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中国罗非鱼主养区无乳链球菌的分子流行特征及其传播方式

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中国水产科学 2017年第3期24卷 606-614页

作者：张德锋袁伟可小丽刘志刚曹建萌卢迈新王淼衣萌萌中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室农业部渔用药物创制重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为分析2007—2015年中国罗非鱼主养区无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的分子特征和流行情况,分离并收集了248株罗非鱼源无乳链球菌。通过分子血清型、MLST、毒力基因和前噬菌体等分型方法对248株无乳链球菌进行了分子遗传特征分... 详细信息

为分析2007—2015年中国罗非鱼主养区无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的分子特征和流行情况,分离并收集了248株罗非鱼源无乳链球菌。通过分子血清型、MLST、毒力基因和前噬菌体等分型方法对248株无乳链球菌进行了分子遗传特征分析。结果表明,229株无乳链球菌(92.3%)的分子血清型是Ⅰa型,其余19株均是Ⅰb型(7.7%)。MLST分析结果表明,所有Ⅰa型无乳链球菌都是ST7型,所有Ⅰb型无乳链球菌都是ST261型。毒力基因检测结果发现,229株Ⅰa-ST7型无乳链球菌的毒力基因型相同,即V1型;19株Ⅰb-ST261型无乳链球菌的毒力基因型相同,即V2型。前噬菌体检测结果表明,Ⅰa-ST7型无乳链球菌可分为两种前噬菌体基因型,分别是P1型(36株)和P2型(193株);Ⅰb-ST261型无乳链球菌的10个前噬菌体基因都是阴性,即P3型。根据以上4种分子分型方法可将248株无乳链球菌分为3种基因型,即Ⅰa-ST7-V1-P1型、Ⅰa-ST7-V1-P2型和Ⅰb-ST261-V2-P3型。2010—2011年主要流行菌株由Ⅰa-ST7-V1-P1型转变为Ⅰa-ST7-V1-P2型,其中Ⅰa-ST7-V1-P1型是2011年之前的主要流行菌株,Ⅰa-ST7-V1-P2型在2011年及之后成为主要流行菌株。研究表明,近年来我国罗非鱼源无乳链球菌发生了明显的遗传变异,同时,根据我国罗非鱼主养区无乳链球菌的流行特点,推测我国罗非鱼源无乳链球菌是通过苗种或水体等介质进行传播的,属于输入性传播方式。

关键词：罗非鱼无乳链球菌分子血清型 MLST 毒力基因前噬菌体

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不同培养条件对罗非鱼肠道乳酸菌分离的影响

应用与环境生物学报 2016年第1期22卷 133-139页

作者：刘元雪李晓晖施文正洪楠高筠上海海洋大学食品学院上海201306

为了解罗非鱼肠道乳酸菌群多样性和优势菌种,促进乳酸菌在罗非鱼养殖中的应用,采用MRS、M17、TPY、Elliker四种培养基,分别在有氧、厌氧以及30℃、37℃和45℃温度条件下分离罗非鱼肠道乳酸菌,分析不同培养基、培养温度、有氧和厌氧条件... 详细信息

为了解罗非鱼肠道乳酸菌群多样性和优势菌种,促进乳酸菌在罗非鱼养殖中的应用,采用MRS、M17、TPY、Elliker四种培养基,分别在有氧、厌氧以及30℃、37℃和45℃温度条件下分离罗非鱼肠道乳酸菌,分析不同培养基、培养温度、有氧和厌氧条件对罗非鱼肠道乳酸菌分离的影响;并对分离到的菌株进行分子鉴定和16S r RNA序列分析,构建系统发育树,比较不同分离条件下分离肠道乳酸菌的遗传多样性.结果表明,不同培养基对罗非鱼肠道乳酸菌的分离效果有一定的差异,其中MRS培养基的分离效果最好,且遗传多样性最高;37℃较30℃对乳酸菌的分离更加有利,45℃未分离到乳酸菌;有氧条件下共分离出8种33株乳酸菌,主要为杆菌;厌氧条件下得到10种24株乳酸菌,主要为球菌.共分离到植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)29株,可能是罗非鱼肠道优势乳酸菌种.本研究可为开发水产养殖肠道乳酸菌提供依据,并推广到其他种类的鱼肠道乳酸菌的分离和鉴定.

