检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

网格蛋白介导胞吞在血管通透性增高中的作用

中华实验外科杂志 2015年第11期32卷 2681-2684页

作者：张晔张连阳李阳谭浩孙士锦第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的观察网格蛋白介导的血管内皮钙黏蛋白（VE-Cad）胞吞在脂多糖（LPS）诱导血管通透性增高中的作用.方法以人血管内皮细胞株CRL-2922为研究对象,采用Western blot、免疫共沉淀、免疫组织化学等方法,观察LPS处理不同时间点的VE-Cad... 详细信息

目的观察网格蛋白介导的血管内皮钙黏蛋白（VE-Cad）胞吞在脂多糖（LPS）诱导血管通透性增高中的作用.方法以人血管内皮细胞株CRL-2922为研究对象,采用Western blot、免疫共沉淀、免疫组织化学等方法,观察LPS处理不同时间点的VE-Cad蛋白表达和单层细胞通透性、网格蛋白与VE-Cad的共沉淀和共定位,以及网格蛋白胞吞抑制剂对LPS处理后网格蛋白与VE-Cad的共沉淀、VE-Cad蛋白表达和单层细胞通透性的影响.结果（1）LPS（10 mg/L）处理后VE-Cad的质膜表达逐渐降低（0.621 ±0.092降至0.162±0.035,P＜0.05）,单层细胞通透性逐渐增高（0.263±0.042增至0.751 ±0.102,P＜0.05）;（2） LPS处理后网格蛋白表达逐渐降低（0.525±0.047降至0.270±0.032,P＜0.05）,与VE-Cad的免疫共沉淀在1h时增高（0.289±0.055,P＜0.05）,之后逐渐降低,免疫组织化学激光共聚焦显微镜观察其共定位显示同样的变化;（3）网格蛋白胞吞抑制剂氯丙嗪（CPZ,100μmol/L）可以显著降低LPS处理1h网格蛋白与VE-Cad的免疫共沉淀（0.127±0.034,P＜0.05）,增高VE-Cad的质膜表达（0.603±0.071,P＜0.05）,改善单层细胞通透性（0.319±0.045,p＜0.05）;但对LPS处理4h网格蛋白与VE-Cad的免疫共沉淀、VE-Cad质膜表达以及单层细胞通透性没有显著影响.结论网格蛋白介导VE-Cad胞吞参与LPS作用早期血管通透性增高的形成,但不影响LPS作用后期的血管通透性增高.

关键词：血管通透性增高脂多糖血管内皮钙黏蛋白网格蛋白

网格蛋白接头蛋白复合体AP1σ亚基的遗传功能分析

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

网格蛋白接头蛋白复合体AP1σ亚基的遗传功能分析

作者：徐梅浙江师范大学

学位级别：硕士

网格蛋白介导的膜蛋白运输(clathrin-mediated trafficking)在动植物细胞胞外物质吸收、质膜蛋白外吐、内吞与降解、胞内外信号传递等细胞生物学过程中具有重要生物学功能。在植物细胞中,网格蛋白主要定位于细胞质膜、反式高尔基网络或... 详细信息

