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耻垢分枝杆菌中KatG和小RNA Ms2功能的研究

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耻垢分枝杆菌中KatG和小RNA Ms2功能的研究

作者：肖金凤华中农业大学

学位级别：硕士

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的呼吸道传染性疾病,现今结核病的疫情并未得到完全控制,仍是全世界范围内最致命的传染病杀手。随着治疗结核病的药物的发现和应用,耐药结核病病例越来越多,为治疗结核病带来了... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的呼吸道传染性疾病,现今结核病的疫情并未得到完全控制,仍是全世界范围内最致命的传染病杀手。随着治疗结核病的药物的发现和应用,耐药结核病病例越来越多,为治疗结核病带来了很大的挑战。因此,对结核分枝杆菌耐药机制的研究显得尤为重要和紧迫。耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)与结核分枝杆菌遗传背景相似,并且由于其生长快速、为非致病菌作为模式菌株被广泛用于结核分枝杆菌的研究。(1)耻垢分枝杆菌中KatG功能的研究kat G编码过氧化氢酶-过氧化物酶KatG,KatG能够保护分枝杆菌免受巨噬细胞吞噬溶酶体中活性氧和氮中间体的损伤。此外,KatG能够活化前体药物异烟肼(isoniazid,INH),活化的异烟肼才具有杀灭分枝杆菌的能力。因此,kat G在分枝杆菌耐异烟肼中起到重要作用,耐异烟肼结核分枝杆菌中kat G的突变最为常见。耻垢分枝杆菌mc155中有3个kat G基因,分别为kat G1(MSMEG＿6384)、kat G2(MSMEG＿3461)和kat G3(MSMEG＿3729),为此对3个kat G的功能进行研究。首先通过q RT-PCR实验分析了3个kat G在耻垢分枝杆菌中的转录情况,发现kat G的转录受到过氧化氢(HO)的诱导。通过敲除kat G1、kat G2和kat G3,分别得到了?kat G1、?kat G2和?kat G3 3株单敲菌株,?kat G1?kat G2、?kat G1?kat G3和?kat G2?kat G3 3株双敲菌株以及?kat G1?kat G2?kat G3三敲菌株。通过对出发菌株和不同kat G敲除菌株的过氧化氢耐受实验、过氧化物酶活和过氧化氢酶活染色等一系列实验。证明了KatG1和KatG2具有过氧化氢酶-过氧化物酶活性,在耻垢分枝杆菌抵御氧化压力方面起主要作用,KatG3不具有过氧化氢酶-过氧化物酶酶活性;通过对kat G敲除菌株的异烟肼耐受实验和体外氧化异烟肼实验,表明KatG1在活化异烟肼方面起主要作用,KatG2活化异烟肼能力较KatG1弱,KatG3对活化异烟肼基本没有贡献。本课题对耻垢分枝杆菌中3个kat G基因的功能进行系统地研究,有助于我们更加深入了解分枝杆菌耐异烟肼机制,为耐异烟肼结核病的治疗奠定基础。(2)耻垢分枝杆菌中Ms2 sRNA功能的研究非编码RNA(non-coding RNA,nc RNA)是一类不编码蛋白质的RNA,因其长度较短,又称为小RNA(small RNA,sRNA)。非编码RNA广泛存在于多种生物体内,参与调节基因转录、m RNA稳定性、RNA分子加工与修饰等多种生物学过程。通过转录组学数据分析,我们发现在MSMEG＿0373和MSMEG＿0374基因之间存在一个高表达的小RNA,将其命名为Ms2。过表达Ms2之后,令人诧异的是,出现两种大小形态不同的菌落:小的菌落表面光滑,大菌落表面粗糙,且大小菌落在运动性、沉降、生物被膜形成以及药物抗性上有明显差异。进一步研究发现,大小菌落表型的差异并不随着过表达质粒的消除而消失,过表达Ms2引起表型的差异是基因突变的结果。通过分析转录组差异数据,我们预测了Ms2可能的靶标。本研究对耻垢分枝杆菌Ms2 sRNA过表达菌株产生的大小菌落进行了相关的表型探究,为下一步Ms2靶标的寻找和鉴定提供了基础,丰富了sRNA的调控网络。

