检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猴头菌浸膏多糖及蛋白质含量测定方法的比较

黑龙江畜牧兽医 2018年第21期 219-223页

作者：王新宇刘振华李影丹徐涵宇尚红梅宋慧白求恩医科大学制药厂长春130012 吉林大学中日联谊医院消化内科长春130033 吉林农业大学生命科学学院长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118

为了更好地控制猴头菌浸膏的质量,试验分别采用3,5-二硝基水杨酸法、蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法测定猴头菌浸膏中多糖的含量,分别采用福林酚法和考马斯亮蓝法测定猴头菌浸膏中蛋白质的含量,从中筛选出适合猴头菌浸膏的多糖及蛋白质含量... 详细信息

为了更好地控制猴头菌浸膏的质量,试验分别采用3,5-二硝基水杨酸法、蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法测定猴头菌浸膏中多糖的含量,分别采用福林酚法和考马斯亮蓝法测定猴头菌浸膏中蛋白质的含量,从中筛选出适合猴头菌浸膏的多糖及蛋白质含量的测定方法。结果表明：用蒽酮-硫酸法测定多糖含量时,结果高于其他两种方法,且稳定性、精密度、加标回收率、重复性的相对标准偏差（RSD）均小于5. 00%;用福林酚法测定蛋白质含量时,结果高于考马斯亮蓝法,且稳定性、精密度、重复性及加标回收率的RSD均小于5. 00%。说明蒽酮-硫酸法操作简便、稳定可行,是最适合测定猴头菌浸膏中多糖含量的方法;福林酚法操作简便、稳定可行,是最适合测定猴头菌浸膏中蛋白质含量的方法。

关键词：猴头菌浸膏多糖蛋白质苯酚-硫酸法蒽酮-硫酸法 3,5-二硝基水杨酸法福林酚法考马斯亮蓝法

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡内金炮制工艺及质量标准规范化研究

鸡内金炮制工艺及质量标准规范化研究

作者：金伶佳辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的: 鸡内金来源于Gallus gallus domesticus Brisson脊索动物门鸟纲雉科动物鸡的干燥砂囊角质内壁,剥离后洗净晒干研末生用或炒用。首载于《神农本草经》的丹雄鸡项下。鸡内金性味甘平,归脾胃,小肠,膀胱经。具有消食健脾胃,涩精止... 详细信息