网格蛋白介导的膜蛋白运输(clathrin-mediated trafficking)在动植物细胞胞外物质吸收、质膜蛋白外吐、内吞与降解、胞内外信号传递等细胞生物学过程中具有重要生物学功能。在植物细胞中,网格蛋白主要定位于细胞质膜、反式高尔基网络或早期内体(trans-Golginetwork/earlyendosome;TGN/EE)上。因此,网格蛋白主要在质膜和TGN/EE上发挥其生物学功能。然而,网格蛋白在质膜和TGN/EE上的具体招募机制目前仍没有被彻底弄清楚。最近的研究表明,拟南芥网格蛋白被招募到质膜和TGN/EE上分别由接头蛋白AP2(adaptor protein 2)和AP1复合体来介导完成。AP1复合体是由AP1γ、AP1/2β、AP1μ和AP1σ组成的异源四聚体,定位于TGN/EE上;而AP2复合体是由AP2α、AP1/2 β、AP2μ和AP2σ组成异源四聚体,定位于细胞质膜上。目前对拟南芥AP2亚基的生物学功能鉴定及其网格蛋白质膜招募机制的研究相对较为深入,而对AP1复合体的功能研究相对比较落后。为此,本研究利用生物信息学、遗传学、细胞生物学和生理生化等分析技术,分析鉴定了 AP1σ亚基的遗传学功能和亚细胞定位,具体研究结果如下:(1)利用生物信息学分析技术和哺乳动物AP1σ氨基酸序列,发现了拟南芥基因组含有两个AP1σ同源基因,分别被命名为AP1σ1和AP1σ2。氨基酸同源序列比对发现,AP1σ1和AP1σ2的同源性高达97%,与哺乳动物的同源性为58%。(2)利用PCR和RT-PCR技术,成功分离并鉴定了两个AP1σ1和AP1σ2功能缺失突变体ap1σ1-1和ap1σ2-1,并进一步制备了ap1σ1-1 aplσ2-1双突变体。发育表型分析结果表明,ap1σ2-1的花器官与野生型相似,但豆荚短小、结实率显著下降,ap1σ1-1ap1σ2-1(杂合het/纯合hom)的结实率比ap1σ2-1单突变体更低,ap1σ1-1ap1σ2-1(hom/hom)的根短小、下胚轴较粗、子叶深色,且幼苗致死。相反,ap1σ1-1的植株生长发育和结实率等表型与野生型相似。(3)亚历山大染色镜检结果表明,ap1σ1-1的花粉活性、数量与野生型完全相似。尽管ap1σ2-1和ap1σ1-1ap1σ2-1(het/hom)花粉活性正常但数量比野生型显著减少,并且,ap1σ1-1 ap1σ2-1(het/hom)数量比ap1σ2-1更少。这些分析结果与突变体结实率分析结果相一致,表明AP1σ2功能缺失抑制花粉形成从而影响植株育性,但AP1σ1与AP1σ2在育性上有一定的功能冗余性。(4)利用分子克隆技术和转基因方法,制备了35S::AP1σ1-GF 和35S::AP1σ2-GFP转基因植株,用激光共聚焦显微镜观察证实融合蛋白成功表达,定位于胞内并且呈斑点状分布。荧光共定位分析结果显示,AP1σ1-GFP和AP1σ2-GFP与TGN/EE定位的分子标记AP1μ-RFP、CLC1-mKO有较高的共定位系数(0.6-0.8),即有高达60～80%荧光信号完全共定位,表明AP1σ的确定位于TGN/EE上。根据以上分析结果,本研究可初步获得以下结论:拟南芥基因组含有2个AP1σ亚基基因AP1σ1和AP1σ2,其中,AP1σ2功能缺失抑制了花粉的形成或发育,从而引起花粉数量下降,最终导致植株结实率下降;AP1σ1和AP1σ2功能同时缺失引起幼苗致死。此外,AP1σ定位于TGN/EE上,证实了 AP1复合体的确在TGN/EE起作用。这些分析结果为进一步研究AP1的生物学功能打下了坚实的基础,为阐明AP1介导的网格蛋白TGN/EE招募机制提供了新的研究材料。

关键词：拟南芥网格蛋白接头蛋白 AP1σ TGN/EE

拟南芥磷酸肌醇激酶FAB1调控网格蛋白质膜招募

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

拟南芥磷酸肌醇激酶FAB1调控网格蛋白质膜招募

作者：冯晓莉兰州大学

学位级别：硕士

磷酸肌醇(Phosphoinositides,PIs)尽管只占细胞磷脂的一小部分,但参与各种细胞活动,包括信号转导、细胞骨架重组、膜动力学和囊泡运输等。网格蛋白介导的内吞(Clathrin-mediated endocytosis,CME)是真核生物质膜(Plasma membrane,PM)蛋... 详细信息

