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羌活醇对异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

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羌活醇对异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制研...

作者：王亚君锦州医科大学

学位级别：硕士

目的研究羌活醇对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法1、首先用ISO建立H9c2心肌细胞损伤模型,采用MTT实验考察羌活醇对正常H9c2心肌细胞存活率的影响以及对ISO诱导的H9c2... 详细信息

目的研究羌活醇对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法1、首先用ISO建立H9c2心肌细胞损伤模型,采用MTT实验考察羌活醇对正常H9c2心肌细胞存活率的影响以及对ISO诱导的H9c2心肌损伤细胞存活率的影响;采用比色法检测试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)释放量;2、实验分组如下:空白对照组(Control组),造模组(ISO组),不同浓度羌活醇组(10、20、40μM)。采用活性氧检测试剂盒、黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别检测细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,以考察羌活醇对ISO诱导的H9c2心肌细胞损伤氧化应激水平的影响;3、采用Hoechst 33342染色法、Annexin V-FITC/PI凋亡检验试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)及Western blotting法考察羌活醇对ISO诱导的H9c2心肌损伤细胞线粒体凋亡的影响,最后简单验证对Akt/GSK3β介导的线粒体凋亡信号通路的影响。结果1、ISO可影响H9c2心肌细胞存活率,随着ISO浓度的递增,H9c2细胞存活率逐渐下降。在ISO浓度30μM,48 h细胞存活率下降60%左右。该浓度恰当,可确定模型进行后续实验。2、不同浓度的羌活醇对正常H9c2心肌细胞活性有明显增殖作用;与ISO组相比,不同浓度的羌活醇组可显著提高ISO诱导的H9c2心肌损伤细胞的存活率,同时,降低LDH释放量,且有统计学意义。提示羌活醇对ISO诱导的心肌细胞损伤有一定的保护作用。3、与ISO组相比,不同浓度的羌活醇对ISO诱导的H9c2心肌损伤细胞内绿色荧光强度逐渐减弱,ROS含量逐渐降低;SOD酶活力显著升高;MDA含量显著降低,三者均呈浓度依赖性。提示羌活醇对ISO诱导的心肌细胞损伤具有抗氧化的作用。4、与ISO组相比,不同浓度的羌活醇对ISO诱导的H9c2心肌损伤细胞内蓝色荧光减弱,凋亡细胞和凋亡比例显著减少;线粒体膜电位均升高,呈浓度依赖性。同时,上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白Bax、caspase3和cyto-C的表达。提示,羌活醇可能通过线粒体凋亡通路对ISO诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用。另外,我们发现可上调Akt、GSK3β磷酸化的蛋白表达,提示Akt/GSK3β信号通路可能参与其保护作用。结论羌活醇对ISO诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定的保护作用,并可能通过增强心肌细胞对氧化应激的抵抗能力,Akt/GSK3β介导的线粒体凋亡信号通路来降低对细胞的损伤。

关键词：异丙肾上腺素羌活醇心肌损伤 H9c2细胞氧化应激凋亡

HPLC法测定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和异欧前胡素

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中草药 2006年第6期37卷 937-940页

作者：古丽娜.沙比尔郭洪祝郭慧马晓驰王炜果德安北京大学药学院新疆中药民族药研究所新疆乌鲁木齐830002

羌活为伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H.I.Chang、宽叶羌活N.forbesii Boiss.或川羌活N.franchetii Boiss.的根及根茎，有散表寒、祛风湿、利关节等功效，用于治疗感冒风寒、头痛无汗，风寒湿痹、项强筋急、骨节酸痛、... 详细信息

羌活为伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H.I.Chang、宽叶羌活N.forbesii Boiss.或川羌活N.franchetii Boiss.的根及根茎，有散表寒、祛风湿、利关节等功效，用于治疗感冒风寒、头痛无汗，风寒湿痹、项强筋急、骨节酸痛、风水浮肿、痈疽疮毒等。本属植物的主要活性成分为香豆素类化合物

关键词：羌活醇阿魏酸酯 HPLC法异欧前胡素香豆素类化合物伞形科植物测定乙基宽叶羌活感冒风寒

羌活醇及异欧前胡素对脂多糖诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制的影响

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药学研究 2019年第11期38卷 621-626,634页

作者：杨策高汉云杨素芳王英豪福建中医药大学药学院

目的探讨羌活醇及异欧前胡素对大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制的影响。方法复制经脂多糖(LPS)诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞(CIA-FLS)模型,分别给予不同浓度的羌活醇(25、50、100、200、400μg·mL^-1)、异欧前胡素(25、50、100、200、400... 详细信息

