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过表达羧肽酶e对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2020年第3期40卷 374-379,384页

作者：张恒璐陈天宇王苏雨李婉陆卫平南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科江苏淮安223300 南京医科大学病原微生物学系江苏南京211166

目的:探究羧肽酶e(carboxypeptidase e,CPe)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖、周期及凋亡的影响。方法:PCR法扩增CPe基因片段,将其插入表达载体pcDNA3.1质粒中以构建重组质粒pcDNA3.1-CPe。将质粒转... 详细信息

目的:探究羧肽酶e(carboxypeptidase e,CPe)对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖、周期及凋亡的影响。方法:PCR法扩增CPe基因片段,将其插入表达载体pcDNA3.1质粒中以构建重组质粒pcDNA3.1-CPe。将质粒转染GMC细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测CPe标签蛋白、增殖标志物细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及凋亡标记物Cleaved-caspase-3的表达;采用平板克隆、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法以及流式分析法检测过表达CPe对高糖培养的GMC细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。结果:成功构建CPe过表达的GMC细胞。平板克隆以及CCK-8实验表明,过表达CPe可以抑制GMC细胞的增殖能力。流式细胞学检测表明,与对照组相比,CPe过表达明显促进了细胞凋亡;细胞周期中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义(Pe可以抑制高糖培养的小鼠GMC细胞增殖并诱导细胞凋亡。

关键词：羧肽酶e 小鼠肾小球系膜细胞糖尿病肾病增殖凋亡

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羧肽酶e的高表达与肿瘤的生长和转移相关

实用肿瘤学杂志 2012年第2期26卷 158-161页

作者：周坤（综述）姜晓峰（审校）梁红艳（审校）哈尔滨医科大学附属第四临床医学院检验科哈尔滨150001

羧肽酶e（Carboxypeptidase e,CPe）是多种激素肽和神经递质生物合成过程中最主要的羧肽酶.GeO数据分析显示,羧肽酶e作为激素原处理酶,在不同类型的肿瘤中表达.在肺神经内分泌肿瘤、垂体瘤等中,CPe mRNA表达升高.微阵列分析显示,在很多... 详细信息

羧肽酶e（Carboxypeptidase e,CPe）是多种激素肽和神经递质生物合成过程中最主要的羧肽酶.GeO数据分析显示,羧肽酶e作为激素原处理酶,在不同类型的肿瘤中表达.在肺神经内分泌肿瘤、垂体瘤等中,CPe mRNA表达升高.微阵列分析显示,在很多转移性非神经内分泌肿瘤中,CPe mRNA的表达水平也显著升高,例如：结直肠癌,肾癌,尤文氏肉瘤,但CPe mRNA的表达在其相应的正常组织中缺如.研究显示,不仅野生型CPe在肿瘤中表达,其变异体也与肿瘤相关,在一些较大或侵袭性肿瘤中,CPe 变异体mRNA的基因拷贝数非常高.总之,CPe可能在促进肿瘤生长、侵袭及转移中发挥重要作用,能够成为不同类型转移癌诊断及预后判断潜在的生物标志物.

关键词：羧肽酶e 神经内分泌肿瘤非神经内分泌肿瘤生物标志物转移癌

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羧肽酶e在胃癌组织中的表达及临床意义

新乡医学院学报 2018年第12期35卷 1111-1114页

作者：李晶张慧敏李书良焦作煤业集团责任有限公司中央医院消化内科河南焦作454000

目的探讨羧肽酶e(CPe)在胃癌组织中表达及其临床意义。方法选择2010年1月至2011年12月在焦作煤业集团责任有限公司中央医院择期行手术治疗的胃癌患者76例,留取胃癌及癌旁正常组织,免疫组织化学检测胃癌及癌旁正常组织中CPe蛋白表达,实... 详细信息

