检索结果-南通市图书馆

欧洲型和美洲型PRRSV的最新分类及其差异的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 1006-1013页

作者：孙琪许浒李超李宛生张洪亮田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种能够引起重大经济损失的高度接触性、高死亡率猪传染性疾病,主要以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为临床特征,其病原为PRRS病毒(PRRSV),该病原自2018年起... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种能够引起重大经济损失的高度接触性、高死亡率猪传染性疾病,主要以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为临床特征,其病原为PRRS病毒(PRRSV),该病原自2018年起归属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)、β-动脉炎病毒属(Betaarterivirus)。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征母猪繁殖障碍重大经济损失动脉炎病毒属猪呼吸道疾病美洲型动脉炎病毒科 PRRS病毒

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7的原核表达及免疫原性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业生物技术学报 2017年第2期25卷 267-273页

作者：欧云文马炳马小元王俊丁耀忠张永光张杰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室世界动物卫生组织(OIE)/国家口蹄疫参考实验室甘肃农业大学动物医学院

猪(Sus scrofa)繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是造成猪出现繁殖与呼吸障碍症状的主要病原之一,N蛋白作为该病毒主要的结构蛋白和抗原蛋白。为了研究美洲型猪繁殖与呼吸障碍综... 详细信息

猪(Sus scrofa)繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是造成猪出现繁殖与呼吸障碍症状的主要病原之一,N蛋白作为该病毒主要的结构蛋白和抗原蛋白。为了研究美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(NA-PRRSV)N蛋白的免疫原性,本研究以NAPRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增获得372 bp的目的片段,扩增产物克隆入p ET30a(+)原核表达载体,构建p ET30a-NA-PRRSV-ORF7重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3);在37℃,以1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性;复性后重组N蛋白作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔(Oryctolagus cuniculus),采用Western blot检测兔血清抗体特异性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析表明,该ORF7编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为24 k D;Western blot检测结果表明,该重组N蛋白与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,与猪细小病毒1型(Porcine parvovirus type 1,PPV1)和PCV2猪血清不发生交叉反应,制备的NA-PRRSV兔抗血清与重组N蛋白发生特异性反应。该实验成功构建了NA-PRRSV-ORF7原核表达载体,实现了ORF7基因在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的免疫原性,为NA-PRRSV检测方法建立或试剂盒的开发提供了理论依据。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV) 美洲型 ORF7基因原核表达免疫原性

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2017年第9期30卷 948-953页

作者：欧云文王勤马炳马小元代军飞贾宁丁耀忠张永光张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 开江县畜牧食品局动物疫病预防控制中心四川达州635000 达州职业技术学院四川达州635000 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

目的原核表达美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(North American genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus,NA-PRRSV)N蛋白,并制备多克隆抗体。方法以NA-PRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增N蛋白编码片段,克隆入原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒pET30a-NA-PRRSV-N,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达6 h。采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化表达的重组蛋白,复性后的重组N蛋白与弗氏佐剂混合乳化,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,制备兔抗NA-PRRSV-N蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验检测多克隆抗体的特异性,间接ELISA法检测血清抗体效价。结果经PCR、双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET30a-NA-PRRSV-N构建正确;重组N蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为24 000,纯度可达95%以上,可与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体能够识别重组N蛋白和全病毒抗原,抗体效价>1∶25 600,显著高于商品化疫苗组。结论成功在大肠埃希菌中表达了NA-PRRSV N蛋白,并制备了其多克隆抗体,为NA-PRRSV检测方法的建立奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型 N蛋白原核细胞基因表达多克隆抗体

多重实时荧光定量PCR鉴别欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2015年第6期36卷 1-8页

作者：温青娜周玲玲申红杨菊凤林祥群河南科技学院河南新乡453000 广东中大南海海洋生物技术工程中心有限公司广东广州510330 石河子大学新疆石河子832003 山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061 石河子职业技术师范学院新疆石河子832003

根据欧洲型N基因、美洲型M基因和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp2基因的各自保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,... 详细信息

根据欧洲型N基因、美洲型M基因和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp2基因的各自保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立了能够检测欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV的多重实时荧光定量PCR方法。该方法的重复试验表明其批内和批间的变异系数最高值分别为1.84%和1.76%;灵敏性试验表明其检测下限为10copies/μL;特异性试验表明与其他一些猪源病毒无交叉反应,具有良好的特异性;临床试验表明,该方法能够快速准确地检测出临床组织样本中美洲型及高致病性PRRSV的核酸;此外,本研究用欧洲型PRRSV质粒进一步验证了该方法可以检测出欧洲型PRRSV的目的基因。该方法的建立为不同类型的PRRSV快速检测提供了有效手段,可用于猪繁殖与呼吸综合征疫情的监测及防控。

关键词：欧洲型美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒多重实时荧光定量PCR

鉴别欧洲型和美洲型PRRSV荧光定量RT-PCR方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2013年第3期34卷 51-57页

作者：温青娜周其伟周玲玲河南科技学院高职学院河南辉县453646 达安基因股份有限公司广东广州510665 广东中大南海海洋生物技术工程中心有限公司广东广州510330

为了建立鉴别欧洲型和美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量RT-PCR方法,根据欧洲型和美洲型PRRSV的M基因保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立了能够鉴别欧洲型和美洲型P... 详细信息