目的: 鸡内金来源于Gallus gallus domesticus Brisson脊索动物门鸟纲雉科动物鸡的干燥砂囊角质内壁,剥离后洗净晒干研末生用或炒用。首载于《神农本草经》的丹雄鸡项下。鸡内金性味甘平,归脾胃,小肠,膀胱经。具有消食健脾胃,涩精止遗等功效,临床常用于治疗食积胀满,饮食积滞,消化不良,止遗尿,化结石,泻痢等疾病。是临床常用中药品种。此外,鸡内金有胃液分泌,加快胃排空等作用。但是鸡内金为角质,具有表面油性大,腥臭味浓,质地较坚韧,有效成分难以煎出等缺点。因此,本实验旨在找出一种合理并具有一定的可行性的炮制方法,一方面可以保证临床疗效,另一方面也可以为今后的理论研究奠定基础。材料与方法: 材料: 鸡内金购于辽宁省大连市瓦房店连城食品有限公司,经辽宁中医药大学王冰教授鉴定均为正品药材。方法: 以可溶性蛋白质含量为指标性成分,采用考马斯亮蓝法对砂烫鸡内金工艺进行了单因素考察和正交试验考察,优选出砂烫鸡内金的最佳炮制工艺;采用连续系统的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,氨基酸自动分析仪,半生化分析仪,电解质分析仪分别对生品鸡内金及其砂烫鸡内金的蛋白、氨基酸、淀粉酶、微量元素等四个方面进行化学成分研究;通过观察不同剂量鸡内金生品和砂烫品对正常小鼠的胃排空及小肠推进的作用,对鸡内金生品及砂烫品的促进胃肠功能进行比较;通过观察鸡内金生品和砂烫品对阿托品致胃肠运动抑制小鼠、对新斯的明致胃肠运动亢进小鼠的胃排空实验,来试探讨鸡内金促进消化作用的机制;对考马斯亮蓝法和凯氏定氮法进行了方法学考察,研究了生品鸡内金及其砂烫品的质量标准。对十批次不同产地鸡内金及其炮制品的杂质,水分,灰分,浸出物等方面进行了测定,初步制定了鸡内金及其炮制品的质量标准。结果: 1.优选出砂烫鸡内金的最佳炮制工艺:鸡内金在锅底温度200-210℃,炒制60s,投砂量100:4000。 2.化学成分比较 2.1通过连续系统的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验,结果表明鸡内金及其炮制品在电泳上具有谱带,生品和炮制品在含量上有显著变化。鸡内金及其炮制品的电泳图谱不仅谱带数目不相同,而且各谱带的着色程度也是有差别的。 2.2生品鸡内金经炮制后,可能由于高温导致生品鸡内金中的大部分淀粉酶变性,从而使淀粉酶的活性由4（U/L）下降到2（U/L）。 2.3炮制后的砂烫鸡内金比生品鸡内金中的五种微量元素含量提高。炮制后钾,钙,铁,镁的含量分别由1.01mmol/l, 1.07 mmol/l, 16 mmol/l,0.46 mmol/l增加到1.75 mmol/l, 1.17 mmol/l, 17.3 mmol/l,0.52 mmol/l。 2.4鸡内金及炮制品中均含有人体所必需的18种氨基酸,经炮制后鸡内金中的18种氨基酸总含量由875.894 mg/g提高到903.119 mg/g。 3.鸡内金生品及其砂烫品对小鼠的胃排空及小肠推进均产生不程度的影响,砂烫品作用更为显著,对小鼠的胃排空及小肠推进作用有一定的促进作用。 4.对考马斯亮蓝法和凯氏定氮法进行了方法学考察,各项指标均达到要求。结论: 1.优化的鸡内金的最佳炮制工艺,进行了验证实验,得到的实验结果基本保持一致。故此工艺具有一定的可行性和操作性。 2.鸡内金及其砂烫品对胃排空及小肠推进均有促进作用。 3.初步制定了鸡内金及其炮制品的质量标准。鸡内金砂烫炮制工艺稳定可靠,重复性好。并可用于评价和控制鸡内金及其砂烫品的质量。为今后研究奠定基础。

关键词：鸡内金炮制考马斯亮蓝法凯氏定氮法药理

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

绿茶苦涩味的化学成分及其相互作用研究

绿茶苦涩味的化学成分及其相互作用研究

作者：宋亚赛安徽农业大学

学位级别：硕士

滋味是评价茶叶品质的重要因素之一,春季绿茶鲜爽醇厚,夏秋季绿茶苦涩味较重,不易被市场接受。分析绿茶苦涩味的化学成分,及不同滋味成分间的相互作用对改善茶汤滋味和开发利用夏秋茶具有重要意义。研究表明儿茶素和咖啡碱是构成茶汤苦... 详细信息

滋味是评价茶叶品质的重要因素之一,春季绿茶鲜爽醇厚,夏秋季绿茶苦涩味较重,不易被市场接受。分析绿茶苦涩味的化学成分,及不同滋味成分间的相互作用对改善茶汤滋味和开发利用夏秋茶具有重要意义。研究表明儿茶素和咖啡碱是构成茶汤苦涩味的主要成分,茶氨酸、谷氨酸等鲜味氨基酸具有减弱茶叶苦涩味的作用,但氨基酸对苦涩味的影响机理尚未明确,同时如何实现定量评估茶汤或者苦涩味成分的呈味强度也一直缺乏客观、统一的方法。本研究共收集121个不同产地、不同季节的绿茶样品,利用高效液相色谱技术(HPLC)测定了样品中儿茶素、咖啡碱、氨基酸等非挥发性化学成分含量,结合数据统计分析,挖掘出表征绿茶滋味特点的呈味因子。采用定量感官审评结合数理统计分析、电子舌技术、考马斯亮蓝比色和SDS-PAGE等方法研究氨基酸对绿茶滋味的影响,定量评估氨基酸对EGCG和咖啡碱呈味特性的作用并对其进行机理探究。论文主要取得了以下研究结果:1.确定表征绿茶滋味的主要因子。利用主成分分析和因子分析,得到五个滋味复合因子,分别是F1:苦、F2:鲜、F3:涩、F4:酸、F5:爽,因子分析结果较好地解释绿茶“苦、涩、鲜、爽”的呈味特点,该方法同样适用于分析其它茶类的滋味因子;2.不同种类氨基酸对苦涩味的作用不同。分别利用感官审评、电子舌技术、考马斯亮蓝比色、SDS-PAGE、HPLC等方法对不同种类氨基酸影响绿茶茶汤、EGCG和咖啡碱的呈味作用进行定量评估与评价,结果表明茶氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、甘氨酸等对苦涩味均具有一定的减弱作用,且减弱能力与各氨基酸的阈值呈负相关;3.建立探究茶汤涩味的新方法。通过测定“多酚-唾液蛋白”结合反应程度,评估茶汤或涩味成分的涩味强度,提出SPI(唾液蛋白沉淀指数)和SAPI(α-唾液淀粉酶沉淀指数)表征供试样对唾液蛋白的沉淀能力,并可应用于筛选影响茶汤涩味的新成分