目的探讨羧肽酶e(CPe)在胃癌组织中表达及其临床意义。方法选择2010年1月至2011年12月在焦作煤业集团责任有限公司中央医院择期行手术治疗的胃癌患者76例,留取胃癌及癌旁正常组织,免疫组织化学检测胃癌及癌旁正常组织中CPe蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测胃癌及癌旁正常组织中CPe mRNA表达,利用Kaplan-Meier法对胃癌组织中CPe表达与患者生存时间的关系进行分析。结果胃癌组织和癌旁正常组织中CPe蛋白阳性表达率分别为80. 3%(61/76)和36. 8%(28/76),胃癌组织中CPe蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织(χ~2=37. 112,P e mRNA相对表达量分别为2. 07±0. 18和1. 39±0. 14,胃癌组织中CPe mRNA相对表达量显著高于癌旁正常组织(t=25. 981,P e mRNA相对表达量与TNM分期、淋巴结转移、浆膜浸润、血管侵犯、远处转移有关(P eier生存分析显示,低表达组患者平均生存时间为(48. 9±3. 6)个月,总生存率为57. 9%;高表达组患者平均生存时间为(34. 7±2. 7)个月,总生存率为35. 1%;低表达组患者总生存率高于高表达组(χ~2=4. 171,P e呈高表达,其与胃癌发生、发展及不良预后有关,可作为判定患者预后的潜在指标。

关键词：胃癌羧肽酶e 表达预后

筛选高表达CPeΔN的H1299肺癌细胞株

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中国肺癌杂志 2015年第6期18卷 340-344页

作者：孙静张桂荣王虹月申慧辽宁省肿瘤医院生物治疗研究中心辽宁省肿瘤研究所沈阳110042

背景与目的 N端截短的羧肽酶e(N-terminal truncated carboxypeptidase e,CPeΔN)是一个新的肿瘤转移相关蛋白。本研究旨在筛选高表达CPeΔN的H1299肺癌细胞株,为完成小鼠活体成像实验创造条件。方法构建CPeΔN的慢病毒表达载体。分别用... 详细信息

背景与目的 N端截短的羧肽酶e(N-terminal truncated carboxypeptidase e,CPeΔN)是一个新的肿瘤转移相关蛋白。本研究旨在筛选高表达CPeΔN的H1299肺癌细胞株,为完成小鼠活体成像实验创造条件。方法构建CPeΔN的慢病毒表达载体。分别用CPeΔN慢病毒表达载体或对照慢病毒空载体转染H1299细胞,2μg/m L的嘌呤霉素加压筛选。Western blot分析CPeΔN蛋白的表达,荧光素酶报告基因实验分析荧光素酶对底物的分解作用。结果当感染倍数(multiple of infection,MOI)是20时,慢病毒对H1299细胞的转染效率可以达到80%。CPeΔN高表达H1299细胞株(H1299-CPeΔN)和对照慢病毒载体表达H1299细胞株(H1299-control)中CPeΔN蛋白的表达量为4:1。H1299-CPeΔN和H1299-control均能够有效分解荧光素酶底物,可以满足活体成像实验的需求。结论筛选出高表达CPeΔN的H1299肺癌细胞株,为活体成像实验的开展创造了条件,也为进一步解释CPeΔN促进肿瘤转移的分子机制奠定了基础。

关键词：肺肿瘤羧肽酶e N端截短体慢病毒载体

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乳腺癌组织中CPe-ΔN的表达与临床意义

哈尔滨医科大学学报 2014年第2期48卷 137-141页

作者：杜月娟刘凤琴周坤大庆油田总医院集团龙南医院检验科黑龙江大庆163458

目的检测CPe-ΔN在乳腺癌组织中的表达,并分析CPe-ΔN与乳腺癌患者预后的关系。方法应用qRT-PCR和Western blot两种方法分析CPe-ΔN在157例乳腺癌患者中的表达情况。结果 CPe-ΔN在乳腺癌组织中高表达,并且CPe-ΔN mRNA的高表达与肿瘤... 详细信息