目的探讨羌活醇及异欧前胡素对大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制的影响。方法复制经脂多糖(LPS)诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞(CIA-FLS)模型,分别给予不同浓度的羌活醇(25、50、100、200、400μg·mL^-1)、异欧前胡素(25、50、100、200、400μg·mL^-1)及阳性药泼尼松龙(400μg·mL^-1),另设空白对照组,观察给药前后成纤维样滑膜细胞形态差异;采用噻唑蓝(MTT)法测定不同给药时间、不同给药浓度下成纤维样滑膜细胞的抑制率,计算半数抑制浓度(IC 50);硝酸还原酶法测定羌活醇和异欧前胡素对大鼠成纤维化滑膜细胞中一氧化氮(NO)水平的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。结果造模细胞较正常细胞增殖力强,细胞粗大,纤维样,呈层叠状生长;羌活醇组给药后细胞增殖力减弱,生长良好;异欧前胡素给药后细胞增殖力锐减,生长状况不佳。给药12 h,羌活醇未测出半数抑制浓度值,异欧前胡素半数抑制浓度值为160μg·mL^-1;给药36 h,羌活醇、异欧前胡素半数抑制浓度值分别为190、120μg·mL^-1;给药60 h,分别为80、45μg·mL^-1,异欧前胡素的增殖抑制能力强于羌活醇(P羌活醇与异欧前胡素对一氧化氮总体含量和细胞因子肿瘤坏死因子α含量均有显著性降低(P羌活醇及异欧前胡素对大鼠成纤维样滑膜细胞均有增殖抑制作用(P羌活醇。

关键词：羌活醇异欧前胡素大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制

HPLC测定大鼠体内羌活醇血药浓度及药代动力学研究

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南昌大学学报（医学版） 2012年第7期52卷 8-11,32页

作者：李云霞郑晓鹤孟宪生浙江海正药业股份有限公司浙江台州318000 辽宁中医药大学中药学院辽宁大连116000

目的研究羌活提取物中羌活醇在大鼠体内的药代动力学规律。方法羌活醇分别以60、30和15mg·kg-1剂量大鼠灌胃给药,给药后于不同时间点采血,血浆样品经乙腈处理后,用高效液相色谱(HPLC)-荧光法测定血药浓度,色谱柱:Spherisorb 10ODS(1)(2... 详细信息

目的研究羌活提取物中羌活醇在大鼠体内的药代动力学规律。方法羌活醇分别以60、30和15mg·kg-1剂量大鼠灌胃给药,给药后于不同时间点采血,血浆样品经乙腈处理后,用高效液相色谱(HPLC)-荧光法测定血药浓度,色谱柱:Spherisorb 10ODS(1)(250mm×4.6mm);流动相:甲醇-乙腈-0.025mol·L-1磷酸三乙胺溶液(15∶45∶40);流速:1mL·min-1;检测波长:EM=480nm。不同时间点的数据采用DAS 2.0药代动力学软件拟合处理,计算该药的药代动力学参数,分析羌活醇在体内药代动力学特点。结果血浆样品中,羌活醇的线性范围为1.164×10-4～1.164×10-2 mg·mL-1(r=0.997);各血药浓度的提取回收率均大于80%,日内或日间精密度实验RSD90%。经DAS 2.0药代动力学软件进行自动拟合处理不同时间点的药物血浆浓度,药物药代动力学参数显示:高、中、低3个剂量组(分别为11.64×10-3、5.82×10-3、1.164×10-3 mg·mL-1的血浆样品)中,羌活醇的平均高峰血药浓度(Cmax)分别为(5.243±3.116)、(1.892±0.888)、(0.764±0.120)mg·L-1,血药浓度-时间面积(AUC)(0-∞)相应分别为(32.658±31.202)、(17.511±2.287)、(3.246±2.432)mg·L-1.h-1,说明随着药物剂量的增加,Cmax与AUC也相应的增加。羌活醇高、中、低3个剂量组消除半衰竭(T1/2z)分别为(3.184±1.959)、(3.207±3.036)、(3.013±3.225)h,表明剂量不同,其T1/2z差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用HPLC-荧光法对中药羌活中羌活醇进行药代动力学研究,方法稳定、灵敏度高、专属性强。药代动力学试验显示药物在动物体内吸收、消除较快,代谢迅速,所得结果可为下一步新药试验研究提供参考。

关键词：羌活醇药代动力学高效液相色谱法动物,实验大鼠

高效液相色谱法测定沉香曲中羌活醇、异欧前胡素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

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中南药学 2014年第2期12卷 161-165页

作者：许红莉张明何胜利湖北孝感市康复医院湖北孝感432000 天津药业集团新郑股份有限公司河南新郑451150

目的建立HPLC法测定沉香曲中羌活醇、异欧前胡素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。方法色谱柱为Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流速：0.9 mL min-1;检测羌活醇和异欧前胡素的流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液（67：33）,检测波长... 详细信息