关键词：苦涩味因子分析多酚--蛋白反应电子舌考马斯亮蓝法 SDS-PAGE

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

N-V蛋白酶的定量方法系统研究与效价测定

N-V蛋白酶的定量方法系统研究与效价测定

作者：刘佳吉林大学

学位级别：硕士

本论文报告了N-V蛋白酶定量测定法的系统研究及效价的测定。为进一步研究此种该酶的特性、评价制剂质量标准提供了实验方法和理论依据。首先采用全波长扫描法对N-V蛋白酶进行分析,在此基础上,采用凯氏定氮法,紫外吸收法,Lowry法以及考... 详细信息

本论文报告了N-V蛋白酶定量测定法的系统研究及效价的测定。为进一步研究此种该酶的特性、评价制剂质量标准提供了实验方法和理论依据。首先采用全波长扫描法对N-V蛋白酶进行分析,在此基础上,采用凯氏定氮法,紫外吸收法,Lowry法以及考马斯亮蓝法测定N-V蛋白酶制剂的蛋白含量;以尿激酶为标准,采用琼脂糖-纤维蛋白法测定N-V蛋白酶效价。实验结果如下: 全波长扫描制剂呈现典型单一峰,样品在280nm和260nm处的吸光度值:A=0.14149;A=0.27289;A/A=1.928,其数值大于1.8,因此可以确定,N-V蛋白酶制剂纯度合格,没有或极少有核酸或核苷酸污染。由于制剂的蛋白质纯度是合格的,因此根据凯氏定氮法测出的N-V蛋白酶的含量,结果是准确的,可以以此为根据评估其他测定方法的准确度和优缺点。采用凯氏定氮法测得的结果(5.164±0.013)g·L,考马斯亮蓝法得到蛋白含量为(5.150±0.002)g·L,紫外吸收法(A-A)测得蛋白含量的结果为(5.202±0.001)g·L,而Lowry法测得的结果为(1.168±0.011)g·L,紫外吸收法(A215-A225)测得的结果为(6.206±0.021)g·L。紫外吸收法(A-A)和考马斯亮蓝法测出的蛋白含量,与凯氏法结果相近,适合本制剂的浓度测定,前者可作为初步定量的依据,后者则是测定N-V蛋白酶含量的首选。而紫外吸收法(A215-A225)和Lowry法也测定出蛋白含量,但是结果与凯氏法结果差异比较大。尤其是Lowry法结果明显偏小。这两种方法不适合此N-V蛋白酶的含量测定。以尿激酶标准品为参照物,测得每毫克N-V蛋白酶的效价,相当于3000IU尿激酶。综上,本实验基本完成了该蛋白酶定量方法研究以及效价的测定,有利于对其进行深入的研究。

关键词： N-V蛋白酶含量测定考马斯亮蓝法凯氏定氮法 Lowry法紫外吸收法效价测定琼脂糖-纤维蛋白平板法

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

柏子仁成分及制剂研究

柏子仁成分及制剂研究

作者：马欣悦辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在传统中医药理论的指导下,参考相关文献对柏子仁成分进行研究。首先分离并鉴定子仁油中的成分,同时对柏子仁中萜类成分的含量测定进行方法学研究,以及对柏子仁的提取工艺及制剂工艺进行优化,并且明确柏子仁的药理活性作... 详细信息