为了建立鉴别欧洲型和美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量RT-PCR方法,根据欧洲型和美洲型PRRSV的M基因保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立了能够鉴别欧洲型和美洲型PRRSV的双重双色荧光定量RT-PCR方法。该方法的重复试验表明其组内和组间的变异系数最高分别为1.30%和1.96%;灵敏性及特异性试验表明其检测下限为1×101copies/μL,而且与其他一些猪源病毒无交叉反应,具有良好的特异性。该检测方法的建立为不同型别的PRRSV快速诊断提供了有效手段,能够应用于临床样品检测。

关键词：欧洲型美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒 TaqMan探针荧光定量RT-PCR

欧洲型和美洲型PRRSV双重PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2012年第12期33卷 26-30页

作者：张松林刘磊张太翔马永彪王文秀肖娜沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东省绿都生物科技有限公司山东滨州256600 潍坊出入境检验检疫局山东潍坊261041

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型和美洲型。欧洲型主要流行于欧洲地区,美洲型主要流行于美洲及亚太地区。我国每年从英国和法国... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型和美洲型。欧洲型主要流行于欧洲地区,美洲型主要流行于美洲及亚太地区。我国每年从英国和法国等欧洲国家进口生猪占进口生猪总数的40%左右,但是在我国关于欧洲型PRRSV的报导却很少。为此,论文设计了2对能特异性扩增欧洲型和美洲型PRRSV的引物,建立并优化了可同时检测欧洲型和美洲型PRRSV的双重PCR方法。应用该方法能在3h内对样品进行检测并获得结果,本方法的建立对这两种病毒亚型的快速检测有十分重要的意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型美洲型双重PCR

1株抗欧洲型和美洲型PRRSV核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧与兽医 2010年第12期42卷 30-34页

作者：王晓丰李玉峰王先炜王海燕姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子量约为40 ku。用纯化的重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体。经细胞融合获得一株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,命名为1 B6,将其连续培养20代后仍能稳定分泌抗体。亚型鉴定结果为IgG1型,其轻链为κ链;间接免疫荧光试验和免疫印迹试验均证明,1B6单抗既能与欧洲型PRRSV反应,也能与美洲型PRRSV反应;ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:640,腹水的效价为1:256 000,为猪繁殖与呼吸综合征的诊断奠定了基础。

关键词：欧洲型美洲型 PRRSV 核衣壳蛋白单克隆抗体制备与鉴定 nucleocapsid protein monoclonal antibody 杂交瘤细胞株间接免疫荧光试验呼吸综合猪繁殖重组表达质粒原核表达载体免疫印迹试验杂交瘤技术特异性单抗 RT-PCR方法 Balb/c小鼠 pGEX-6p-1

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP可视化快速检测方法的建立与应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物检疫 2020年第6期37卷 94-99页

作者：程汝佳王林栗云鹏吴迪张玮高晓龙王培李蕊杜鹃张启龙刘海滢沈光年刘晓冬韦海涛周德刚宋彦军北京市动物疫病预防控制中心北京102629

为建立一种快速诊断美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(NA-PRRSV)的可视化检测方法,根据GenBank已发表的美洲型PRRSV经典病毒株JXA1序列,运用在线生物软件设计合成并筛选出1组引物,通过反应体系优化,建立了NA-PRRSV RT-LAMP可视化快速检测方... 详细信息

为建立一种快速诊断美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(NA-PRRSV)的可视化检测方法,根据GenBank已发表的美洲型PRRSV经典病毒株JXA1序列,运用在线生物软件设计合成并筛选出1组引物,通过反应体系优化,建立了NA-PRRSV RT-LAMP可视化快速检测方法,并验证了该方法的特异性、敏感性,同时开展了初步临床应用。结果显示:该方法具有良好的特异性和较高的灵敏度,可检测病毒RNA模板的最低浓度为10 copies/μL;应用该方法检测30份临床样品,结果与实时荧光RT-PCR方法符合率为100%,进一步证实了该方法的可行性。结果表明,所建立的RT-LAMP检测方法具有特异性好、灵敏度高、快速、可视等优点,适用于NA-PRRSV的现场快速检测。本研究为NA-PRRSV的快速、准确鉴别提供了有效手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型环介导等温扩增技术可视化检测

美洲型与欧洲型PRRSV双重RT-PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

北京农学院学报 2021年第4期36卷 76-80页

作者：高雅武欣欣蒋小玲贺晓霜肖兴周双海北京农学院动物科学技术学院北京102206 衡阳市畜牧水产事务中心湖南衡阳421001

【目的】为了建立一种具有高敏感性的能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型与欧洲型毒株的快速检测方法。【方法】从引物浓度与退火温度先对美洲型与欧洲型PRRSV的单项RT-PCR方法分别进行条件筛选与优化,之后对其双重RT-PCR方... 详细信息

【目的】为了建立一种具有高敏感性的能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型与欧洲型毒株的快速检测方法。【方法】从引物浓度与退火温度先对美洲型与欧洲型PRRSV的单项RT-PCR方法分别进行条件筛选与优化,之后对其双重RT-PCR方法进行条件筛选与优化,再进行特异性与敏感性试验和临床样品检测。【结果】建立的美洲型与欧洲型PRRSV双重RT-PCR检测方法不能检出猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒等当前流行较广的猪源RNA病毒,对美洲型与欧洲型PRRSV的检测灵敏度分别是66,40 copies/μL。此方法对2020年5个猪场的200份血清样品的检测结果显示,美洲型与欧洲型PRRSV的个体阳性率分别为44.0%和0,与单项RT-PCR方法检测结果完全一致。【结论】建立了一种高敏感性的美洲型与欧洲型PRRSV双重RT-PCR检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型欧洲型双重RT-PCR 高敏感性