关键词：耻垢分枝杆菌结核分枝杆菌异烟肼 KatG sRNA 小菌落突变体

耻垢分枝杆菌诱导中性粒细胞胞外诱捕网形成的研究

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1154-1158页

作者：臧鑫鑫党光辉王忠星刘虹秀崔子寅崔莹莹宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞抵御病原微生物重要的防御机制之一,NETs能够在体内外条件下捕获并杀灭病原微生物。为研究模式菌株-耻垢分枝杆菌(MS)与中性粒细胞的相互作用,本研究通过分离牛外周血中性粒细胞,将标记红色荧光... 详细信息

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞抵御病原微生物重要的防御机制之一,NETs能够在体内外条件下捕获并杀灭病原微生物。为研究模式菌株-耻垢分枝杆菌(MS)与中性粒细胞的相互作用,本研究通过分离牛外周血中性粒细胞,将标记红色荧光的MS与中性粒细胞共孵育,通过激光共聚焦观察NETs的形成;采用Pi-coGreen~?dsDNA试剂盒定量分析胞外ds DNA的释放量;并且通过菌落计数统计MS的存活情况。结果显示,MS能够诱导中性粒细胞形成NETs,胞外游离DNA的释放量随着时间的延长而逐渐增多,与对照组相比差异极显著(p分枝杆菌重要蛋白功能的研究提供参考依据。

关键词：耻垢分枝杆菌中性粒细胞中性粒细胞胞外诱捕网

结核分枝杆菌PE22/PPE36融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能影响的研究

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中国人兽共患病学报 2023年第6期39卷 523-532页

作者：杨雨婷李玉洁余海燕杨国平大理大学基础医学院医学微生物学与免疫学教研室大理671000 大理大学云南省昆虫生物医药研发重点实验室大理671000

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达... 详细信息

目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6~8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达。将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H_(2)O_(2)、SDS、溶菌酶、NaNO_(2)、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况。结果与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO_(2)、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t 3 h=0.082,t 6 h=0.174,t 9 h=0.355;NaNO_(2):t 3 h=0.950,t 6 h=1.274;低pH:t 3 h=1.869,t 6 h=1.119,t 9 h=0.091;均P>0.05);在H_(2)O_(2)、SDS压力条件下存活率明显降低(H_(2)O_(2):t 6 h=4.35,t 8 h=4.80;SDS:t 4 h=10.43,t 6 h=2.793;均P0.05),在RAW 264.7细胞内的存活率明显降低(t_(48)h=5.509,t_(72)h=5.417;均P<0.05)。结论重组融合蛋白PE22/PPE36可改变Ms的表型并调控巨噬细胞的免疫应答。

关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌 PE22/PPE36融合蛋白巨噬细胞

耻垢分枝杆菌中LprO蛋白过表达促进巨噬细胞凋亡

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现代生物医学进展 2022年第21期22卷 4001-4008页

作者：徐书琴沈莉芳刘含梅唐雨婷张鹭复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学生命科学学院微生物系上海200438

目的:探究分枝杆菌脂蛋白LprO对分枝杆菌-巨噬细胞相互作用的影响。方法:使用在线网站分析耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.smeg)LprO蛋白的CD4^(+)T、CD8^(+)T以及细胞毒性T细胞(Cytotoxic T Lymphocytes,CTL)抗原表位数量,评估LprO蛋白的免疫原性。构建lprO过表达的重组耻垢分枝杆菌M.smeg::pMV261-lprO,以转入空载质粒pMV261的M.smeg::pMV261菌株作为对照,分析过表达lprO对M.smeg菌株以及细菌-巨噬细胞互作的影响。结果:LprO蛋白中预测的CD4^(+)T、CD8^(+)T以及CD8^(+)CTL细胞表位数与Ag85A蛋白相当,具有较好的研究潜力。经实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)验证,M.smeg::pMV261-lprO菌株中,lprO表达量显著高于对照菌株,过表达菌株构建成功。lprO过表达不改变M.smeg菌落形态、细菌形态、细菌体外生长能力和巨噬细胞内生长能力。细菌侵染巨噬细胞Raw264.7,流式细胞技术检测显示,M.smeg::pMV261-lprO在细胞侵染前期能显著促进巨噬细胞凋亡。结论:分枝杆菌LprO蛋白可能具备与Ag85A蛋白相当的T细胞表位数,能在激起宿主的免疫反应中发挥较为重要的作用。在M.smeg中过表达LprO后能诱导侵染前期的巨噬细胞凋亡,参与细菌-宿主相互作用。综上,LprO蛋白或许有作为新型疫苗成分或药物靶标的潜力。