关键词：培养基培养温度有氧/厌氧罗非鱼乳酸菌系统发育分析

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多段滚筒式罗非鱼高效低损去鳞工艺

水产学报 2021年第7期45卷 1101-1110页

作者：郑晓伟陈庆余张军文中国水产科学研究院渔业机械仪器研究所农业农村部远洋渔船与装备重点实验室国家水产品加工装备研发分中心(上海) 大连工业大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心

滚筒去鳞是鱼类连续去鳞加工的有效方法之一,虽然国内已有去鳞设备应用于实际生产,但实际去鳞效果和损伤等方面还无法完全满足生产需求。为探究不同去鳞部件在滚筒式去鳞加工过程中的实际效果和影响因素,该研究选取钢板网、圆形孔网、... 详细信息

滚筒去鳞是鱼类连续去鳞加工的有效方法之一,虽然国内已有去鳞设备应用于实际生产,但实际去鳞效果和损伤等方面还无法完全满足生产需求。为探究不同去鳞部件在滚筒式去鳞加工过程中的实际效果和影响因素,该研究选取钢板网、圆形孔网、角钢刀具和螺纹钢4种去鳞结构件,设计滚筒去鳞实验装置并开展工艺参数研究,测量不同条件下去鳞率并观察分析损伤情况,在此基础上设计多段滚筒去鳞装置并进行试验验证。结果显示,去鳞时间和滚筒转速是影响钢板网和圆形孔网去鳞效果的主要参数,不同去鳞时间下的去鳞率差异显著,去鳞率随时间延长不断上升。在滚筒转速为35 r/min,去鳞时间接近4 min时,去鳞率可达95%;相同时间和转速下,各去鳞部件的去鳞效果依次为钢板网>角钢道具>圆形孔网>螺纹钢,对鱼体的损伤程度依次为螺纹钢罗非鱼多段滚筒去鳞装置的工艺参数,可为罗非鱼滚筒去鳞设备的完善和优化提供依据。

关键词：罗非鱼去鳞损伤率多段滚筒

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山美水库两种入侵罗非鱼繁殖生物学比较

水生生物学报 2023年第4期47卷 657-665页

作者：李俊锋王江滨刘智暘刘俏郭超廖传松李为郭传波张堂林刘家寿中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室东湖湖泊生态系统试验站武汉430072 中国科学院大学北京100049 泉州市山美水库水资源调配中心泉州362008 华中农业大学水产学院武汉430072

为比较山美水库两种入侵齐氏罗非鱼(Coptodon zillii)和伽利略罗非鱼(Sarotherodon galilaeus)种群的繁殖生物学特征,于2021年3—10月份在山美水库逐月采样,分析了繁殖时间、性比、绝对繁殖力、相对繁殖力和成熟卵径等特征。结果表明,... 详细信息

为比较山美水库两种入侵齐氏罗非鱼(Coptodon zillii)和伽利略罗非鱼(Sarotherodon galilaeus)种群的繁殖生物学特征,于2021年3—10月份在山美水库逐月采样,分析了繁殖时间、性比、绝对繁殖力、相对繁殖力和成熟卵径等特征。结果表明,两种罗非鱼均于4月份开始繁殖,齐氏罗非鱼繁殖高峰为7月,10月结束繁殖;伽利略罗非鱼繁殖高峰为6月,9月结束繁殖。齐氏罗非鱼平均绝对繁殖力为(4009.85±1305.69)粒、平均体重相对繁殖力为(67.32±15.63)粒/g、平均体长相对繁殖力为(31.31±5.03)粒/mm;伽利略罗非鱼平均绝对繁殖力为(1701.85±591.29)粒、平均体重相对繁殖力为(6.46±0.87)粒/g、平均体长相对繁殖力为(8.22±2.33)粒/mm;齐氏罗非鱼的绝对繁殖力、体重相对繁殖力和体长相对繁殖力均显著高于伽利略罗非鱼,平均成熟卵径则显著小于伽利略罗非鱼。齐氏罗非鱼和伽利略罗非鱼繁殖群体的雌雄性比分别为1.59和1.83,两个种群的雌雄性比无显著差异,但均显著偏离1﹕1。研究表明两种共同入侵的罗非鱼种群具有不同的繁殖策略,这是其成为优势鱼类类群的关键因素,研究结果可为山美水库两种共同入侵罗非鱼种群的控制提供科学依据。

关键词：山美水库繁殖生物学共同入侵罗非鱼

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罗非鱼冷藏期间内源蛋白酶和热休克蛋白70对肌原纤维解离的影响

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食品与发酵工业 2023年第11期49卷 140-146页