磷酸肌醇(Phosphoinositides,PIs)尽管只占细胞磷脂的一小部分,但参与各种细胞活动,包括信号转导、细胞骨架重组、膜动力学和囊泡运输等。网格蛋白介导的内吞(Clathrin-mediated endocytosis,CME)是真核生物质膜(Plasma membrane,PM)蛋白内吞的主要途径之一。前期研究表明,磷酸肌醇PI(4,5)P和PI(3,4)P分别通过调控网格蛋白质膜招募和网格蛋白包被小窝(Clathrin-coated pits,CCP)的成熟,进而影响CME过程。最新报道发现,PI(3,5)P的合成基因FAB1调控质膜蛋白BOR1(Borate receptor 1,BOR1)的内吞。然而,目前对于FAB1是否参与调控网格蛋白质膜招募以及FAB1与网格蛋白介导的内吞之间是否存在关系都尚无定论。为探索FAB1与CME之间的调控关系,本研究以fab1b/fab1c/fab1d(简写为fab1b/c/d)三突变体为研究材料,采用遗传学、细胞生物学和药理学等研究策略,结合激光共聚焦显微镜(confocal)技术,初步分析了拟南芥FAB1在网格蛋白、接头蛋白(Adaptor protein,AP)和动力蛋白(Dynamic protein)质膜招募以及质膜蛋白内吞的调控作用。同时,也发现了FAB1在表皮毛(trichome)形态维持中的功能。具体研究结果如下:(1)遗传学表型结果发现,fab1b/c/d突变体中表皮毛的密度降低,出现塌陷以及多分叉等表型;组织特异性GUS染色结果显示FAB1B和FAB1C在表皮毛中表达;将FAB1B和FAB1C分别导入到fab1b/c/d三突变体中都能部分恢复表皮毛塌陷表型。这些结果说明了FAB1在拟南芥表皮毛生长发育和形态维持中具有重要作用。(2)细胞生物学研究结果表明,FAB1B、FAB1C和FAB1D功能缺失抑制了内吞示踪剂FM4-64的内化;在BFA处理下,与野生型相比,fab1b/c/d三突变体中PIN2的内吞速率减慢。这些研究结果表明FAB1功能破坏抑制了质膜蛋白的内吞。(3)活细胞成像分析表明,在fab1b/c/d三突变体中,网格蛋白轻链CLC3(Clathrin light chain 3,CLC3)和重链CHC2(Clathrin heavy chain 2,CHC2)、接头蛋白AP2σ和TPC(TPLATE complex,TPC)以及动力蛋白DRP1C在质膜上的荧光信号显著下降。同时,免疫定位和Western Blot结果也证明了网格蛋白CLC3和CHC2、接头蛋白AP2σ在质膜上丰度显著下降。上述研究结果表明,FAB1可能介导了网格蛋白、接头蛋白以及动力蛋白的质膜招募,进而影响了网格蛋白介导的内吞。(4)酵母双杂交实验证明,FAB1B、FAB1C和FAB1D与CLC3、CHC2及AP2σ之间不互作。这一研究结果暗示了FAB1对网格蛋白质膜招募的调控并不是通过直接的相互作用,而是依赖于一个或几个未知的效应因子。综上所述,可初步获得以下结论:FAB1参与调控拟南芥叶片皮毛的正常发育和形态维持;FAB1参与网格蛋白、接头蛋白AP2和TPC在质膜上的招募,从而调控CME过程,但FAB1与CME关键基因并不存在直接的相互作用。本研究结果初步阐明了FAB1调控CME的分子机理,对进一步深入研究具有重要的科学意义。

关键词：磷酸肌醇 FAB1 网格蛋白内吞质膜招募拟南芥

脂多糖作用下血管内皮钙黏蛋白经网格蛋白和微囊介导胞吞后的亚细胞分布差异

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

解放军医学杂志 2016年第1期41卷 22-25页

作者：张晔张连阳孙士锦谭浩李阳第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的研究脂多糖(LPS)作用下血管内皮钙黏蛋白(VE-Cad)经不同的胞吞途径进入细胞后对VE-Cad亚细胞分布和细胞通透性的影响。方法体外培养人血管内皮细胞株CRL-2922,观察LPS(10μg/ml)作用后不同时间点VECad与R ab11(循环内颗粒标记物)及... 详细信息

目的研究脂多糖(LPS)作用下血管内皮钙黏蛋白(VE-Cad)经不同的胞吞途径进入细胞后对VE-Cad亚细胞分布和细胞通透性的影响。方法体外培养人血管内皮细胞株CRL-2922,观察LPS(10μg/ml)作用后不同时间点VECad与R ab11(循环内颗粒标记物)及溶酶体相关膜蛋白2(L AMP2,晚期内颗粒/溶酶体标记物)的免疫共沉淀情况,网格蛋白胞吞抑制剂和微囊抑制剂对VE-Cad与Rab11和LAMP2免疫共沉淀的影响,以及单层细胞通透性的变化。结果LPS作用后1h,VE-Cad与Rab11的免疫共沉淀明显增高(P网格蛋白胞吞抑制剂氯丙嗪(CPZ)可显著抑制LPS作用后VE-Cad与Rab11免疫共沉淀的增高(P网格蛋白胞吞抑制剂无此作用。网格蛋白胞吞抑制剂可减轻LPS作用后1h单层细胞通透性的增高,而微囊抑制剂可减轻LPS作用后4h单层细胞通透性的增高(P网格蛋白或微囊介导的胞吞进入细胞,分布于循环内颗粒或溶酶体中,从而导致不同程度的血管通透性增高。

