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麦考酚酸对翼状胬肉成纤维细胞作用的实验研究

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眼科新进展 2013年第1期33卷 33-37页

作者：程雪娟张少斌王继兵邹慧慧滨州医学院眼科学教研室山东滨州256603 潍坊眼科医院山东潍坊261041 潍坊医学院眼科学教研室山东潍坊261041

目的研究麦考酚酸(mycophenolic acid,MPA)对翼状胬肉成纤维细胞(pte-rygium fibroblasts,PFB)活性的影响,并对其相关机制进行探讨。方法体外培养PFB,MTT比色法、Brdu掺入法观察MPA对PFB增殖的抑制作用,Western blot检测PFB内核转录因子... 详细信息

目的研究麦考酚酸(mycophenolic acid,MPA)对翼状胬肉成纤维细胞(pte-rygium fibroblasts,PFB)活性的影响,并对其相关机制进行探讨。方法体外培养PFB,MTT比色法、Brdu掺入法观察MPA对PFB增殖的抑制作用,Western blot检测PFB内核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)P65及IκB-α蛋白的表达。结果 MTT比色法发现不同浓度的MPA和丝裂霉素C对PFB增殖均有抑制作用,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且呈时间、剂量依赖性,半数抑制浓度下48h抑制率分别为(31.9185±1.2776)%、(31.1235±1.5826)%,72h抑制率分别为(50.2929±2.4574)%、(47.9729±0.6142)%。Brdu掺入法发现不同浓度MPA组积分光密度值与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05),进一步证实MPA可抑制PFB的增殖;Western blot显示,MPA可抑制PFB胞核内P65表达(与空白对照组表达量1.5429±0.1427相比,MPA组表达量仅为0.8864±0.0728),并能增加胞浆IκB-α的表达(空白对照组为1.5592±0.2676,MPA组为2.1425±0.3052)。结论 MPA对PFB增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与其抑制PFB的NF-κB通路有关。

关键词：翼状胬肉成纤维细胞细胞增殖麦考酚酸 P65 IκB-α

麦考酚酸对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究

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麦考酚酸对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究

作者：程雪娟滨州医学院

学位级别：硕士

目的：研究麦考酚酸(MPA)对翼状胬肉组织成纤维细胞(PFB)活性的抑制作用,并对其相关机制进行探讨。方法：体外培养翼状胬肉成纤维细胞(PFB)及Tenon囊成纤维细胞(TFB),波形蛋白免疫组化染色法进行细胞鉴定,以丝裂霉素C(MMC)为对照,取第... 详细信息

目的：研究麦考酚酸(MPA)对翼状胬肉组织成纤维细胞(PFB)活性的抑制作用,并对其相关机制进行探讨。方法：体外培养翼状胬肉成纤维细胞(PFB)及Tenon囊成纤维细胞(TFB),波形蛋白免疫组化染色法进行细胞鉴定,以丝裂霉素C(MMC)为对照,取第三代处于对数生长期的翼状胬肉与Tenon囊成纤维细胞,分别于接种后第二天、第四天、第六天行噻唑蓝[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]比色试验,检测细胞增殖活力(计数细胞数),以MTT比色法、5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入法测定不同浓度的MPA分别作用48h、72h时,对体外培养的PFB增殖的抑制作用,并与MMC进行比较;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色观察不同浓度的MPA作用72h后TPB形态学变化等;流式细胞仪检测不同浓度的MPA作用72h后体外培养的PFB和TFB凋亡及周期的变化;MTT法检测PFB和TFB抑制作用的异同,对其安全性做出初步评价。免疫组化染色法及Western blot法检测翼状胬肉成纤维细胞NF-KB通路中p65和IkB-a的表达情况。结果：翼状胬肉成纤维细胞较Tenon囊成纤维细胞生长增殖快、旺盛;培养至第三天,翼状胬肉成纤维细胞的细胞总数明显多于Tenon囊成纤维细胞(p细胞核形态无明显差异,未发现细胞凋亡小体及碎片,差异无统计学意义。流式细胞仪检测结果显示,MMC可引起TFB的凋亡或坏死,且随浓度的增加,凋亡率增大,而MPA各实验组凋亡率无明显变化,差异无统计学意义;MPA作用下,G0/G1期比例增多,S,G2/M期比例均减少,大多数细胞被阻滞于G0/G1期,浓度越高,作用越明显。免疫组化染色及Western blot结果示,MPA可以通过抑制IKB-α的磷酸化、P65的核易位,从而抑制NF-KB通路的激活,抑制免疫、炎症因子等的释放及炎症细胞浸润,最终抑制PFB的增殖。结论：MPA对PFB有显著的抑制作用,可能与其抑制PFB的NF-KB通路有关;不引起TFB的凋亡或坏死,毒副作用小,较安全。

关键词：麦考酚酸翼状胬肉成纤维细胞增殖 NF-KB IKB-α P65

紫外线及过氧化氢对翼状胬肉成纤维细胞分泌TNF-α的影响及抑肽酶对TNF-α分泌的抑制作用

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紫外线及过氧化氢对翼状胬肉成纤维细胞分泌TNF-α的影响及抑肽酶...

