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基于聚左旋多巴纳米颗粒的新型冠状和甲流病毒诊断试纸的研制

基于聚左旋多巴纳米颗粒的新型冠状和甲流病毒诊断试纸的研制

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作者：何康松浙江大学

学位级别：硕士

2019年底新型冠状病毒肺炎席卷了全球,给人类社会造成了巨大的损失。在病毒感染的早期阶段,快速、准确地诊断严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)是控制疫情传播的关键。SARS-CoV-2感染的早期症状(主要是咳嗽和发烧)与常见的... 详细信息

2019年底新型冠状病毒肺炎席卷了全球,给人类社会造成了巨大的损失。在病毒感染的早期阶段,快速、准确地诊断严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)是控制疫情传播的关键。SARS-CoV-2感染的早期症状(主要是咳嗽和发烧)与常见的呼吸道病毒相似,如甲型流感病毒(Flu A),这使得及时指导临床治疗比较困难。另一方面,Flu A的季节性流行也对人民健康造成了很大影响,早日诊断与及时的抗病毒药物治疗对于减轻症状和预防重症具有重要意义。因此,临床上迫切需要准确、快速地诊断Flu A和SARS-CoV-2的方法。侧流免疫层析技术(LFIA)是即时检测(POCT)中的一种,主要依靠抗原抗体的特异性免疫反应,使得纳米标记材料能够在试纸上聚集显色,达到检测目标物的目的。目前市面上的免疫层析试纸大多以胶体金纳米颗粒为标记材料,但是应用胶体金的检测试纸大多存在灵敏度低、显色度低及背景脏等问题,同时胶体金纳米颗粒与捕获抗体的结合力为静电作用力,也存在结合不稳定等问题。这些不足导致胶体金检测试纸在一些特定情况下(如检测低浓度样品)可靠性不足,得不到准确的结果,限制了 LFIA在即时检测中的进一步发展。针对这种情况,一些新型的标记纳米材料被研发出来应用于试纸的制备,但是大多存在制备繁琐等缺点。因此,寻找一种新型的制备简单的纳米颗粒对推动LFIA的应用具有重大的意义。本文利用一步合成法制备聚左旋多巴纳米颗粒(PLDA NPs),通过探究不同的反应条件(不同反应时间、原料配比、氧气含量)来达到制备粒径可控纳米颗粒的目的,并对PLDA NPs的保存条件及显色度进行了探究。将PLDA NPs作为标记材料应用于LFIA制备了新型冠状病毒检测试纸以及甲型流感病毒检测试纸。(1)成功制备新型冠状病毒抗原检测试纸:探究了新型冠状病毒抗原特异性抗体与微球的偶联方法,通过对偶联pH值、抗体与PLDANPs偶联量以及NC膜检测线(T线)上多抗浓度的优化,制备了高信噪比和高灵敏度的新型冠状病毒抗原检测试纸。测试了试纸的最低检测浓度,并对同一批试纸以及不同批次试纸的变异系数(CV值)进行分析,得到了重复性好,灵敏度高的新冠抗原检测试纸,其最低检测限为5 pg/mL,比市售新型冠状病毒抗原检测试纸(胶体银法、乳胶法)的灵敏度更高。(2)成功制备甲型流感抗原检测试纸:探究了甲型流感抗原特异性抗体与微球的偶联方法,通过对偶联pH值、抗体与PLDANPs偶联量以及NC膜T线上多抗浓度的优化,制备了高信噪比和高灵敏度的甲型流感抗原检测试纸。测试了试纸的最低检测浓度,并对同一批试纸以及不同批次试纸的变异系数进行分析,得到了重复性好,灵敏度高的甲型流感抗原检测试纸,其最低检测限为0.1 ng/mL,比市售甲型流感抗原检测试纸(胶体金法)的灵敏度更高。

关键词：即时检测聚左旋多巴纳米颗粒侧流免疫层析新型冠状病毒甲型流感病毒

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