关键词：耻垢分枝杆菌脂蛋白 LprO 抗原表位凋亡

耻垢分枝杆菌MSMEG_4259的基因组维护功能研究

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微生物与感染 2022年第5期17卷 273-281页

作者：邓茗芝许原原吕亮东复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

MSMEG_4259基因及其同源基因广泛存在于分枝杆菌属中。蛋白序列分析显示,MSMEG_4259包含DEDDh核酸外切酶结构域以及一个类似UvrC的核酸内切酶结构域,提示其可能参与DNA修复。为了探究MSMEG_4259的生理功能,本研究利用同源重组方法在耻... 详细信息

MSMEG_4259基因及其同源基因广泛存在于分枝杆菌属中。蛋白序列分析显示,MSMEG_4259包含DEDDh核酸外切酶结构域以及一个类似UvrC的核酸内切酶结构域,提示其可能参与DNA修复。为了探究MSMEG_4259的生理功能,本研究利用同源重组方法在耻垢分枝杆菌(Mycolicibacterium smegmatis)构建了MSMEG_4259基因敲除(ΔMs4259)菌株,并采用波动试验测定菌株在对数生长期以及H2O2处理后的利福平耐药突变频率。结果显示,ΔMs4259菌株的利福平耐药自发突变频率较野生型菌株升高1.9倍(PC:G突变概率较野生型菌株上升约10倍,有研究证明该突变谱是DNA氧化损伤的常见突变。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)结果显示,野生型菌株的MSMEG_4259表达在H2O2处理后上调约7倍,提示该基因在转录水平参与了氧化压力应答。野生型菌株与ΔMs4259菌株在氧氟沙星、叔丁基过氧化氢和紫外线处理下的存活率无显著差异,提示MSMEG_4259不参与耻垢分枝杆菌对上述DNA损伤剂的耐受。本研究初步揭示了MSMEG_4259参与耻垢分枝杆菌基因组维护的生理功能、突变谱及转录调控等特性,为进一步研究其同源基因在结核分枝杆菌致病和耐药中的作用机制奠定了基础。

关键词： MSMEG_4259 耻垢分枝杆菌 DNA损伤 DNA修复

耻垢分枝杆菌中DNA损伤与SOS反应的实验研究

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中国病原生物学杂志 2014年第10期9卷 880-884,940页

作者：吴雯梅建沈鑫张曦陈敏上海市疾病预防控制中心上海200336

目的探讨基因毒性物质介导的DNA损伤引起分枝杆菌SOS反应的作用。方法选择耻垢分枝杆菌为分枝杆菌模式细菌,通过紫外线损伤试验检测耻垢分枝杆菌对紫外线的敏感性,通过2倍稀释法测定利福平和氧氟沙星的最小抑菌浓度(MIC)。分别用紫外线... 详细信息

目的探讨基因毒性物质介导的DNA损伤引起分枝杆菌SOS反应的作用。方法选择耻垢分枝杆菌为分枝杆菌模式细菌,通过紫外线损伤试验检测耻垢分枝杆菌对紫外线的敏感性,通过2倍稀释法测定利福平和氧氟沙星的最小抑菌浓度(MIC)。分别用紫外线和次抑菌浓度(1/2MIC)抗生素处理耻垢分枝杆菌,在不同时间点收集菌液,以看家基因sigA为内参,采用实时定量PCR相对定量方法检测dnaE2、recA和recX等SOS基因表达水平的变化。结果紫外线暴露45s后耻垢分枝杆菌的存活率为50%,利福平和氧氟沙星的MIC分别是32μg/ml和1μg/ml。耻垢分枝杆菌dnaE2和recX等SOS基因表达水平在紫外线下暴露45s后即开始上升,recA的表达水平在紫外线暴露3h后显著上升。耻垢分枝杆菌dnaE2和recX基因表达水平在1/2MIC的利福平作用后1h或在1/2MIC的氧氟沙星作用0h后上升,recA的表达水平在1/2MIC的利福平或氧氟沙星作用3h时显著升高。结论紫外线、抗生素等基因毒性物质可以导致耻垢分枝杆菌DNA损伤及SOS基因表达水平上升。

