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肉苁蓉多糖的免疫调节活性及吸收特性研究

肉苁蓉多糖的免疫调节活性及吸收特性研究

作者：王翔岩中国协和医科大学

学位级别：硕士

目的通过考察肉苁蓉多糖(polysaccharides of Cistanche deserticola CDPS)对小鼠脾淋巴细胞增殖及巨噬细胞活化的作用,研究肉苁蓉多糖的免疫调节药理学活性,并通过不同角度和层次对其吸收特性进行研究。方法MTT法检测小鼠脾淋巴细胞... 详细信息

目的通过考察肉苁蓉多糖(polysaccharides of Cistanche deserticola CDPS)对小鼠脾淋巴细胞增殖及巨噬细胞活化的作用,研究肉苁蓉多糖的免疫调节药理学活性,并通过不同角度和层次对其吸收特性进行研究。方法MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖。环磷酰胺(cyclophosphamide CTX)复制免疫功能低下的动物模型,分别测定正常及免疫低下动物脾脏、胸腺指数。胸腺细胞增殖法测定白细胞介素-2(IL-2)活性。采用中性红法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性;Griess试剂法测定NO释放量;L929细胞法及小鼠胸腺细胞法测定TNF-α及IL-1释放。碳粒廓清法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。在建立的Caco-2单层细胞模型上通过测定每孔电阻值(R,比较膜两侧碱性磷酸酶(ALP)活性,确定Caco-2细胞单层的可靠性。测定CDPS经Caco-2单层细胞模型A→B 3h转运后受侧浓度,计算其药效P值,从体外模型判断CDPS的吸收特性;经体外和体内口服给药药效比较及口服给药途径和腹腔注射给药途径药效的比较从不同角度对肉苁蓉多糖口服吸收特性进行判断。结果CDPS在剂量达7.8mg/L时可促进丝裂原(ConA及LPS)活化淋巴细胞增殖及IL-2的分泌,对未活化淋巴细胞剂量需达25mg/L时加药组与对照组吸光度值才有显著性差异。腹腔给药显示CDPS(125mg/kg)可明显提高正常及免疫低下小鼠的脾指数,对因CTX所致胸腺指数的降低也有显著地对抗作用。 CDPS在6.250mg/L剂量范围内可剂量依赖性地增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;在2.800mg/L剂量范围内可使正常和免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放明显增加;在0.56.2mg/L或3.60mg/L范围促进RAW264.7细胞TNF-α或IL-1产生,均具有良好的量效关系。CDPS可在一定程度上提高CTX致免疫功能低下小鼠碳粒廓清指数K。 R值在细胞单层形成过程中稳定增长,细胞模型两侧培养液中ALP活性差异逐步加大,表明建立的Caco-2细胞模型在完整性、细胞极性方面符合药物吸收特性研究的要求,CDPS过Caco-2细胞模型求得P值为9.41×10cm/s＜10×10cm/s;对于相同或相关药效指标,CDPS显示出体外及腹腔给药有效,而口服(体内)无效的特征。结论CDPS明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖,提高正常及免疫抑制小鼠的脾指数,该作用可能与其促IL-2分泌有关。CDPS可显著提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,活化巨噬细胞。显示CDPS是肉苁蓉免疫调节的主要物质基础。但口服吸收不良,因此临床应综合权衡,选择适合的给药方式,以达最佳疗效。

关键词：肉苁蓉多糖淋巴细胞增殖巨噬细胞活化口服吸收 Caco-2 细胞模型

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肉苁蓉多糖脱蛋白工艺的优化

江苏农业科学 2015年第7期43卷 314-315页

作者：肖道安宜春学院化学与生物工程学院江西宜春336000

优选肉苁蓉多糖的脱蛋白工艺,为肉苁蓉多糖纯化提供试验依据。以脱蛋白率为指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag联合法对肉苁蓉粗多糖的脱蛋白效果,采用正交试验优选最佳工艺。结果表明,Sevag法优于酶法和酶-Sevag联合法,Sevag法脱蛋白的... 详细信息