目的建立HPLC法测定沉香曲中羌活醇、异欧前胡素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。方法色谱柱为Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流速：0.9 mL min-1;检测羌活醇和异欧前胡素的流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液（67：33）,检测波长：312 nm;检测木香烃内酯和去氢木香内酯的流动相为乙腈-甲醇-1%冰醋酸溶液（45：24：31）,检测波长：225 nm。结果羌活醇和异欧前胡素进样量分别在0.018 6～0.372 0μg（r=0.999 2）、0.011 2～0.224 0μg（r=0.999 1）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.6%、98.0%,RSD分别为1.6%、1.2%（n=6）;木香烃内酯和去氢木香内酯进样量分别在0.041 4～0.828 0μg（r=0.999 5）、0.010 8～0.216 0μg（r=0.999 7）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.0%、96.2%,RSD分别为1.4%、1.1%（n=6）。结论该方法测定结果准确性强、灵敏度高、重复性好。

关键词：沉香曲羌活醇异欧前胡素木香烃内酯去氢木香内酯高效液相色谱法含量测定

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羌活抗炎质量标志物的挖掘及资源评价

中草药 2023年第2期54卷 652-662页

作者：张英秀张剑光哈马莫支阿木李丽杨子江张志锋西南民族大学青藏高原研究院药学院四川成都610041 钦州市卫生学校广西钦州535000 青藏高原民族药用资源保护与利用国家民委重点实验室四川成都610225 四川省羌彝药用资源保护与利用技术工程实验室四川成都610225

目的基于生物合成途径及网络药理学理念,从“化学成分-靶点”角度对羌活具有抗炎作用的质量标志物(qualitymarker,Q-Marker)进行预测,建立基于Q-Marker的羌活药材质量评价方法。方法首先通过生物合成途径筛选可能的Q-Marker;其次采用... 详细信息

目的基于生物合成途径及网络药理学理念,从“化学成分-靶点”角度对羌活具有抗炎作用的质量标志物(qualitymarker,Q-Marker)进行预测,建立基于Q-Marker的羌活药材质量评价方法。方法首先通过生物合成途径筛选可能的Q-Marker;其次采用中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology,TCMSP)预测和筛选羌活的化学成分及潜在作用靶点,然后在人类基因数据库Genecards及OMIM中检索抗炎相关靶基因,利用Cytoscape软件构建“成分-靶点”网络模型,筛选出羌活抗炎作用的Q-Marker;再次采用分子对接技术对筛选出的化合物与靶点(PTGS2)进行对接;最后采用UHPLC同时测定来自不同基原和不同产地的羌活的Q-Marker以评价其资源品质;结果紫花前胡苷、香叶木苷、佛手柑内酯、羌活醇、异欧前胡素等化合物是羌活抗炎作用的主要活性物质,可作为Q-Marker的主要选择。分子对接结果证实紫花前胡苷、香叶木苷、佛手柑内酯、羌活醇、异欧前胡素等Q-Marker与PTGS2水解酶的结合能低,构象稳定。建立了基于UHPLC-DAD测定羌活Q-Marker的方法,15批不同基原和产地的样品,紫花前胡苷质量分数为0.05~14.84 mg/g,香叶木苷质量分数0.04~3.88 mg/g,佛手柑内酯质量分数为0.07~0.32 mg/g,羌活醇质量分数为0.10~16.76 mg/g,异欧前胡素质量分数为0.20~7.99 mg/g。结论基于生物合成途径、网络药理、分子对接和UHPLC预测并分析羌活抗炎Q-Marker的方法科学、可行,为羌活的质量标准提升和资源品质评价提供新思路。

关键词：羌活生物合成途径网络药理学质量标志物分子对接质量评价紫花前胡苷香叶木苷佛手柑内酯羌活醇异欧前胡素

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羌活提取物微乳剂制备及体外抗真菌活性

农药学学报 2022年第3期24卷 544-551页

作者：张智蕊赵晴李宗霖寇俊杰李娇徐凤波李庆山南开大学化学学院元素有机化学国家重点实验室天津300071

采用乙醇溶液热萃取方法提取羌活根茎活性成分,通过稳定性等物理性能测试进行评价并确定微乳剂最优配方。微乳剂由质量分数(下同)为15%的羌活提取物(含羌活醇0.34%)、9%的环己酮、16%的HMK-2100、10%的乙醇、49.9%的水和0.1%的AF1506组... 详细信息

