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肉鸡胫骨软骨发育不良早期不同阶段超微结构观察

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肉鸡胫骨软骨发育不良早期不同阶段超微结构观察

中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会

作者：田文霞李家奎覃平王瑞宁官保乔建钢李宏全毕丁仁思轶郭定宗华中农业大学动物医学院山西农业大学动物科技学院华中农业大学食品科技学院华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

【目的】研究肉鸡胫骨软骨发育不良早期超微结构时序性变化。【方法】在试验第1、2、6天,对试验鸡只进行剖杀,速采取胫骨生长板分别放入2.5%戊二醛溶液于4℃固定,做超微结构观察。【结果】增殖软骨细胞变圆,坏死,线粒体增多、肿胀,出现... 详细信息

【目的】研究肉鸡胫骨软骨发育不良早期超微结构时序性变化。【方法】在试验第1、2、6天,对试验鸡只进行剖杀,速采取胫骨生长板分别放入2.5%戊二醛溶液于4℃固定,做超微结构观察。【结果】增殖软骨细胞变圆,坏死,线粒体增多、肿胀,出现致密颗粒,内质网断裂扩张呈泡状;前肥大软骨细胞,第1、2天,多数无完整的细胞结构,细胞质溶解,有疑似凋亡细胞,试验第6天,己有完整的细胞结构,细胞器仍呈坏死变化,分泌旺盛。【结论】为从细胞水平阐明其发病机制提供了新的线索。

关键词：福美双肉鸡胫骨软骨发育不良超微结构软骨细胞

肉鸡胫骨软骨发育不良早期钙黏蛋白1(CDH1)差异表达研究

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肉鸡胫骨软骨发育不良早期钙黏蛋白1(CDH1)差异表达研究

中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会

作者：田文霞李家奎覃平王瑞宁官保乔建钢李宏全毕丁仁潘思轶郭定宗华中农业大学动物医学院山西农业大学动物科技学院华中农业大学食品科技学院华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

【目的】研究肉鸡胫骨软骨发育不良早期钙黏蛋白1(CDH1)的差异表达。【方法】在试验第1、2、6天,对试验鸡只进行剖杀,速采取胫骨生长板放入4%多聚甲醛溶液于4℃固定,做CDH1免疫组化分析;提取对照组和饲喂福美双组的生长板总RNA,采用real... 详细信息

【目的】研究肉鸡胫骨软骨发育不良早期钙黏蛋白1(CDH1)的差异表达。【方法】在试验第1、2、6天,对试验鸡只进行剖杀,速采取胫骨生长板放入4%多聚甲醛溶液于4℃固定,做CDH1免疫组化分析;提取对照组和饲喂福美双组的生长板总RNA,采用real-time PCR对CDH1基因进行差异表达验证。【结果】钙黏蛋白1(CDH1)基因上调表达与芯片结果一致。CDH1/E-cadherin的定位和表达分析显示,主要在前肥大、肥大区软骨细胞表达,增殖区软骨细胞无表达,钙化区软骨细胞表达少,呈弥散状分布于细胞浆中,而且在饲喂福美双组呈上调表达,与定量PCR变化结果相一致。【结论】为认识肉鸡TD的病因、从分子水平阐明其发病机制提供了可靠的理论依据。

关键词：福美双肉鸡胫骨软骨发育不良钙黏蛋白1(CDH1) 差异表达

ChM-I、VCAM-1基因在肉鸡胫骨软骨发育不良差异表达的时序性研究

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ChM-I、VCAM-1基因在肉鸡胫骨软骨发育不良差异表达的时序性研究

作者：王瑞华中农业大学

学位级别：硕士

胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)是肉鸡常见的骨骼疾病之一,以骺板成熟面形成不能血管化也不能矿化的软骨栓为特点。TD的发生与品种、日粮的Ca/P比和阴阳离子的比例等因素有关。TD的发生已对养鸡业造成重大经济损失,近年... 详细信息

胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)是肉鸡常见的骨骼疾病之一,以骺板成熟面形成不能血管化也不能矿化的软骨栓为特点。TD的发生与品种、日粮的Ca/P比和阴阳离子的比例等因素有关。TD的发生已对养鸡业造成重大经济损失,近年来对TD病理过程的研究已有不少,但对其具体的发病机理仍然不甚明了。ChM-I(chondromodulin-I)是近年来发现的一种软骨源性因子,它能刺激软骨细胞和成骨细胞生长,抑制血管内皮细胞的生长,这种基质分子在软骨无血管化过程中起到重要作用。VCAM-1(Vascular cell adhesion molecule 1)是一种重要的粘附分子,它参与免疫细胞的粘附、迁移和造血细胞的生长发育,协助造血细胞粘附并定位于有利于其发育的微环境,参与造血细胞与基质细胞形成聚集体,参与造血细胞的归巢和迁移,因此VCAM-1在软骨分化和血管化过程中起到重要作用。在本课题研究小组前期的试验中,应用抑制消减杂交(SSH)技术筛选出10个差异表达基因,其中就包括ChM-I和VCAM-1,但是二者在肉鸡TD不同阶段的差异表达情况尚不清楚,为此本研究采用realtime q-PCR、原位杂交和免疫组化方法分别从基因和蛋白水平对肉鸡TD发生中ChM-I和VCAM-1基因差异表达的时序性进行了研究,取得了结果如下:Realtime q-PCR和原位杂交发现肉鸡患TD时,ChM-I基因在不同时期出现上调和下调的现象。具体结果为饲料中添加福美双之后第1次和第4次采检测ChM-I基因表现为上调,第2次和第3次采样检测ChM-I基因表现为下调;VCAM-1基因在1-4次采样检测都表现为下调;构建了PKG-ChM-I原核表达体系,成功表达ChM-I基因,经SDS-PAGE及Western blot分析表达产物的分子量约41kDa,以包涵体形式存在;用纯化的ChM-I表达蛋白作为抗原免疫新西兰大耳兔,制备出兔抗ChM-I多抗,并纯化IgG;用制备的兔抗ChM-I多抗作为一抗进行免疫组化实验,结果发现与对照组相比TD组ChM-I的表达量增加,但与realtime q-PCR和原位杂交在不同阶段检测的基因表达水平并不是很一致。本研究表明,ChM-I基因和VCAM-1基因在基因和蛋白水平的表达有不同程度的变化,分析这种变化的规律和原因为TD发病机理的研究提供新的理论依据和线索。

关键词：肉鸡胫骨软骨发育不良 ChM-I VCAM-1 realtime q-PCR 原位杂交免疫组化差异表达时序性

ChM-Ⅰ在肉鸡胫骨软骨发育不良的时序性研究

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ChM-Ⅰ在肉鸡胫骨软骨发育不良的时序性研究

中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会

作者：王瑞李家奎田文霞覃平郭定宗华中农业大学动物医学院山西农业大学动物科技学院

(目的)本实验旨在研究ChM-Ⅰ在肉鸡胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)中不同阶段的表达情况,进一步对肉鸡胫骨软骨发育不良发病机理进行探讨。(方法)150羽一日龄艾维因内鸡饲喂1周后分为两组,对照组饲以基础日粮,试验组饲... 详细信息

(目的)本实验旨在研究ChM-Ⅰ在肉鸡胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)中不同阶段的表达情况,进一步对肉鸡胫骨软骨发育不良发病机理进行探讨。(方法)150羽一日龄艾维因内鸡饲喂1周后分为两组,对照组饲以基础日粮,试验组饲以基础日粮中添加100mg/kg的福美双,2d后试验组改换饲喂基础日粮,历时20d。应用自行制备的兔抗ChM-Ⅰ多体对饲喂福美双后的第1、2、4、6、8、10、12、15d的肉鸡胫骨软骨生长板进行免疫组化研究。(结果)结果显示肥大区的ChM-Ⅰ在第1d和第10d对照组的表达量要高于试验组,在第2、4、6、8、12、15d对照组的表达量要低于试验组。(结论)结果表明,ChM-Ⅰ在不同时期的表达有差异,但总体趋势表明试验组ChM-Ⅰ的表达量还是高于正常组的表达量,由此可推测ChM-Ⅰ可能在TD发生过程中起到重要作用,可能是生长板无法血管化和钙化的重要原因。

关键词：肉鸡胫骨软骨发育不良 ChM-Ⅰ 免疫组化时序性

VCAM-1基因在肉鸡胫骨软骨发育不良中差异表达的时序性研究

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VCAM-1基因在肉鸡胫骨软骨发育不良中差异表达的时序性研究

中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会

作者：王瑞田文霞覃平李家奎郭定宗华中农业大学动物医学院山西农业大学动物科技学院

本实验目的在于研究血管粘附分子-1(VCAM-1)基因在肉鸡胫骨软骨发育不良(TibialDyschondroplasia,TD)中不同阶段的差异表达,进一步对肉鸡TD的发病机理进行探讨。方法采用150羽一日龄艾维因肉鸡饲喂1周后随机分为两组,对照组饲以基础日粮... 详细信息