目的:本研究旨在传统中医药理论的指导下,参考相关文献对柏子仁成分进行研究。首先分离并鉴定子仁油中的成分,同时对柏子仁中萜类成分的含量测定进行方法学研究,以及对柏子仁的提取工艺及制剂工艺进行优化,并且明确柏子仁的药理活性作用部位,对柏子仁中蛋白质进行初步研究,确定其含量测定方法,以期为柏子仁的进一步研究奠定基础。材料与方法:1采用柱层析,薄层刮板等方法,以环己烷作为起始溶媒,对压榨的柏子仁油进行分离,以环己烷:乙酸乙酯100:1,99:1,98:1……90:1,80:1……10:1……1:1等比例对柏子仁油进行柱层析,以薄层板对流分进行分类回收,再进行制备薄层纯化。用核磁共振氢谱、碳谱以及液质联用,对分离得到的化合物进行初步确定,再以液质联用确定化合物的结构。2利用超声、回流、微波和均质等方法,采用单因素试验考察滴速、冷却剂与冷却温度等因素,以均质时间、实验时的温度、投入料液比和次数4个因素进行考察,每个因素3个水平,采用L9(34)正交试验优选提取工艺。3应用考马斯亮蓝法对不同产地柏子仁中蛋白质含量进行初步确定。4观察柏子仁总萜类成分提取物对灌胃小鼠自发活动的影响,对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间和睡眠个数的干扰程度以及对缺氧小鼠存活时间的影响。5用聚乙二醇和普兰尼克为载体材料,熔融法制备柏子仁总萜类成分滴丸。以丸重差异、圆整度、溶出度为指标,采用单因素试验考察滴速、冷却剂与冷却温度等因素;采用正交试验优选聚乙二醇和普兰尼克比例、药物与基质配比、药液温度、滴程等制备工艺条件。结果:1以环己烷:乙酸乙酯100:1到环己烷:乙酸乙酯1:1的比例进行硅胶柱层析,再以制备薄层色谱法刮板得到Y1-Y9九个化合物。依据理化性质和1H NMR、13C NMR数据以及液质联用,鉴定Y1-Y9为神经酰胺类化合物。2确定以甲醇作为提取溶剂,以料液比1:10,在80℃下,均质10min,均质提取1次为最佳提取工艺。3不同产地柏子仁中蛋白质的含量大约在0.2-1.6mg/g。4柏子仁总萜类成分(中、大剂量)能抑制小鼠的自发活动,不同程度延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间,小鼠入睡个数增加,增加缺氧小鼠的存活时间。5最佳制备工艺条件为,基质组成聚乙二醇:普兰尼克为5:1,药物与基质配比1:2,滴制时药液温度80℃,滴程10cm,滴速40滴/min,液腊为冷却剂,梯度冷却温度(50到10)℃。结论:1 Y1-Y5极性大小相近,进行硅胶柱层析时环己烷:乙酸乙酯的比例需要细致划分才能得到Y1-Y9。9个化合物均为神经酰胺类化合物。2均质提取较其他常规提取方法操作更为简便,省去了原始应对物料进行的烘干、粉碎等步骤,并保证物料的破碎和有效成分的提取同步运行,能更速度快、强度更高的提取植物中的有效成分。3所建立的蛋白质含测方法稳定可靠,各个产地柏子仁含量以购于丹东中医院,安徽亳州的柏子仁中蛋白质含量最高。4实验结果显示柏子仁总萜类成分具有镇静、催眠和耐缺氧作用。5优选的柏子仁总萜类成分滴丸制备工艺合理可行,便于生产应用。

关键词：柏子仁总萜类化合物均质镇静催眠药理作用滴丸制备工艺正交设计蛋白质考马斯亮蓝法硅胶柱色谱神经酰胺

啤酒泡沫蛋白的分离鉴定及啤酒生产中硅胶应用的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

啤酒泡沫蛋白的分离鉴定及啤酒生产中硅胶应用的研究

作者：杜芳齐鲁工业大学

学位级别：硕士

本课题研究了啤酒的泡沫稳定性和非生物稳定性两个关于啤酒质量的问题，包括啤酒泡沫蛋白分离鉴定，泡沫蛋白含量测定方法体系的确立，硅胶对啤酒的稳定性的影响，并对不同的硅胶性能做出简单的分析比较。首先，对啤酒泡沫液、残液及啤... 详细信息