优选肉苁蓉多糖的脱蛋白工艺,为肉苁蓉多糖纯化提供试验依据。以脱蛋白率为指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag联合法对肉苁蓉粗多糖的脱蛋白效果,采用正交试验优选最佳工艺。结果表明,Sevag法优于酶法和酶-Sevag联合法,Sevag法脱蛋白的最佳工艺为:三氯甲烷与正丁醇的体积配合比4∶1,料液体积比1∶3,搅拌40 min,脱蛋白4次。在该工艺下平均脱蛋白率为87.11%,RSD为1.34%;平均多糖保留率为83.05%,RSD为1.54%。试验证明该工艺稳定可靠,适用于肉苁蓉多糖的纯化。

关键词：肉苁蓉多糖脱蛋白 Sevag法酶法酶-Sevag联合法正交试验

肉苁蓉多糖脂质体制备及对鸡新城疫苗免疫效果影响的研究

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肉苁蓉多糖脂质体制备及对鸡新城疫苗免疫效果影响的研究

作者：李科西南大学

学位级别：硕士

肉苁蓉多糖(Polysaccharide of Cistanche deserticola,CDPS)是从植物肉苁蓉中提取的一类高分子活性物质,其可增强巨噬细胞吞噬功能、提高血清溶血素值,同时还具有单独或协同ConA、PHA促进小鼠胸腺淋巴细胞增殖、脾脏淋巴细胞分泌IL-2... 详细信息

肉苁蓉多糖(Polysaccharide of Cistanche deserticola,CDPS)是从植物肉苁蓉中提取的一类高分子活性物质,其可增强巨噬细胞吞噬功能、提高血清溶血素值,同时还具有单独或协同ConA、PHA促进小鼠胸腺淋巴细胞增殖、脾脏淋巴细胞分泌IL-2的能力,显示出广泛的免疫调节功能。但将CDPS作为一种免疫增强剂直接用于兽医临床,存在着体内代谢较快、作用时间较短、使用成本较高等不足之处。脂质体作为一种人工合成的药物靶向载体,对所载药物具有缓释、靶向沉积于网状内皮系统(RES)的特性,能延长药物的作用时间、提高生物利用效率及药物定向作用于免疫系统的强度。本课题利用脂质体包封技术,将CDPS制备成一种新型的免疫增强剂即肉苁蓉多糖脂质体,通过均匀试验设计原理,筛选出制备CDPS脂质体的最佳工艺参数,并以目前仍严重危害养鸡业发展的病毒性传染病鸡新城疫(NewcastleDisease,ND)为研究对象,探讨CDPS脂质体对ND疫苗免疫效果的影响,并从细胞免疫、体液免疫、免疫调节因子(IL-2、IL-4、IFN-γ)活性变化方面,研究CDPS脂质体增强肉鸡免疫机能的可能机制。主要研究内容及结果如下: 1.三种方法提取肉苁蓉多糖的比较研究分别采用水提醇沉法、超声法、超声结合水提法提取肉苁蓉多糖,胰蛋白酶-Sevag法除去蛋白,利用molish鉴别反应、碘-碘化钾反应、多糖水解反应鉴定提取物是否主要为多糖类物质,葸酮-硫酸比色法测定提取物中多糖的含量。结果三种方法的提取物主要均为多糖,其得率分别为1.93%、2.28%、6.06%,纯度分别为65.7%、74.3%、81.2%,说明超声结合水提法提取肉苁蓉多糖效果最好。 2.均匀试验设计法优化肉苁蓉多糖脂质体制备工艺研究采用逆向蒸发法制备CDPS脂质体,透析处理后利用蒽酮-硫酸比色法测定包封率,并以其为CDPS脂质体质量的主要评价指标。根据均匀试验设计原理,按照U*(6)均匀设计表设计试验方案,探讨大豆卵磷脂与氯仿的比例、胆固醇与大豆卵磷脂的比例、肉苁蓉多糖与大豆卵磷脂的比例、磷酸盐缓冲液PH值4个因素(每个因素6水平)对包封率的影响。结果,四个因素分别为7%、1∶5、1∶14、6.6时,CDPS脂质体平均包封率最高,达68.13%,RSD值仅为2.51%,且在此条件下制备的CDPS脂质体在4℃、避光保存120天内,PH值基本稳定,虽有分层现象出现,但保存120天时包封率仍达50.15%。 3.肉苁蓉多糖脂质体对鸡ND苗免疫效果的影响研究选择20日龄健康罗曼肉公鸡60只随机分为4组,即CDPS脂质体(Ⅰ)、CDPS(Ⅱ)、脂质体(Ⅲ)和生理盐水(Ⅳ)组,当试验鸡血清HI抗体效价低于3log2时肌肉注射免疫ND苗,同时,Ⅰ组肌肉注射5mg/ml的CDPS脂质体(500μl/只)、Ⅱ组肌肉注射50mg/ml的CDPS(200μl/只,CDPS含量为Ⅰ组的4倍)、Ⅲ组肌肉注射空白脂质体(500μl/只)、Ⅳ组肌肉注射生理盐水(500μl/只)。分别于免疫前及免疫后第10、20、30天时,翅静脉采血收集血清,测定其HI抗体效价及IgG含量,同时对免疫后30天时所收集血清进行鸡胚中和保护试验。结果免疫后10天时,试验组及对照组HI抗体效价明显升高;免疫后20天时,Ⅰ组极显著高于生理盐水对照组(P＜0.01),略高于Ⅱ、Ⅲ组;免疫后30天时,四组血清HI抗体效价均呈降低趋势,但Ⅰ组显著高于Ⅱ组和Ⅳ组(P＜0.05),与空白脂质体组无显著差异(P＞0.05);免疫鸡血清IgG含量变化趋势显示:免疫后10天时,Ⅰ组IgG水平较其它组略高,但各组间无显著差异(P＞0.05),Ⅰ组免疫后第20、30天,Ⅱ、Ⅲ组免疫后第30天时,血清IgG水平均极显著地高于对照组(P＜0.01),免疫后30天时,Ⅰ组还极显著高于CDPS、空白脂质体组(P＜0.01),Ⅰ组免疫后10天至30天时,血清IgG水平呈逐渐升高趋势,其它组免疫后10天至20天时,血清IgG水平呈升高趋势,但至30天时,血清IgG水平开始下降;中和试验结果显示:CDPS脂质体组鸡胚死亡率明显低于CDPS、空白脂质体及生理盐水组,中和指数以CDPS脂质体组最高。结果说明,CDPS脂质体对肉鸡免疫机能的促进作用最强。 4.肉苁蓉多糖脂质体对鸡免疫ND苗后血液中T淋巴细胞、IL、IFN活性的影响研究在对肉鸡进行ND苗抗体检测的同时,于免疫后15天,每组随机取6羽,翅静脉无菌采集抗凝血,采用酸性α-乙酸萘酯酶染色试验(ANAE)和淋巴细胞转化试验(MTT法)分别测定T淋巴细胞ANAE阳性率及增殖活性。免疫后20天时,每组随机取8羽翅静脉采血分离血清,采用ELISA方法测定血清中细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的含量。结果表明,淋巴细胞转化率在四组间无显著差异(P＞0.05),淋巴细胞ANAE阳性率在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间无显著差