目的检测CPe-ΔN在乳腺癌组织中的表达,并分析CPe-ΔN与乳腺癌患者预后的关系。方法应用qRT-PCR和Western blot两种方法分析CPe-ΔN在157例乳腺癌患者中的表达情况。结果 CPe-ΔN在乳腺癌组织中高表达,并且CPe-ΔN mRNA的高表达与肿瘤分化程度,pN分期及肿瘤复发密切相关(P=0.028,0.030,0.005)。此外,CPe-ΔN高表达的患者,生存时间显著较短(P=0.001)。Cox风险比例模型多因素分析结果显示,CPe-ΔN的高表达是乳腺癌患者一个独立的预后因素(P=0.038)。结论 CPe-ΔN可能是乳腺癌一个潜在的预后生物标志物。

关键词：羧肽酶e 乳腺癌预后 CPe—△N

CPe参与调控海马神经元活性依赖性TrkB受体胞内运输

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CPE参与调控海马神经元活性依赖性TrkB受体胞内运输

作者：李娜山东大学

学位级别：硕士

一.研究背景神经元突触可塑性不仅在发育期对神经环路的建立起重要作用,而且在成年期参与控制脑的认知功能和复杂行为。脑源性神经营养因子(BDNF)不仅能促进神经元的存活、分化以及树突、轴突的生长,而且在调节突触的可塑性方面也起到... 详细信息

一.研究背景神经元突触可塑性不仅在发育期对神经环路的建立起重要作用,而且在成年期参与控制脑的认知功能和复杂行为。脑源性神经营养因子(BDNF)不仅能促进神经元的存活、分化以及树突、轴突的生长,而且在调节突触的可塑性方面也起到关键作用。大量研究已表明BDNF对神经元突触的调控,受神经元活性的调节,BDNF优先作用于有活性的神经元或突触。 BDNF的功能受体主要有两类：p75神经营养素受体和TrkB酪氨酸激酶受体,其中,TrkB是其的高亲和力受体,而且是介导BDNF功能发挥的关键分子。因此,神经元表面TrkB受体的水平对于BDNF功能的发挥具有重要作用。大量研究显示活性刺激能促进神经元膜表面TrkB受体水平的显著升高,例如高K+刺激,高频电刺激及Glycine(化学性LTP诱导剂)作用等。这在一定程度上解释了BDNF对神经元的作用受神经元活性的调节,因为高活性的神经元膜表面的TrkB受体含量较高,更容易接受来自BDNF的信号。但神经元活性促进膜表面TrkB受体含量增加的分子细胞学机制尚不十分清楚。TrkB受体的胞内域是调控其运输的关键区域,于是用TrkB受体胞内域为诱饵进行酵母双杂交,钓取有可能与TrkB结合并调控其活性依赖性胞内转运的分子—CPe。CPe分子存在两种形式：游离型和膜结合型。游离型CPe主要发挥羧肽酶的功能;而膜结合型CPe是一种既可以参与调节性分选,介导POMC,胰岛素等进入调节性运输途径,也可以作为中间分子介导调节性囊泡的运输等的多功能分子。那么,CPe与TrkB的这种结合,是否对TrkB受体的活性依赖的调节性胞内运输过程有功能意义呢? 二.研究目的本研究旨在证实CPe能调控TrkB受体神经元活性依赖的胞内转运,从而有助于我们进一步探究神经元活性促进TrkB受体膜表面水平升高的机制,并由此为临床BDNF所介导的精神疾病及学习记忆功能等提供参考。三.研究方法 1.免疫共沉淀实验。免疫共沉淀技术,是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。在293细胞中过表达相应的各种CPe或TrkB的突变体。裂解细胞收集上清,根据特异识别不同分子的相应抗体偶联的琼脂糖珠子进行免疫沉淀,那么与之结合的分子也会共沉淀下来,之后用Western blot技术进行检测。通过此方法可以确定CPe与TrkB的结合及具体结合区域。 2.免疫荧光实验。免疫荧光即根据抗原抗体反应的特异性用荧光抗体示踪或检查相应抗原。我们利用该技术对外源过表达的CPe与TrkB在海马神经元的定位情况进行荧光标记,并通过激光共聚焦显微镜进行观察记录。利用该技术,检测干扰CPe的表达后,Glycine活性刺激对TrkB在树突棘及对应树突干的相对分布是否有影响。免疫荧光实验,检测干扰CPe表达对BDNF-TrkB所介导的树突棘生长及形态可塑性的影响。 3.全内反射荧光(TIRF)显微镜技术。TIRF显微镜技术广泛应用于细胞表面附近分子的动态观察。在海马神经元中共转染CPe-RFP和TrkB-GFP两种质粒。在活细胞状态下,分别在Glycine刺激前后,观察拍照,记录CPe-RFP和TrkB-GFP的在膜表面附近的共定位的点的运动情况。 4. Western Blot实验。Western Blot是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。本研究中用于检测一系列免疫共沉淀结果,膜表面生物素结果及CPe对活性条件下的BDNF-TrkB介导的下游信号通路功能的影响的结果。 5.膜表面生物素标记实验。用生物素标记细胞膜表面的蛋白,收集细胞裂解液,然后用与生物素有高亲和力的亲和素分离膜表面蛋白,最后用Western blot技术及相应的抗体进行检测。在海马神经元中干扰内源CPe的表达,研究CPe对神经元中内源TrkB活性依赖的上膜的影响。 6.免疫荧光染色定量分析法。将TrkB及其突变体的N端融合Flag标签,C端融合GFP绿色荧光蛋白。参照赵玲老师已发表的文章中已建立的膜表面荧光定量分析法,在神经元中转染这些质粒,然后进行免疫细胞化学实验,在非透化情况下,用594荧光素标记Flag,代表的是膜表面的TrkB或其突变体结构;GFP绿色荧光显示的是总的TrkB或其突变体结构,再将红绿荧光比值通过已知的比率换算,即可得出膜表面TrkB或其突变体的分布比例情况。如果同时共转CPesiRNA或CPe DN质粒等,即可检测它们对TrkB受体的活性上膜过程的影响。四.研究结果前期山东大学神经生物研究所赵玲老师的研究结果中已通过免疫共沉淀及免疫荧光实验证实了CPe与TrkB受体的结合与在海马神经元中的共定位;同时,通过干扰的CPe表达,利用膜表面免疫荧光定量分析法,