采用乙醇溶液热萃取方法提取羌活根茎活性成分,通过稳定性等物理性能测试进行评价并确定微乳剂最优配方。微乳剂由质量分数(下同)为15%的羌活提取物(含羌活醇0.34%)、9%的环己酮、16%的HMK-2100、10%的乙醇、49.9%的水和0.1%的AF1506组成。理化性质测试结果表明,所制备的羌活提取物微乳剂各项指标均符合国家标准。为了比较研究其抑菌活性,同时还制备了5%羌活提取物(含羌活醇0.11%)微乳剂和30%羌活提取物(含羌活醇0.68%)乳油。采用菌丝生长速率法研究了羌活提取物不同剂型产品对小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis、辣椒疫霉Phytophthora capsici、水稻稻瘟病菌Pyricularia grisea和水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani的抑制作用。结果显示,15%羌活提取物微乳剂的抑菌效果显著,在用水稀释500倍(羌活提取物质量浓度为300 mg/L,羌活醇质量浓度为6.75 mg/L)后施用,其对水稻稻瘟病菌和水稻纹枯病菌菌丝生长的抑制率均在90%以上。应用性能测试结果表明,羌活提取物微乳剂在绿萝叶片表面具有优异的铺展和润湿能力。

关键词：羌活提取物羌活醇微乳剂表面张力接触角抑菌活性

经典名方羌活胜湿汤指纹图谱及药效关联物质预测分析

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药物分析杂志 2022年第4期42卷 618-629页

作者：乔萍王佳丽谢辉池玉梅杨一帆王洪兰狄留庆赵晓莉南京中医药大学药学院南京210023 江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心南京210023

目的:基于指纹图谱及网络药理学对经典名方羌活胜湿汤(Qianghuo Shengshi Decotation,QSD)进行质量控制及本方治疗风湿痹症功效关联物质预测分析,为其质量控制及临床应用提供依据。方法:采用Waters Xbridge色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)... 详细信息

目的:基于指纹图谱及网络药理学对经典名方羌活胜湿汤(Qianghuo Shengshi Decotation,QSD)进行质量控制及本方治疗风湿痹症功效关联物质预测分析,为其质量控制及临床应用提供依据。方法:采用Waters Xbridge色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),进样量为20μL,柱温35℃,检测波长254 nm(0~19 min,35~70 min),320 nm(19~35 min,70~80 min),建立指纹图谱并确定共有峰,通过与对照品相对保留时间及紫外光谱的比对进行色谱峰对应化合物的指认,经单煎液及阴性煎液对各共有峰进行归属。通过网络药理学分析,建立“QSD—活性成分—靶点—疾病网络图”,并进行通路预测分析。结果:建立QSD物质基准对应实物的HPLC指纹图谱分析方法,对15批物质基准对应实物进行测定,可标定出16个共有峰,覆盖了全方7味饮片;指认出9个成分,分别是升麻素苷、阿魏酸、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸、羌活醇、藁本内酯、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯;各批次物质基准对应实物相似度均>0.9。通过网络药理学对9个成分与类风湿性关节炎的作用机制进行预测分析,排名较前的成分依次为甘草酸、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯、阿魏酸、藁本内酯;蛋白-蛋白关系互作结果显著富集在信号转导和转录激活因子3、白细胞介素6、肿瘤坏死因子等炎症相关的靶点因子上;富集的通路中类风湿性关节炎排名最高,此外,还富集到了IL-17信号通路、Th17细胞分化等诸多炎症相关的通路。结论:建立的QSD指纹图谱分析方法可行且稳定,色谱峰归属明确,采用网络药理学的手段分析QSD中9个成分与类风湿性关节炎的相关性,为其作为药效关联物质提供支撑。

关键词：经典名方羌活胜湿汤类风湿性关节炎网络药理学质量控制指纹图谱药效关联物质升麻素苷阿魏酸甘草苷 5-O-甲基维斯阿米醇苷甘草酸羌活醇藁本内酯蛇床子素二氢欧山芹醇当归酸酯

HPLC法同时测定双活风湿凝胶贴膏中5种成分

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中成药 2023年第5期45卷 1443-1446页

作者：季文莹李季文毕映燕肖正国胡茹英刘效栓兰州大学第二医院甘肃兰州730000 甘肃省中医院甘肃兰州730050

目的建立HPLC法同时测定双活风湿凝胶贴膏中升麻素苷、羟基红花黄色素A、羌活醇、蛇床子素、异欧前胡素的含量。方法该药物60%甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry Shield-C_(18)色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定双活风湿凝胶贴膏中升麻素苷、羟基红花黄色素A、羌活醇、蛇床子素、异欧前胡素的含量。方法该药物60%甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry Shield-C_(18)色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温20℃;检测波长310、400 nm。结果5种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率98.04%~99.29%,RSD 1.19%~2.27%。结论该方法稳定,重复性好,分辨率高,可用于双活风湿凝胶贴膏的质量控制。

关键词：双活风湿凝胶贴膏升麻素苷羟基红花黄色素A 羌活醇蛇床子素异欧前胡素 HPLC