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Versican基因RNAi慢病毒载体的构建及其对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用

第三军医大学学报 2015年第14期37卷 1460-1465页

作者：封明霞伍津津杨桂红第三军医大学大坪医院野战外科研究所呼吸科重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆400042

目的构建Versican基因RNAi慢病毒载体并研究Versican对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用。方法根据人Versican基因序列,构建4个携带RNAi序列的慢病毒载体,利用293T细胞进行慢病毒包装。实验分为Control组(不做处理)、NC组(用空慢病毒载... 详细信息

目的构建Versican基因RNAi慢病毒载体并研究Versican对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用。方法根据人Versican基因序列,构建4个携带RNAi序列的慢病毒载体,利用293T细胞进行慢病毒包装。实验分为Control组(不做处理)、NC组(用空慢病毒载体包装的病毒转染细胞)和KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒感染组。应用KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒及NC慢病毒感染H1299细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Real-time PCR检测Versican的表达,筛选出感染效率和特异性最高的慢病毒载体进行下一步研究。用慢病毒感染毛乳头细胞后,用Real-time PCR检测Versican基因的表达,并用Western blot检测Versican、ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达,应用光镜观察毛乳头的生长情况。结果成功构建4种慢病毒载体,其中KD2慢病毒感染H1299细胞较其他慢病毒、Control和NC组显著下调Versican mRNA的表达(P聚集性生长的特性消失。结论成功构建了Versican基因RNAi慢病毒载体。Versican基因通过c-JUN-ADAMTS-4通路调控毛乳头细胞的聚集性生长。

关键词：多功能蛋白聚糖类 RNA干扰慢病毒毛乳头细胞聚集性生长

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Wnt-3a信号途径对毛乳头细胞聚集性生长作用的初步研究

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中华皮肤科杂志 2009年第11期42卷 767-770页

作者：杨亚东伍津津李元朝朱堂友陈凌第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆400042

目的探讨Wnt-3a信号途径对体外培养的毛乳头细胞聚集性生长特性的影响。方法构建重组腺病毒pAdEasy-1／Wnt-3a，并以该重组腺病毒感染体外培养的毛乳头细胞，观察细胞生长特性的改变；应用激光共聚焦技术和Western印迹检测β-连环素及... 详细信息

目的探讨Wnt-3a信号途径对体外培养的毛乳头细胞聚集性生长特性的影响。方法构建重组腺病毒pAdEasy-1／Wnt-3a，并以该重组腺病毒感染体外培养的毛乳头细胞，观察细胞生长特性的改变；应用激光共聚焦技术和Western印迹检测β-连环素及相关蛋白多功能蛋白聚糖的表达情况。结果Wnt-3a的过表达可以有效诱导毛乳头细胞聚集性生长。激光共聚焦显微镜检查提示，Wnt～3a过表达的毛乳头细胞β-连环素和多功能蛋白聚糖的荧光强度分别由34．16±9．62和18．81±9．59升高至87．35±17．28和92．18±18．39（t值分别为11．98，17．88，P值均〈0．01）；Western印迹也提示，Wnt-3a过表达的毛乳头细胞β-连环素和多功能蛋白聚糖的表达强度由15．27±2．17和19．32±2．46升高至60．09±7．24和58．46±2．78（t值分别为10．10，20．63，P值均〈0．01）。结论Wnt-3a是调节毛乳头细胞聚集性生长的重要分子，主要通过以β-连环素为核心蛋白的经典途径发挥调节作用，多功能蛋白聚糖作为Wnt信号途径的重要相关基因，是该调节的重要环节。

关键词： Wnt蛋白质类毛囊聚集性生长 β-连环素多功能蛋白聚糖类

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人毛乳头细胞在聚乙烯乙烯醇膜上的生长特征研究

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临床皮肤科杂志 2010年第7期39卷 407-410页

作者：李中明范卫新许文嵘林永丽崔毓桂南京医科大学第一附属医院皮肤性病科江苏南京210029 南京医科大学第一附属医院临床生殖中心实验室江苏南京210029

目的:观察人毛乳头细胞聚集性生长特征。方法:将人毛乳头细胞在聚乙烯乙烯醇(EVAL)膜上以不同的密度梯度进行体外培养,观察人毛乳头细胞聚集性生长特征,与普通细胞培养板培养作对照,并对膜上培养的人毛乳头细胞进行鉴定,电镜扫描观察。... 详细信息

目的:观察人毛乳头细胞聚集性生长特征。方法:将人毛乳头细胞在聚乙烯乙烯醇(EVAL)膜上以不同的密度梯度进行体外培养,观察人毛乳头细胞聚集性生长特征,与普通细胞培养板培养作对照,并对膜上培养的人毛乳头细胞进行鉴定,电镜扫描观察。结果:将传代培养的人毛乳头细胞以(80～120)×10~3个/1.1 cm^2接种至铺有EVAL膜上培养时,平均3～5 d后出现人毛乳头细胞的球形聚集体,对照组中人毛乳头细胞呈现平铺至多层聚集生长的特征,通过α-平滑肌肌动蛋白(SMA)及碱性磷酸酶对毛乳头细胞形成的球形聚集体进行免疫组化检测、电镜扫描发现其与刚分离的人头皮毛囊毛乳头形态相似。将形成的毛乳头细胞微聚体在普通培养板中重新贴壁,仍具有多层平铺生长至多层聚集生长特征。结论:在EVAL膜上培养的人毛乳头细胞具有聚集成球形生长的能力,其比在普通培养基上培养更能体现毛乳头细胞聚集性生长的特征,且形态上与刚贴壁的人毛乳头相似,为研究毛乳头细胞聚集性生长特征及为毛乳头细胞诱导毛囊再生提供了新的思路。

关键词：毛乳头细胞聚乙烯乙烯醇膜聚集性生长

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