作者：范铭良郝淑贤李来好陈胜军岑剑伟吴燕燕魏涯相欢黄卉上海海洋大学食品学院上海201306 中国水产科学研究院南海水产研究所国家水产品加工技术研发中心农业农村部水产品加工重点实验室广东广州510300 三亚热带水产研究院海南省深远海渔业资源高效利用与加工重点实验室海南三亚572018

为研究罗非鱼冷藏期间内源蛋白酶和热休克蛋白70与肌原纤维解离的关系,实验测定了罗非鱼肉在4℃真空包装冷藏48 h内肌原纤维小片化指数、肌原纤维解离、内源蛋白酶活性和热休克蛋白70含量的变化,并对其进行相关性分析。结果表明鱼肉冷... 详细信息

为研究罗非鱼冷藏期间内源蛋白酶和热休克蛋白70与肌原纤维解离的关系,实验测定了罗非鱼肉在4℃真空包装冷藏48 h内肌原纤维小片化指数、肌原纤维解离、内源蛋白酶活性和热休克蛋白70含量的变化,并对其进行相关性分析。结果表明鱼肉冷藏期间肌原纤维小片化指数变化整体呈增加的趋势,最终为初始值的3.52倍;解离的肌球蛋白重链和肌动蛋白的含量呈升高的趋势,最终分别较初始值提高了70%和65%;pH变化为先减少后略微回升,变化范围为6.5~7.0;组织蛋白酶B、L活性持续增加,组织蛋白酶D和钙激活蛋白酶活性呈先增加后减少的趋势,且分别在8、12 h到达最大值;热休克蛋白70含量为先增加后减少,在4 h时达到最大值,最终相比初始值下降了22.27%;肌原纤维小片化指数与组织蛋白酶B、L活性呈极显著正相关(P<0.01),与肌原纤维解离的肌球蛋白重链和肌动蛋白含量均呈极显著正相关(P<0.01),与热休克蛋白70含量呈显著负相关(P<0.05);热休克蛋白70含量与与组织蛋白酶L呈显著负相关(P<0.05)。组织蛋白酶B、L是影响肌原纤维完整性的关键蛋白酶,热休克蛋白70能与肌原纤维粗丝和细丝结合稳定肌原纤维结构,且组织蛋白酶L可能通过降解热休克蛋白70来影响肌原纤维粗丝和细丝的解离。

关键词：罗非鱼内源蛋白酶活性热休克蛋白70 肌原纤维小片化指数

镉离子对尼罗罗非鱼精巢N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的失活动力学（英文）

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应用与环境生物学报 2018年第3期24卷 609-614页

作者：林心宇张颖张伟妮吴方达黄一帆黄小红福建省兽医中药与动物保健重点实验室(福建农林大学) 福州350002 宁德市动物疾病预防控制中心宁德352100

镉离子污染对水生生物的繁殖造成了不利影响,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）被认为参与了动物的受精过程.为了解镉离子对罗非鱼繁殖的影响,以尼罗罗非鱼精巢分离获得的NAGase酶为研究对象,采用底物反应动力学方法,建立镉离子对NA... 详细信息

镉离子污染对水生生物的繁殖造成了不利影响,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）被认为参与了动物的受精过程.为了解镉离子对罗非鱼繁殖的影响,以尼罗罗非鱼精巢分离获得的NAGase酶为研究对象,采用底物反应动力学方法,建立镉离子对NAGase酶的失活模型,探究镉离子对该酶活性的影响.结果显示,镉离子对NAGase表现出了可逆的抑制,对NAGase抑制的IC_（50）为40.95 mmol/L.镉离子对NAGase的抑制机理为竞争型抑制,抑制常数KI为17.13mmol/L,同时测定了微观失活速度常数.本研究表明镉离子对NAGase的抑制类型为竞争型的可逆抑制,结果可为后期研究镉离子对罗非鱼繁殖性能的研究提供理论基础.