作者：万金兰华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分紫外线照射及过氧化氢对翼状胬肉成纤维细胞TNF–α分泌的影响目的:本实验通过研究体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞分别在紫外线照射与过氧化氢(150μmol/L)作用下TNF–α的分泌,以期在实验中用过氧化氢模拟紫外线照射,为实验... 详细信息

第一部分紫外线照射及过氧化氢对翼状胬肉成纤维细胞TNF–α分泌的影响目的:本实验通过研究体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞分别在紫外线照射与过氧化氢(150μmol/L)作用下TNF–α的分泌,以期在实验中用过氧化氢模拟紫外线照射,为实验提供准确、方便、快捷的方法。方法:将从临床上收集的人眼翼状胬肉组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养,取第三到五代细胞做实验。(1)SP法染色鉴定人翼状胬肉成纤维细胞并分成三组:A组为阴性对照组,B组为暴露于波长为290～320nm紫外线组,C组为过氧化氢( 150μmol/L)处理组。(2)将各组分别作用15分钟、30分钟、60分钟、6小时、24小时,提取上清液并离心,ELISA法检测上清液中TNF–α的含量。结果:紫外线照射与过氧化氢均能明显刺激翼状胬肉成纤维细胞TNF–α的分泌,与对照组相比差别有显著性(P 0.05)。结论:过氧化氢(150μmol/L)可用来模拟紫外线照射对人翼状胬肉成纤维细胞的作用。第二部分抑肽酶对翼状胬肉成纤维细胞TNF–α分泌的抑制作用目的:由第一部分的实验可知,紫外线照射与过氧化氢均能刺激翼状胬肉成纤维细胞TNF–α分泌,现采用过氧化氢来模拟紫外线照射,并探讨在体外抑肽酶对翼状胬肉成纤维细胞存活率及分泌TNF–α的影响。方法:同第一部分对翼状胬肉成纤维细胞原代、传代培养,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度抑肽酶对细胞存活率的影响。最后再应用ELISA法检测不同浓度的抑肽酶处理24小时后上清液中TNF–α的含量。结果: MTT法检测可知抑肽酶在不同浓度(1500 U/ml、3000 U/ml、6000 U/ml、12000 U/ml)均无刺激人翼状胬肉成纤维细胞增殖作用。ELISA法显示抑肽酶浓度为1500U/ml,3000U/ml时均能明显抑制翼状胬肉成纤维细胞分泌TNF–α,抑制量分别为19.36 pg/ml、38.46 pg/ml、56.15 pg/ml、13.84 pg/ml;10.2 pg/ml、31.46 pg/ml、49.15 pg/ml、4.62pg/ml(P 细胞无促进增殖作用。结论:抑肽酶在一定浓度范围内可有效地抑制翼状胬肉成纤维细胞TNF–α的分泌且无促进增殖作用。

关键词：紫外线过氧化氢翼状胬肉成纤维细胞 TNF–α 抑肽酶

小檗碱抑制体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞迁移能力的机制研究

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中医药导报 2019年第22期25卷 35-39页

作者：陈静李威樊锐锋匡洪影孙河黑龙江中医药大学附属第一医院

目的:探讨小檗碱抑制体外培养翼状胬肉成纤维细胞迁移的药理机制。方法:通过培养临床获取的翼状胬肉组织获得翼状胬肉成纤维细胞,采用终浓度0、20、40、80μmol/L的小檗碱对细胞进行处理,检测细胞迁移相关因子及AMP依赖的蛋白激酶(AMPK... 详细信息

目的:探讨小檗碱抑制体外培养翼状胬肉成纤维细胞迁移的药理机制。方法:通过培养临床获取的翼状胬肉组织获得翼状胬肉成纤维细胞,采用终浓度0、20、40、80μmol/L的小檗碱对细胞进行处理,检测细胞迁移相关因子及AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)途径关键因子(MMP-1、MMP-2、MMP-9、α-SMA、AMPK、ACC)mRNA及蛋白表达水平变化。结果:随着小檗碱终浓度的提高,AMPK、ACC mRNA表达水平及蛋白表达水平上调;细胞迁移能力降低;MMP-1、MMP-2、MMP-9及α-SMA等因子mRNA表达水平及蛋白表达水平显著降低。结论:小檗碱可通过激活AMPK信号通路抑制体外培养翼状胬肉细胞的迁移能力。

关键词：翼状胬肉成纤维细胞胬肉攀晴小檗碱黄连 AMPK 细胞迁移

美洛昔康对翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制的实验研究

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中国眼耳鼻喉科杂志 2006年第1期6卷 15-17,i0003页

作者：彭云张明昌陈雯高媛华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022

目的探讨美洛昔康(Meloxican)抗翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPF)增殖的作用和机制。方法采用免疫组化方法测定翼状胬肉组织中环氧化酶-2(COX-2)的表达。体外培养 HPF,采用Westem 法,MTT 法,研究在不同浓度的血管... 详细信息

目的探讨美洛昔康(Meloxican)抗翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPF)增殖的作用和机制。方法采用免疫组化方法测定翼状胬肉组织中环氧化酶-2(COX-2)的表达。体外培养 HPF,采用Westem 法,MTT 法,研究在不同浓度的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)刺激下,HPF 中COX-2蛋白的表达,以及不同浓度的 COX-2抑制剂美洛昔康对 HPF 增殖的影响。结果翼状胬肉组织中 COX-2呈阳性表达。HPF 中 VEGF 浓度的增高可致 COX-2蛋白的表达呈增强趋势。当美洛昔康的浓度在75～300μmol/L 之间变化时,能明显抑制 HPF 的增殖,且其抑制强度呈剂量、时间依赖性。结论 HPF 中 VEGF 的浓度升高能增强 COX-2蛋白的表达,美洛昔康能够通过拮抗 COX-2达到抑制 HPF 增殖的作用。

关键词：翼状胬肉成纤维细胞血管内皮生长因子环氧化酶-2 美洛昔康