关键词：耻垢分枝杆菌基因损伤 SOS反应 dnaE2 recA recX

表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第9期38卷 789-793页

作者：李敏英王楚彤袁美丽卢思彤钱中清李柏青许涛汪洪涛慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EG... 详细信息

目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,获得EGFP的编码基因,将扩增产物克隆到载体pALACE上,建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中,通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后涂片观察,并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞,观察是否有GFP表达。结果正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌,证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达,并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。

关键词：绿色荧光蛋白(GFP) 耻垢分枝杆菌结核病

耻垢分枝杆菌细胞全裂解物抵御宿主免疫清除作用研究

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耻垢分枝杆菌细胞全裂解物抵御宿主免疫清除作用研究

作者：徐亚楠大连医科大学

学位级别：硕士

肺结核病是一种古老的疾病,是由肺结核分枝杆菌引发的呼吸系统传染性疾病。肺结核分枝杆菌可潜伏性、持续性传播,不易被免疫系统识别,并具有高耐药特性。肺结核分枝杆菌为胞内菌,能够躲避免疫系统攻击杀伤,从而可以长时间在宿主体内潜... 详细信息

肺结核病是一种古老的疾病,是由肺结核分枝杆菌引发的呼吸系统传染性疾病。肺结核分枝杆菌可潜伏性、持续性传播,不易被免疫系统识别,并具有高耐药特性。肺结核分枝杆菌为胞内菌,能够躲避免疫系统攻击杀伤,从而可以长时间在宿主体内潜伏生存。当机体免疫系统功能下降时,潜伏在宿主细胞内的肺结核分枝杆菌大量爆发,继而引起严重的肺部炎性疾病,影响人类的健康。研究肺结核分枝杆菌侵染宿主后躲避免疫系统攻击的机制,对于阐明肺结核病发病机制及研发新型抗肺结核药物具有重大意义。为了解析肺结核分枝杆菌的免疫逃避机制,本论文以耻垢分枝杆菌细胞全裂解物(whole cell lysis,WCL)为研究对象,研究全裂解物与宿主免疫系统早期相互作用的免疫学特征指标,为后续逐级分析全裂解物的免疫效应成分,最终确定免疫效应分子奠定基础。目的:探究耻垢分枝杆菌细胞全裂解物对细菌在宿主肺部清除速率的影响及对宿主早期免疫系统调节作用模式的探究。方法:本论文通过气溶胶发生方法优化小鼠模型,模拟肺结核分枝杆菌通过呼吸系统感染人体的过程。利用与肺结核分枝杆菌具有高度相似性并且无致病性的耻垢分枝杆菌作为模拟菌,将容易被机体快速识别并全部清除的非致病性的大肠杆菌作为对照细菌,比较大肠杆菌与耻垢分枝杆菌两种细菌在小鼠肺部清除速率的差异;用耻垢分枝杆菌细胞全裂解物保护大肠杆菌后,研究其在宿主体内清除速率的改变及宿主免疫系统应答方式的改变;对比耻垢分枝杆菌细胞全裂解物和大肠杆菌细胞全裂解物单独作用于宿主所产生的免疫系统应答方式的改变,进一步验证耻垢分枝杆菌细胞全裂解物对宿主免疫系统的特殊作用模式。通过细菌计数统计(CFU)计算对比细菌在体内清除速率及差异,小鼠肺组织切片HE染色研究免疫病理学改变,酶联吸附免疫测定(ELISA)检测小鼠肺部免疫因子IFN-γ和IL-10的表达,细胞因子微球检测技术(CBA)检测小鼠体液免疫因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、TNF、IFN-γ的表达。结果:(1)耻垢分枝杆菌在小鼠肺部的清除速率低于大肠杆菌;在14h时大肠杆菌清除完毕,耻垢分枝杆菌尚未完全清除,因此14h为差异最明显阶段,所以以取样到14h作为早期免疫反应研究的基础;用耻垢分枝杆菌细胞全裂解物保护大肠杆菌后,大肠杆菌在宿主体内的清除速率降低,耻垢分枝杆菌细胞全裂解物保护后的大肠杆菌14h时在体内尚未清除完毕。(2)HE染色免疫病理学结果显示大肠杆菌组引起免疫细胞聚集程度大于耻垢分枝杆菌组及耻垢分枝杆菌细胞全裂解物保护后的大肠杆菌组,差异显著(P杆菌细胞全裂解物引起免疫细胞聚集程度亦大于耻垢分枝杆菌细胞全裂解物组,两者差异极显著(P耻垢分枝杆菌感染小鼠肺部后,肺部属促炎因子的IFN-γ分泌低于大肠杆菌感染组,而与IFN-γ相互拮抗的抑炎因子IL-10分泌高于大肠杆菌感染组(P耻垢分枝杆菌细胞全裂解物保护大肠杆菌后引起肺部促炎因子IFN-γ分泌程度随清除时间增加而逐渐降低,而肺部抑炎因子IL-10分泌程度随清除时间增加而逐渐升高;耻垢分枝杆菌细胞全裂解物感染引发促炎因子IFN-γ分泌低于大肠杆菌细胞全裂解物感染组,而肺部抑炎因子IL-10分泌高于大肠杆菌细胞全裂解物感染组(P耻垢分枝杆菌感染宿主后分泌属Th1型细胞亚群的促炎免疫细胞因子IFN-γ、IL-17和TNF低于大肠杆菌感染组,然而与Th1型免疫因子相互拮抗的Th2型细胞亚群的抑炎因子IL-4、IL-10分泌高于大肠杆菌感染组(P耻垢分枝杆菌细胞全裂解物保护大肠杆菌后引起宿主抑炎因子IL-4分泌增加(P耻垢分枝杆菌细胞全裂解物单独作用机体引发分泌抑炎因子IL-10明显高于大肠杆菌细胞全裂解物感染组(P耻垢分枝杆菌细胞全裂解物是导致耻垢分枝杆菌清除速率低、不易被机体所清除的主要因素。其机制可能是通过降低宿主免疫系统炎性攻击,降低Th1型免疫细胞对细菌的攻击,增加Th2型细胞因子分泌从而抑制Th1型细胞因子的分泌,进而为细菌可以在宿主体内长时间存活提供有利条件。