关键词：鸡肉苁蓉多糖脂质体免疫增强剂白细胞介素

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肉苁蓉多糖对人成纤维细胞的增殖作用

中成药 1998年第4期20卷 43-44页

作者：高慧严华张洪泉童鲲扬州大学医学院 225001

毛细管电泳电化学检测法研究肉苁蓉多糖的单糖组成

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中国中药杂志 2007年第19期32卷 2073-2075页

作者：龚立冬曹玉华侯建霞汪云江南大学化学与材料工程学院江苏无锡214122

肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生高等寄生植物,具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年之功效~([1]).……

关键词：肉苁蓉多糖电化学检测法毛细管电泳单糖组成盐生肉苁蓉 Beck 管花肉苁蓉 salsa

肉苁蓉多糖对鸡免疫ND苗后血液中T淋巴细胞及IFN-γ活性的影响

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四川畜牧兽医 2008年第8期35卷 29-30,32页

作者：王成蓉吴金华涂丽蓉李科四川省蒲江县农村发展局四川蒲江611630 西南大学动物医学系重庆荣昌402460

试验观察了肉苁蓉多糖对肉鸡免疫新城疫苗后T淋巴细胞活性及IFN-γ含量的影响。结果:肉苁蓉多糖使用剂量5、10、20mg/只时,免疫后15d时,T淋巴细胞转化率分别为1.20±0.11、1.30±0.13、1.79±0.32,对照组为1.22±0.29;免疫后20d时,外周... 详细信息

