业学院动物科技学院江苏泰州225300 喀什大学生命与地理科学学院新疆帕米尔高原生物资源与生态自治区重点实验室新疆喀什844000

为研究绵羊脂肪细胞增殖分化过程中参与动物能量代谢调控的大麻素受体1(cannabinoid receptor 1)基因CNR1和调控脂肪沉积的脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4)基因FABP4的表达规律和差异,采集一只3日龄湖羊羔羊背最长肌组织... 详细信息

为研究绵羊脂肪细胞增殖分化过程中参与动物能量代谢调控的大麻素受体1(cannabinoid receptor 1)基因CNR1和调控脂肪沉积的脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4)基因FABP4的表达规律和差异,采集一只3日龄湖羊羔羊背最长肌组织,背肌组织经Ⅱ型胶原酶消化后分离观察原代前体脂肪细胞;开展前体脂肪细胞培养并绘制生长曲线;应用胰岛素、地塞米松和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤诱导前体脂肪细胞后,采用油红O染色观察成熟脂肪细胞形态;收集不同分化时间点细胞,应用实时荧光定量PCR方法测定CNR1和FABP4基因表达量。结果表明,羔羊背最长肌组织成功分离出了前体脂肪细胞,贴壁细胞呈梭形;诱导前体脂肪细胞经油红O染色后观察到脂滴形成,具有脂肪细胞特征;CNR1和FABP4基因表达量在诱导分化早期均较低,但在诱导分化中后期表达量逐步升高;CNR1和FABP4基因表达量在诱导分化后的第2、第4和第8天均差异不显著,但FABP4基因在第12天的表达量显著高于CNR1基因。上述结果为进一步探究绵羊CNR1和FABP4基因调控关系及利用两基因改良绵羊肉品性状提供了参考数据。

关键词：绵羊肌内前体脂肪细胞 FABP4 CNR1 基因表达