本课题研究了啤酒的泡沫稳定性和非生物稳定性两个关于啤酒质量的问题，包括啤酒泡沫蛋白分离鉴定，泡沫蛋白含量测定方法体系的确立，硅胶对啤酒的稳定性的影响，并对不同的硅胶性能做出简单的分析比较。首先，对啤酒泡沫液、残液及啤酒原液中提取蛋白质的泡沫蛋白含量、相对分子质量、氨基酸组成等进行测定。实验结果显示，啤酒泡沫液中泡沫蛋白含量明显多于啤酒原液和泡沫残液;蛋白电泳图谱均为约40kDa和小于18kDa的两条宽带，分布相似且无明显的差异;蛋白质氨基酸的组成相同，啤酒泡沫液中的含量最大，而疏水氨基酸的比例相差不明显。其次，在以上理论研究的基础上，对考马斯亮蓝染液与蛋白质结合反应条件进行了研定了标准蛋白浓度在20-125μg/mL时，与吸光值有良好的线性关系，检出限约1.07μg/mL，验证了该方法的高度灵敏性。用该方法测定啤酒泡沫蛋白含量，扣除了空白实验，测量结果重现性良好，并与泡持值存在显著相关性，而可溶性氮、蛋白隆丁B区分与啤酒泡持相关性不明显。建立了简便地泡沫质量检测方法，且方法具有快速稳定、灵敏度高的特点。再次，研究了硅胶对啤酒中蛋白质的吸附性能，通过测定不同添加量硅胶吸附后啤酒非生物的稳定性和泡沫的稳定性，以及硅胶的吸附性及专一性实验，结果得出，啤酒生产用硅胶对引起啤酒冷混浊的活性蛋白具有很强的亲和力，提高了啤酒的稳定性，而且在保持良好的吸附性能的同时，又具有很好的过滤性能，并且对啤酒泡沫稳定性又没有任何不利的影响。实验还对不同硅胶性能比较分析，为提高啤酒非生物稳定性，选择合适的硅胶提供参考。

关键词：泡沫稳定性非生物稳定性泡沫蛋白考马斯亮蓝法硅胶

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物医用甲壳素衍生物中蛋白质含量的检测

生物医用甲壳素衍生物中蛋白质含量的检测

作者：李家振武汉大学

学位级别：硕士

甲壳素及其衍生物具有非常好的生物相容性、生物可降解性、低毒性和多种生物活性,具有极大的研究和应用价值。近年来,具有温敏性的甲壳素衍生物受到广泛关注,例如温敏性羧甲基甲壳素(CMCH)和羟丙基甲壳素(HPCH)。它们可作为可注射水凝... 详细信息

甲壳素及其衍生物具有非常好的生物相容性、生物可降解性、低毒性和多种生物活性,具有极大的研究和应用价值。近年来,具有温敏性的甲壳素衍生物受到广泛关注,例如温敏性羧甲基甲壳素(CMCH)和羟丙基甲壳素(HPCH)。它们可作为可注射水凝胶用于生物医用领域如微创原位给药、3D打印生物墨水、高端植入医疗器械和组织工程原位修复。然而,甲壳素及其衍生物中残留的少量异源蛋白质,进入人体后可能引起严重的免疫反应。因此,药品监管部门对医用甲壳素衍生物材料中蛋白质的含量提出不得高于0.2%的要求。但目前对甲壳素衍生物中蛋白质含量的测定方法研究的并不多,主要以比色法测定为主。本文以羧甲基壳聚糖(CMCS)、CMCH和HPCH生物医用甲壳素衍生物材料为对象,对其蛋白质含量进行测试和讨论,主要包括以下两个方面的内容:(1)对于采用考马斯亮蓝法测试CMCS和CMCH样品溶液时易产生沉淀的问题,通过对染料试剂中磷酸/盐酸配比、乙醇用量和孵化时间等条件的优化,提出改进措施,改良考马斯亮蓝法不仅可以避免沉淀问题,而且具有较高的灵敏度。该方法在蛋白质浓度为5-40 mg/L时具有良好的线性关系;加标回收率在95%-114%之间,相对标准偏差小于6%。然而研究发现CMCH与考马斯亮蓝分子之间可能因为存在相互作用而导致干扰的情况,这为后续研究提供了一定的实验和理论基础,但仍需更多的实验进行系统的分析和验证。(2)为HPCH样品中蛋白质的含量提供一个简单、可靠的检测方法,通过实验探索了考马斯亮蓝法、Lowry法和BCA法三种潜在方法的可行的。结果表明,HPCH会对考马斯亮蓝法造成干扰,表现为该方法测得的蛋白质含量与样品浓度之间不存在正比例关系。Lowry法在测定过程中出现明显的絮状沉淀现象,不适用于HPCH样品中蛋白质含量的测定。在BCA法测试HPCH样品中蛋白质含量的实验中,发现其适用于较低浓度的温敏性羟丙基甲壳素溶液(1-2 mg/m L),而较高浓度的温敏性羟丙基甲壳素溶液在测试条件下会产生一定的胶束化现象影响蛋白质含量测试结果。为了减少这种光散射可能造成的影响,利用吸收值的一阶导数进行相互抵消,提出了改良BCA法。研究结果表明,改良BCA法在蛋白质浓度为2-14 mg/L时线性关系良好;加标回收率在95%-105%之间;相对标准偏差小于5%;样品的检测限和定量限分别为0.91 mg/L和2.75 mg/L,均满足中国药典药品质量标准分析方法验证指南的要求。