关键词：毛细血管通透性脂多糖类钙黏着糖蛋白类网格蛋白细胞质膜微囊

猪瘟病毒通过网格蛋白介导的内吞途径入侵ST细胞

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2017年第1期48卷 140-149页

作者：梁武龙方佳林鸷郑敏萍鲍长磊王涛张彦明西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

病毒入侵易感细胞是病毒建立感染的必要过程,猪瘟病毒如何入侵易感细胞尚未明确。笔者对猪瘟病毒入侵细胞与网格蛋白介导的内吞途径的关系进行了初步研究。通过利用抑制剂氯丙嗪和Dynasore及shRNA技术,对网格蛋白及动力蛋白功能进行抑制... 详细信息

病毒入侵易感细胞是病毒建立感染的必要过程,猪瘟病毒如何入侵易感细胞尚未明确。笔者对猪瘟病毒入侵细胞与网格蛋白介导的内吞途径的关系进行了初步研究。通过利用抑制剂氯丙嗪和Dynasore及shRNA技术,对网格蛋白及动力蛋白功能进行抑制,干扰网格蛋白介导的内吞途径,发现猪瘟病毒的细胞入侵效率明显下降;通过利用内体酸化抑制剂NH4Cl及shRNA技术下调内体标志蛋白Rab5和Rab7的表达量,发现内体酸化过程受到抑制后猪瘟病毒的感染效率受到了明显抑制。本研究初步证明猪瘟病毒能够利用网格蛋白介导的内吞途径完成对易感细胞的入侵,感染的过程依赖于初级内体和次级内体,为了解猪瘟病毒的感染过程积累了新的数据。

关键词：猪瘟病毒入侵网格蛋白内体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

节肢动物体内网格蛋白的研究进展

中国动物传染病学报 2019年第5期27卷 112-118页

作者：旷策嫣周荣琼周金林西南大学动物科学学院重庆402460 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

网格蛋白是一种分布广泛的笼形蛋白,介导的内吞作用在多细胞与单细胞生物中具有至关重要的作用。网格蛋白的内吞作用机制主要是包裹货物的囊泡的形成、断裂与回收等阶段。研究发现,节肢动物体内营养物质的吸收、dsRNA的干扰、病毒的传... 详细信息

网格蛋白是一种分布广泛的笼形蛋白,介导的内吞作用在多细胞与单细胞生物中具有至关重要的作用。网格蛋白的内吞作用机制主要是包裹货物的囊泡的形成、断裂与回收等阶段。研究发现,节肢动物体内营养物质的吸收、dsRNA的干扰、病毒的传播等生理过程均是通过网格蛋白介导的内吞作用进行的。本文主要对节肢动物体内网格蛋白介导的内吞作用在的研究进展进行介绍。

关键词：网格蛋白内吞作用节肢动物

水稻网格蛋白介导的内吞调控氮钾吸收的分子机理初探

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

水稻网格蛋白介导的内吞调控氮钾吸收的分子机理初探

作者：王娜娜兰州大学

学位级别：硕士

网格蛋白介导的内吞(Clathrin-mediated endocytosis,CME)是真核生物中由进化上高度保守的网格蛋白(Clathrin)及其接头蛋白(Adaptor protein)将细胞表面货物蛋白(Cargo protein)内化的主要途径之一。植物细胞表面还分布多种营养元素转... 详细信息