关键词：耻垢分枝杆菌细胞全裂解物免疫逃逸细胞因子

耻垢分枝杆菌引发酶DnaG与c-di-GMP相互作用的结构生物学研究

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耻垢分枝杆菌引发酶DnaG与c-di-GMP相互作用的结构生物学研究

作者：陈湘东华中农业大学

学位级别：硕士

结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病,严重影响着人类的健康。全世界有三分之一的人感染了结核病,其中约有10%的人的结核病会被激活并爆发,大部分人无明显症状但终生都有疾病发作的风险。有研究表明结核病的爆发与结核杆菌DNA的复... 详细信息

结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病,严重影响着人类的健康。全世界有三分之一的人感染了结核病,其中约有10%的人的结核病会被激活并爆发,大部分人无明显症状但终生都有疾病发作的风险。有研究表明结核病的爆发与结核杆菌DNA的复制相关,但是关于结核病在人体内的潜伏与被激活的机理并不清楚。耻垢分枝杆菌是研究结核病机理的模式生物。引发酶DnaG是DNA复制过程中合成短链RNA引物的酶,有研究表明在耻垢分枝杆菌中,引物酶DnaG与c-di-GMP(环鸟苷二磷酸)存在相互作用,但是具体的结合位点与机理并不清楚。本课题以耻垢分枝杆菌引物酶DnaG和c-di-GMP为研究材料,旨在解析DanG和c-di-GMP的复合物结构,分析结合位点和机理。我们首先通过对DnaG进行生物信息学的分析,分析其各个结构域的功能关系,然后对预测与c-di-GMP有相互作用的蛋白片段进行表达纯化。我们尝试多种方法后对最终得到的蛋白晶体进行优化,并成功解析了 DnaG催化结构域的晶体结构,发现其GTP结合域与大肠杆菌引发酶存在一定差异。另一方面,我们利用HPLC方法在体外纯化得到了 c-di-GMP,验证其纯度和生理活性后,将多个截短的DnaG蛋白和c-di-GMP共结晶,得到了多个片段和c-di-GMP共结晶的多个高分辨率晶体。本研究为进一步阐明DnaG识别c-di-GMP的分子机制奠定了基础,后续的实验需要继续收集DnaG和c-di-GMP的共晶数据。

关键词：结核病耻垢分枝杆菌引物酶DnaG 环鸟苷二磷酸c-di-GMP