关键词：失活动力学 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶罗非鱼镉离子

罗非鱼无乳链球菌ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除菌株的构建及其特性分析

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南方水产科学 2022年第4期18卷 76-86页

作者：马艳平郝乐冯国清梁志凌马江耀柯浩刘振兴广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东广州510640

Ⅶ型分泌系统存在于无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)中,其组成膜蛋白对底物蛋白的分泌转运至关重要。为此利用热敏型自杀质粒,构建了含氯霉素筛选标签的膜蛋白重组敲除载体pSET4s-ΔessA、pSET4s-ΔessB、pSET4s-ΔessC,经同源重... 详细信息

Ⅶ型分泌系统存在于无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)中,其组成膜蛋白对底物蛋白的分泌转运至关重要。为此利用热敏型自杀质粒,构建了含氯霉素筛选标签的膜蛋白重组敲除载体pSET4s-ΔessA、pSET4s-ΔessB、pSET4s-ΔessC,经同源重组后,利用PCR技术筛选到了其缺失突变株-无乳链球菌ΔessA、ΔessB、ΔessC。通过菌株生长曲线分析,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较野生株(WT)生长过程变慢,其中ΔessA、ΔessB敲除株在生长早期有显著性差异(P<0.01)。对ESAT6蛋白分泌影响分析显示,与WT株相比,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株ESAT6的表达量均显著下调(P<0.01)。结果显示,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较WT株毒力显著降低(P<0.01)。研究表明,essA、essB、essC为无乳链球菌Ⅶ型分泌系统重要的膜蛋白,其基因缺失造成了分泌蛋白ESAT6 mRNA表达水平下降,影响了菌株毒力。

关键词：罗非鱼无乳链球菌 Ⅶ型分泌系统膜蛋白敲除菌株构建生物学特性分析

寄生于罗非鱼的刺纹车轮虫种群分析及其寄主偏好性研究

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水生生物学报 2020年第6期44卷 1247-1255页

作者：秦微微赵元莙唐发辉重庆师范大学动物生物学重点实验室重庆401331

文章在刺纹车轮虫Trichodina centrostrigata Basson,Van As&Paperna,1983的重描述基础上,基于形态学特征、分子特征及系统发育分析,对其种群多样性及寄主偏好性进行了研究。结果表明,刺纹车轮虫三个种群:Trichodina centrostrigata(KP2... 详细信息

文章在刺纹车轮虫Trichodina centrostrigata Basson,Van As&Paperna,1983的重描述基础上,基于形态学特征、分子特征及系统发育分析,对其种群多样性及寄主偏好性进行了研究。结果表明,刺纹车轮虫三个种群:Trichodina centrostrigata(KP295473)、Trichodina centrostrigata(W)和Trichodina centrostrigata(Q)在历经4年的时间里,未发生明显的种群分化;其次,刺纹车轮虫与寄生于海水寄主的车轮虫聚支,表明二者具有较近的亲缘关系;再次,刺纹车轮虫主要寄生于鲈形目的广盐性罗非鱼,少数寄生于其他淡水鱼类,具有较强的寄生特异性;最后,此研究中的寄主罗非鱼对于刺纹车轮虫具有100%的高感染率,表明刺纹车轮虫为罗非鱼养殖业中一类潜在病害性微生物。

关键词：刺纹车轮虫种群罗非鱼寄主偏好性感染率

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罗非鱼肾脏细胞系的建立及其生物学特性

中国水产科学 2019年第2期26卷 382-390页

作者：赵建青贾鹏刘文枝周勇江南范玉顶易梅生曾令兵中国水产科学研究院长江水产研究所中山大学海洋学院

采用组织块移植法,对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的肾脏组织细胞进行原代培养,建立了罗非鱼肾脏细胞系,已稳定传代培养50代以上,命名为TiK。罗非鱼肾脏细胞系为纤维样细胞,其最佳培养基为DMEM,最适培养温度为28℃,最适血清浓度为... 详细信息

采用组织块移植法,对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的肾脏组织细胞进行原代培养,建立了罗非鱼肾脏细胞系,已稳定传代培养50代以上,命名为TiK。罗非鱼肾脏细胞系为纤维样细胞,其最佳培养基为DMEM,最适培养温度为28℃,最适血清浓度为15%。在最适培养条件下,罗非鱼肾脏细胞系的群体倍增时间为45.8 h。细胞经液氮冷冻保存6个月后进行复苏,经台盼蓝染色,约(89.84±3.48)%的细胞具有活性,复苏后细胞生长旺盛。染色体分析显示,第32代罗非鱼肾脏细胞系染色体数目分布在20～66之间,众数为48。使用本实验室分离鉴定的罗非鱼病毒感染罗非鱼肾脏细胞,可产生典型的细胞病变效应,表明罗非鱼肾脏细胞对该病毒敏感。该细胞系的建立为罗非鱼病毒病防控技术研究提供了重要的实验材料。

关键词：罗非鱼肾脏细胞系生物学特性病毒敏感性