试验观察了肉苁蓉多糖对肉鸡免疫新城疫苗后T淋巴细胞活性及IFN-γ含量的影响。结果:肉苁蓉多糖使用剂量5、10、20mg/只时,免疫后15d时,T淋巴细胞转化率分别为1.20±0.11、1.30±0.13、1.79±0.32,对照组为1.22±0.29;免疫后20d时,外周血中IFN-γ含量分别为23.23±6.13、25.95±1.13、29.95±2.23pg/ml,对照组为20.89±5.97pg/mL;肉苁蓉多糖使用剂量10、20mg/只时,试验组T淋巴细胞活性及IFN-γ含量显著或极显著高于对照组((P肉苁蓉多糖可能通过提高T细胞活性及IFN-γ含量来增强肉鸡免疫功能。

关键词：肉苁蓉多糖新城疫 T淋巴细胞 γ-干扰素

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肉苁蓉多糖的碱提取及其化学分析

农产食品科技 2008年第3期2卷 32-34,37页

作者：高明田子玉蔡红梅高峰吉林省农业科学院长春130124

用4％NaOH提肉苁蓉多糖，并对其进行分析。粗提肉苁蓉多糖蛋白含量为7．55％，其中97．12％为游离态，其余部分为结合态；总糖含量为63．84％；大体含有4个分子量级别的组分，平均分子量在67．18万以上，其中分子量在128．29万左右的占4... 详细信息

用4％NaOH提肉苁蓉多糖，并对其进行分析。粗提肉苁蓉多糖蛋白含量为7．55％，其中97．12％为游离态，其余部分为结合态；总糖含量为63．84％；大体含有4个分子量级别的组分，平均分子量在67．18万以上，其中分子量在128．29万左右的占48．64％。肉苁蓉多糖的糖基组成为D-葡萄糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-半乳糖醛酸和D-木糖，它们的摩尔比约为22．77：12．40：8．67：6．56：3．15：2．52：1．00。此结果显示，碱提取的肉苁蓉多糖是糖基组成比较简单但构型和碳原子数多样的大分子酸性杂多糖。

关键词：肉苁蓉肉苁蓉多糖糖基测定碱提取

肉苁蓉多糖通过激活Wnt/β-catenin信号通路对6-HODA致帕金森病大鼠的神经保护作用

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中西医结合心脑血管病杂志 2020年第8期18卷 1227-1230页

作者：尹帅领王海波杨硕郑州大学附属郑州中心医院郑州450007

目的探讨肉苁蓉多糖通过激活Wnt/β-catenin信号通路对6-羟多巴胺(6-HODA)所致帕金森病大鼠受损神经的保护作用。方法将45只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和肉苁蓉多糖治疗组,采用6-HODA立体定向微量注射制备帕金森病大鼠模型。... 详细信息

目的探讨肉苁蓉多糖通过激活Wnt/β-catenin信号通路对6-羟多巴胺(6-HODA)所致帕金森病大鼠受损神经的保护作用。方法将45只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和肉苁蓉多糖治疗组,采用6-HODA立体定向微量注射制备帕金森病大鼠模型。第32天观察实验动物行为学改变,之后将大鼠处死,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)检测大鼠脑黑质内Wnt1、β-catenin蛋白表达;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组游泳静止时间缩短,自主活动站立次数下降,肉苁蓉多糖治疗后上述两种行为得到恢复;模型组脑黑质内Wnt1、β-catenin蛋白水平低于假手术组;肉苁蓉多糖治疗组脑黑质内Wnt1、β-catenin蛋白水平高于模型组(P肉苁蓉多糖治疗后,帕金森病大鼠脑黑质内GSK-3βmRNA水平下降(P肉苁蓉多糖能改善6-HODA所致帕金森病SD大鼠模型临床症状,这种作用可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制GSK-3β活性,进而发挥多巴胺神经保护作用。

关键词：帕金森病肉苁蓉多糖 Wnt/β-catenin信号通路神经保护大鼠

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肉苁蓉多糖药理作用研究概况

食品与药品 2015年第2期17卷 136-139页

作者：高晓霞陈君彭艳丽山东中医药大学药学院山东济南250355 中国医学科学院药用植物研究所北京100193

肉苁蓉为国家二级保护植物,含多种活性成分,多糖是其主要活性成分之一。本文综述了肉苁蓉多糖的免疫调节、抗衰老、改善脾虚、抗病毒抗肿瘤、促进造血等方面的药理作用及作用机制,以冀为其合理利用提供帮助。

关键词：肉苁蓉多糖提取工艺药理作用作用机制