本实验目的在于研究血管粘附分子-1(VCAM-1)基因在肉鸡胫骨软骨发育不良(TibialDyschondroplasia,TD)中不同阶段的差异表达,进一步对肉鸡TD的发病机理进行探讨。方法采用150羽一日龄艾维因肉鸡饲喂1周后随机分为两组,对照组饲以基础日粮,试验组饲以基础日粮中添加100mg/kg的福美双,2天后试验组改换饲喂基础日粮,历时22。应用实时荧光定量PCR(realtimeq-PCR)和原位杂交SIHH)方法对饲喂福美双后的第1、2、4、6d的对照组和试验组肉鸡胫骨软骨生长板进行研究。结果显示肥大软骨细胞区的VCAM-1基因在第1、2、4、6d对照组的表达量都高于试验组。结果表明,VCAM-1基因为差异表达基因,而且在整个TD过程中表现为下调,由此可推测VCAM-1可能是TD发生过程中形成无法血管化和钙化的软骨栓重要原因。

关键词：肉鸡胫骨软骨发育不良 VCAM-1 realtime q-PCR 原位杂交时序性

基因芯片筛选肉鸡胫骨软骨发育不良差异表达基因

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基因芯片筛选肉鸡胫骨软骨发育不良差异表达基因

中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会

为研究肉鸡胫骨软骨发育不良发病机理,应用基因芯片技术筛选福美双诱导的胫骨软骨发育不良早期的差异表达基因.提取对照组和饲喂福美双组第1、2、6天的生长板总RNA,分别与18张基因芯片杂交,采用real-time PCR对7个基因进行差异表达验证... 详细信息

为研究肉鸡胫骨软骨发育不良发病机理,应用基因芯片技术筛选福美双诱导的胫骨软骨发育不良早期的差异表达基因.提取对照组和饲喂福美双组第1、2、6天的生长板总RNA,分别与18张基因芯片杂交,采用real-time PCR对7个基因进行差异表达验证.结果表明,基因芯片筛选到第1、2、6天1.5倍以上差异表达基因数分别为108、385和468.赖氨酸氧化酶(LOX)、热体克蛋白25(Hsp25)、DNA结合1抑制剂(ID1)、动联蛋白1(KTN1)、分泌性卷曲相关蛋白(SFRP4)、钙黏蛋白1(CDH1)和烯醇酶2(EN02)等7个基因上调表达与芯片结果一致。为认识肉鸡TD的病因、从分子水平阐明其发病机制提供了可靠的生物信息学依据.

关键词：福美双肉鸡胫骨软骨发育不良基因芯片技术差异表达基因

重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导肉鸡TD中前列腺素相关基因的影响

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重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导肉鸡TD中前列腺素相关基因的影响

作者：李欣山西农业大学

学位级别：硕士

谷胱甘胱硫转移酶(Glutathione S-Transferase,GSTs)是肝脏解毒的第二期家族酶,主要参与多种致癌物、环境毒素和氧化应激产物的解毒,是GSTs超家族中α家族的一员,还参与抗氧化应激引起的信号通路的调节,并且在前列腺素的合成过程中也是... 详细信息

谷胱甘胱硫转移酶(Glutathione S-Transferase,GSTs)是肝脏解毒的第二期家族酶,主要参与多种致癌物、环境毒素和氧化应激产物的解毒,是GSTs超家族中α家族的一员,还参与抗氧化应激引起的信号通路的调节,并且在前列腺素的合成过程中也是必不可少的。肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)是肉鸡中最常见的一种腿病,主要病变在生长板。课题组前期完成了鸡GSTA3基因体外重组表达,并获得其活性蛋白;应用前期基因芯片技术结果,筛选出 GSTA3、COX-2、PTGES、PTGDS、HPGDS、PTGR1、PTGER3、PTGER4等与前列腺素合成相关的差异表达基因。探讨GSTA3对福美双诱导肉鸡TD中前列腺素合成的影响,进而探明前列腺素的合成在肉鸡TD中的作用。方法:参照课题组前期研究方法构建肉鸡TD模型,并通过肌肉注射不同剂量的原核表达蛋白GSTA3,运用ELISA技术检测血清中PGE2的含量,采用荧光定量PCR技术对肉鸡TD胫骨生长板中 GSTA3、COX-2、PTGES、PTGDS、HPGDS、PTGR 1、PTGER3、PTGER4、Ex-FABP基因表达进行定量研究,通过免疫组织化学技术对COX-2蛋白表达情况进行分析研究。结果显示,HE染色中,攻毒组病变与TD病理变化一致,TD模型复制成功;注射重组蛋白GSTA3后,增殖区软骨细胞形态及排布在后期基本恢复正常,前肥大及肥大细胞仍有病变,但是异常细胞逐渐减少。ELISA结果显示,福美双可以在早期(试验第1、2、6天)明显提高肉鸡血清PGE2的水平,重组蛋白GSTA3在第2、4天显著降低PGE2的水平(P软骨细胞的异常增殖可能与前列腺素有关;2、GSTA3可能可以通过调节软骨细胞内花生四烯酸代谢、前列腺素合成的途径中的相关基因的表达,抑制TD损伤。

关键词：谷胱甘肽硫转移酶肉鸡胫骨软骨发育不良前列腺素E2 前列腺素合成酶前列腺素受体

重组鸡GSTA3和Ex-FABP蛋白对TD肉鸡红细胞中凋亡和前列腺素相关基因表达的影响

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重组鸡GSTA3和Ex-FABP蛋白对TD肉鸡红细胞中凋亡和前列腺素相关基...