关键词：酪氨酸激酶受体B 活性羧肽酶e 海马神经元膜表面水平

TFCP2/YAP转录复合体调控蛋白CPe对肝细胞肝癌的诊断价值

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检验医学 2019年第2期34卷 103-109页

作者：方子祥张骁陈岩吴棋邾国庆刘雅王佳谊孙奋勇俞蕾同济大学附属第十人民医院检验科上海200072

目的探讨转录因子CP2(TFCP2)/Yes相关蛋白(YAP)转录复合体调控蛋白——羧肽酶e(CPe)在肝细胞肝癌(HCC)中的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验测定147例HCC患者、42例乙型肝炎患者、29例胃癌患者及100名健康志愿者(正常对照组)血清CPe... 详细信息

目的探讨转录因子CP2(TFCP2)/Yes相关蛋白(YAP)转录复合体调控蛋白——羧肽酶e(CPe)在肝细胞肝癌(HCC)中的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验测定147例HCC患者、42例乙型肝炎患者、29例胃癌患者及100名健康志愿者(正常对照组)血清CPe水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CPe mRNA水平,免疫印迹法检测CPe、TFCP2及YAP蛋白表达,双荧光报告实验检测CPe启动子基因的活性。CPe与甲胎蛋白(AFP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的相关性采用Spearman等级相关分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CPe和AFP诊断HCC的价值。结果过表达YAP或TFCP2可促进CPe mRNA及蛋白的表达,而YAP和TFCP2共同过表达可明显促进CPe mRNA和蛋白的表达。YAP或TFCP2的敲减可抑制CPe mRNA和蛋白表达,而YAP及TFCP2共同敲减可明显抑制CPe mRNA和蛋白的表达。CPe启动子区域存在TFCP2结合基序,突变该基序后,TFCP2和YAP对CPe启动子的调控作用丧失。HCC组血清CPe水平明显高于乙型肝炎组、胃癌组和正常对照组(P0.05)。CPe与AFP、ALT、AST均呈正相关(r值分别为0.644、0.454、0.351,P值分别为0.000、0.000、0.001)。ROC曲线分析显示,CPe诊断HCC的曲线下面积(AUC)为0.937,明显高于AFP的AUC(0.679)。结论 CPe在HCC的诊断中具有较高的价值,可作为HCC的血清学诊断标志物。