关键词：蛋白质检测羧甲基甲壳素羟丙基甲壳素 BCA法考马斯亮蓝法

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

乳粉蛋白质快速检测方法的研究

乳粉蛋白质快速检测方法的研究

作者：钱博浙江大学

学位级别：硕士

乳制品是营养最全面的食品之一,近年来乳制品的产量上升很快,但快速的增长亦造成原料和成品掺假的现象非常普遍。其中蛋白掺假是常见的一种方式。国家标准规定的乳粉蛋白质测定方法是基于凯氏定氮法,因此理论上任何含氮物质的加入均折... 详细信息

乳制品是营养最全面的食品之一,近年来乳制品的产量上升很快,但快速的增长亦造成原料和成品掺假的现象非常普遍。其中蛋白掺假是常见的一种方式。国家标准规定的乳粉蛋白质测定方法是基于凯氏定氮法,因此理论上任何含氮物质的加入均折算成为蛋白质含量。所以常用的掺假方式为加水后加入水解动物蛋白、大豆蛋白、尿素等无机氮类。另一种则为低蛋白或无蛋白的制假乳制品,如2004年的“阜阳劣质奶粉案”。乳品掺假不但严重影响了市场信誉,亦对人体会产生一定的危害,寻求一种高效快速的定量和检测掺假的方法已成为当今乳品工业的重要工作,具有重要的经济和社会价值。本课题从蛋白质的快速测定方法入手,选取了分光光度法中的考马斯亮蓝法和福林-酚法来研究;研究了考马斯亮蓝试剂和福林-酚试剂与乳粉蛋白质含量之间的显色关系;实际测定结果与凯氏定氮法(国标法)的比较:乳粉中常见掺假物对显色的干扰:以及掺假物添加后对蛋白质实际检测的效果。考察了显色溶液的吸光度值与色度值的线性关系,色差计应用于蛋白质测定的可能性。主要结论如下: (1)采用标准蛋白或者已知乳粉标样,考马斯亮蓝法都能准确测定乳粉中的蛋白质含量,测定结果与国标法没有显著差异。而且一些常见的掺假物(如铵盐、氨基酸、碳水化合物、淀粉等)不与考马斯亮蓝试剂发生显色反应,不干扰蛋白质的测定。所以考马斯亮蓝法是一种很好的蛋白质快速测定方法。 (2)福林-酚法只有采用已知乳粉标样制备的曲线,才能准确测定乳粉中蛋白质含量,测定结果与国标法没有显著差异。而该法的干扰因素很多,很多掺假物都能与其反应,因此只能应用于未掺假的乳粉蛋白质测定。 (3)在掺加脲的乳粉中,考马斯亮蓝法和福林-酚法不受添加脲的影响,都能准确测定出真实的蛋白质含量。在掺植脂末的乳粉中,考马斯亮蓝法不受脂肪的影响,能准确测定出真实的蛋白质含量;而福林-酚法的测定结果偏高。在掺多肽蛋白粉的乳粉中,考马斯亮蓝试剂不与多肽反应,能准确测定出真实的蛋白质含量;而福林-酚试剂能与多肽结合,发生显色反应,使得测定结果偏高。

关键词：乳粉蛋白质考马斯亮蓝法福林-酚法掺假乳粉

野生与种植黄连总生物碱总蛋白的检测及其盐酸小檗碱的生源代谢酶初探

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

野生与种植黄连总生物碱总蛋白的检测及其盐酸小檗碱的生源代谢酶...