作者：王春霞山西农业大学

学位级别：硕士

胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)是一类流行于生长速度较快的禽类中的骨病,过程中常伴随着细胞凋亡和炎症反应。前列腺素(prostaglandins,PGs)以自分泌或旁分泌的方式参与骨形成和与炎症相关的骨吸收。本课题组前期克隆... 详细信息

胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)是一类流行于生长速度较快的禽类中的骨病,过程中常伴随着细胞凋亡和炎症反应。前列腺素(prostaglandins,PGs)以自分泌或旁分泌的方式参与骨形成和与炎症相关的骨吸收。本课题组前期克隆表达了在TD发生过程中表达有显著差异的谷胱甘肽硫转移酶A3(glutathione-S-transferase A3,GSTA3)和细胞外脂肪酸结合蛋白(extracellular fatty acid-binding protein,Ex-FABP)。为探明重组GSTA3蛋白和重组Ex-FABP蛋白在TD发生和恢复时对红细胞凋亡和前列腺素相关基因表达的影响,本试验运用福美双诱导肉鸡TD后分别注射重组GSTA3蛋白和重组Ex-FABP蛋白,通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学技术对红细胞中凋亡和前列腺素相关基因的表达进行检测。本试验结果表明:(1)在肉鸡的红细胞中存在6种凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bcl-2-associated X,Bax)、鼠双微粒体 2(murine double minute 2,MDM2)、Bcl-2结合抗;凋亡基因 1(Bcl-2-associatedathanogene 1,BAG-1)、Bcl-2 结合抗:凋亡基因 3(Bcl-2-associated athanogene 3,BAG-3)和信号传导与转录激活因子 3(Signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)和 7 种前列腺素相关基因 GSTA3、环氧合醇 2(cyclooxygenase 2,COX-2)、前列腺素 D2 合成酶(Prostaglandin D2 Synthase,PTGDS)、前列腺素 E 合成酶(Prostaglandin E synthase,PTGES)、前列腺素 E 受体 3(prostaglandin E receptor3,PTGER3)、前列腺素 E 受体 4(prostaglandin E receptor4,PTGER4)和前列腺素还原酶 1(Prostaglandin reductase 1,PTGR1)的转录表达,以及 BAG-3、Bax、Bcl-2以及COX-2的蛋白表达。(2)红细胞中凋亡相关基因表达与TD的发生密切相关,而且重组GSTA3蛋白可在TD早期促进所有凋亡相关基因的表达,并在TD恢复阶段恢复正常表达水平,这表明重组GSTA3蛋白可能通过抵抗福美双的毒性作用参与TD的恢复;在TD早期红细胞的免疫调节功能受到抑制,并在恢复阶段通过调节PGs相关基因的表达而促进红细胞的免疫调节功能;此外,重组GSTA3蛋白可调节红细胞中PGs相关基因的表达并参与TD的恢复。(3)TD的发生可以通过下调抗凋亡基因(BAG-1、MDM2、STAT3)的表达而促进红细胞的凋亡,从而影响软骨部位血管化及相应的营养运输,并且Ex-FABP蛋白对多数凋亡相关基因的表达没有明显的促进作用;重组Ex-FABP蛋白在TD发生初期对鸡红细胞没有显著的促进免疫调节的作用;在TD恢复期红细胞恢复了一定的解毒作用和PGE2的合成,从而促进PGs相关的免疫调节反应,而且中剂量Ex-FABP蛋白对这些基因表达的促进作用较好,可能有助于加快TD的恢复进程。总之,本试验证明有多种凋亡和前列腺素相关基因在鸡红细胞中表达,并且各基因的表达与TD的发生密切相关;重组GSTA3蛋白可以通过调节凋亡和前列腺素相关基因的表达来促进红细胞的抗凋亡作用和免疫调节作用;而重组Ex-FABP蛋白可能在TD恢复期参与红细胞的免疫调节作用,但抗凋亡作用不明显。

关键词：谷胱甘肽硫转移酶细胞外脂肪酸结合蛋白肉鸡胫骨软骨发育不良红细胞前列腺素抗凋亡