关键词：羧肽酶e 转录因子CP2 Yes相关蛋白肝细胞肝癌

CPe-ΔN的高表达预示结直肠癌患者预后不良

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实用肿瘤学杂志 2014年第2期28卷 144-150页

作者：杜月娟刘凤琴周坤大庆油田总医院集团龙南医院检验科大庆163458 哈尔滨医科大学附属第四临床医学院检验科

目的：羧肽酶e的剪接变异体（ Carboxypeptidase e ，CPe-ΔN）在多种不同类型的肿瘤中表达，本研究的目的是检测CPe-ΔN在人类结直肠癌组织（ CRC）中的表达，并评估其可能作为潜在的预后生物标志物。方法应用qRT-PCR和Western blot两... 详细信息

目的：羧肽酶e的剪接变异体（ Carboxypeptidase e ，CPe-ΔN）在多种不同类型的肿瘤中表达，本研究的目的是检测CPe-ΔN在人类结直肠癌组织（ CRC）中的表达，并评估其可能作为潜在的预后生物标志物。方法应用qRT-PCR和Western blot两种方法分析了CPe-ΔN在219例结直肠癌患者中的表达情况。结果 CPe-ΔN在结直肠癌组织中高表达，并且CPe-ΔN mRNA的高表达与肿瘤分化程度，pT分期，pN分期，肿瘤复发及淋巴结转移密切相关；Cox风险比例模型多因素分析结果显示，CPe-ΔN的高表达是结直肠癌患者一个独立的预后因素（ P＝0．011）。结论 CPe-ΔN可能是结直肠癌患者一个潜在的预后生物标志物。

关键词：羧肽酶e 结直肠癌预后 qRT—PCR

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CPe在胆囊胆固醇结石患者肝脏的表达水平

肝脏 2016年第11期21卷 966-968页

作者：何志伟甘跃力上海邮电医院外科上海200040

目的研究羧肽酶e(CPe)在胆囊胆固醇结石患者肝脏的表达水平,探讨两者之间的相关性。方法选取我院2012年6月到2015年6月期间收治肝胆手术患者术中留取肝标本39例,以其中胆囊胆固醇结石患者24例作为观察组,以未患胆囊胆固醇结石患者15例... 详细信息

目的研究羧肽酶e(CPe)在胆囊胆固醇结石患者肝脏的表达水平,探讨两者之间的相关性。方法选取我院2012年6月到2015年6月期间收治肝胆手术患者术中留取肝标本39例,以其中胆囊胆固醇结石患者24例作为观察组,以未患胆囊胆固醇结石患者15例作为对照组。分别测定血清甘油三酯和总胆固醇,胆汁中胆汁酸、磷脂和胆固醇含量和胆固醇饱和指数,并检测肝脏CPe表达水平。结果观察组血清甘油三酯、总胆固醇,胆汁中胆汁酸、磷脂与对照组相比,差异均无统计学意义(t≤1.479,均P>0.05)。观察组胆汁胆固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和胆固醇饱和指数(1.31±0.14)明显高于对照组(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12),差异均具有统计学意义(t≥13.421,均Pe表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(t=-58.341,Pe表达水平与胆汁中胆固醇含量(r=-0.532)和胆固醇饱和指数(r=-0.614)具有显著负相关(均Pe表达水平下降与胆囊胆固醇结石的形成有关,其作用机制可能是肝脏CPe表达水平的变化对胆汁胆固醇含量和饱和度的改变。

关键词：胆囊胆固醇结石肝脏羧肽酶e