作者：曾燕湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:本文以黄连为研究对象,采用HPLC和UV测定野生与种植黄连不同部位有效成分盐酸小檗碱及总生物碱的含量,盐酸小檗碱亲和介质的制备及蛋白质SDS-PAGE垂直电泳技术,通过比较分析野生与种植黄连植株不同部位生物碱的含量,分析野生与种... 详细信息

目的:本文以黄连为研究对象,采用HPLC和UV测定野生与种植黄连不同部位有效成分盐酸小檗碱及总生物碱的含量,盐酸小檗碱亲和介质的制备及蛋白质SDS-PAGE垂直电泳技术,通过比较分析野生与种植黄连植株不同部位生物碱的含量,分析野生与种植黄连不同部位的差异蛋白,以期建立黄连植物体中盐酸小檗碱的生源代谢途径,为确保优质药材种植资源及质量控制研究提供依据。方法:紫外分光光度法200-600 nm全波长扫描后采用测定波长345 nm。HPLC采用C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈和0.4%磷酸水溶液等度洗脱,流速1.0 mL/min,进样量10μL,检测波长345 nm,柱温30℃。通过制备盐酸小檗碱亲和介质钓取其相关代谢酶,采用SDS-PAGE凝胶电泳和考马斯亮蓝法,以蛋白条带丰度、蛋白分子的相对分子量、A和每克药材中蛋白质含量为指标,比较水提法、Tris-HCl法、硫酸铵沉降法所得黄连蛋白的差异,并对野生与种植黄连不同部位蛋白质的差异进行分析与评价。结果:种植黄连植株的总生物碱含量中根茎、须根和茎叶含(9.875±0.029)%、(6.406±0.033)%、(1.924±0.037)%,种植黄连植株的盐酸小檗碱含量中根茎、须根和茎叶含(0.4505±0.0373)%、(0.1673±0.0331)%、(0.0879±0.0293)%。野生黄连植株的总生物碱含量中根茎含(7.953±0.028)%、茎叶含(0.644±0.031)%,野生黄连植株的盐酸小檗碱含量中根茎含(0.3802±0.0323)%、茎叶含(0.1597±0.0315)%。优选得出最佳黄连蛋白质提取方法为Tris-HCl法,该法所提取的黄连蛋白丰度最高,且每克药材中蛋白质含量最高;野生与种植黄连不同部位蛋白质的差异明显,蛋白质丰度及每克药材中蛋白质含量顺序均为:种植黄连根茎>野生黄连根茎>种植黄连茎叶>野生黄连茎叶>种植黄连须根,并且聚类分析可知野生与种植黄连根茎蛋白关联关系较为显著,与其他部位蛋白关联不显著。结论:野生与种植黄连植株不同部位的生物碱含量存在明显差异,在种植黄连植株根茎的盐酸小檗碱和总生物碱含量均明显高于其须根和茎叶部位的;在野生黄连植株根茎的含量也远高于其茎叶部位的;种植黄连根茎高于野生黄连根茎。就总生物碱的含量而言,种植黄连根茎的含量最高,质量最佳。本研究优选的Tris-HCl法可以充分提取黄连中的蛋白质;野生与种植的黄连根茎的蛋白明显高于其他部位,且种植6年生的黄连根茎蛋白含量高于野生未知年限黄连根茎。黄连不同部位蛋白质的差异性既为其初级次级代谢成分及代谢途径研究奠定基础,也为黄连药材种质资源研究及质量控制评价提供依据。

关键词：黄连生物碱盐酸小檗碱高效液相色谱法蛋白质 SDS-PAGE凝胶电泳考马斯亮蓝法总量统计矩