网格蛋白介导的内吞(Clathrin-mediated endocytosis,CME)是真核生物中由进化上高度保守的网格蛋白(Clathrin)及其接头蛋白(Adaptor protein)将细胞表面货物蛋白(Cargo protein)内化的主要途径之一。植物细胞表面还分布多种营养元素转运蛋白参与调控营养元素吸收和转运。前期研究结果表明,在双子叶模式植物拟南芥细胞中CME途径参与调节硼、铁等营养元素转运蛋白的质膜内吞。然而,CME是否参与单子叶模式植物水稻中营养元素转运蛋白内吞,进而影响营养元素吸收及其分子作用机理目前仍未见报道。为探索水稻中网格蛋白介导的内吞与营养元素转运蛋白之间的调控机制,结合实验室前期的研究工作,以水稻日本晴为研究材料,利用分子遗传学、药理学和细胞生物学等方法,初步分析了水稻网格蛋白的遗传学和生物学功能以及网格蛋白在氮和钾吸收过程中潜在的分子调控机制。具体研究结果如下:(1)利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻(日本晴)网格蛋白基因,并成功制备了Oschc1、Osclc2和Osclc3单突变纯合体和Osclc2Osclc3双突变纯合体。种子萌发实验结果显示,野生型与Osclc3单突变体在第5天的萌发率分别可达97%和89.7%,而Oschc1、Osclc2和Osclc2Osclc3突变体的在第5天萌发率约为50%。同时,对萌发后10天幼苗根的表型分析发现,相比野生型,Oschc1、Osclc2、Osclc3和Osclc2Osclc3都表现出根长变短、不定根数量和侧根密度减少的表型。这些结果表明网格蛋白在水稻种子萌发和幼根生长发育中具有重要的功能。(2)利用药理学实验分析水稻网格蛋白突变体的生物学功能。实验室前期研究表明拟南芥网格蛋白突变体对生长素不敏感。生长素类似物(1μM 2,4-D和1μM NAA)外源处理实验结果显示,相比野生型,Oschc1、Osclc2、Osclc3和Osclc2Osclc3突变体表现对2,4-D和NAA敏感性下降。以上结果暗示水稻网格蛋白可能在生长素信号转导或生长素极性运输中扮演重要角色。网格蛋白介导的内吞抑制剂(生长素类似物2,4-D/NAA、水杨酸SA和酪氨酸磷酸化抑制剂Tyr A23)处理Os CLC3-GFP,激光共聚焦显微镜观察发现2,4-D/NAA、SA和Tyr A23处理下的网格蛋白CLC3质膜招募均呈现不同程度的抑制作用。同时,质膜内吞示踪剂FM4-64吸收试验表明,与野生型相比,Oschc1、Osclc2、Osclc3和Osclc2Osclc3根尖表皮细胞对FM4-64内吞速率显著下降,这一结果暗示网格蛋白功能缺失抑制质膜蛋白的内吞。(3)在水稻网格蛋白功能缺失突变体背景下,进一步分析了网格蛋白功能破坏对营养元素氮和钾吸收的影响。利用非损伤微测技术(Non-invasive micro test Technology,NMT)分别对网格蛋白突变体Oschc1、Osclc2、Osclc3和Osclc2Osclc3根部的K和NO离子流检测发现,与野生型相比,网格蛋白突变体Oschc1、Osclc2、Osclc3和Osclc2Osclc3的K、NO净吸收速率均降低。该结果证明了网格蛋白可能参与调控营养元素(氮和钾)的吸收。(4)利用农杆菌介导的转化和水稻日本晴成熟胚转基因体系,成功获得低亲和性硝酸根转运蛋白Os NRT1-GFP和钾离子转运蛋白(Os HKT9-GFP和Os HAK5-GFP)纯合转基因植株。激光共聚焦显微镜分析结果显示Os NRT1-GFP、Os HKT9-GFP和Os HAK5-GFP均在根表皮细胞质膜上定位。亚细胞定位分析和上述NMT结果促使我们推测网格蛋白可能通过调控氮或钾转运体的内吞和定位参与营养元素吸收。这些转基因植物为后续研究水稻网格蛋白与营养元素吸收之间的调控关系提供了宝贵的遗传学材料。(5)蛋白转运抑制剂BFA(Brefeldin A,BFA)处理实验发现Os NRT1-GFP、Os HKT9-GFP和Os HAK5-GFP在胞内均可形成BFA小体。此外,用网格蛋白内吞抑制剂(2,4-D和SA)结合BFA处理实验发现,Os NRT1-GFP、Os HKT9-GFP和Os HAK5-GFP在BFA小体中的积累被抑制。这些细胞学和药理学实验暗示了网格蛋白能够介导Os NRT1、Os HKT9和Os HAK5转运蛋白的内吞。综上所述,本研究初步获得以下结论:水稻网格蛋白参与调控种子萌发、根系的发育、生长素响应以及质膜内吞;初步证明了水稻网格蛋白功能缺失影响并减少了K、NO在水稻根部的吸收速率;同时,药理学破坏网格蛋白介导的内吞抑制了氮转运体Os NRT1和钾转运体Os HAK5和Os HKT9的内吞。本研究结果为探究网格蛋白介导的内吞在营养元素吸收中的生物学功能提供了遗传学材料和药理学数据,同时为解析网格蛋白在作物生长发育过程

关键词：水稻网格蛋白内吞氮钾营养元素吸收

意大利蝗SSR分子标记开发及卵黄发生中网格蛋白的表达分析

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

意大利蝗SSR分子标记开发及卵黄发生中网格蛋白的表达分析

作者：桑迪新疆师范大学

学位级别：硕士

意大利蝗Calliptamus italicus(L.)是适生于新疆草原的害虫之一,严重威胁了当地农业、畜牧业的发展。微卫星多态性高,具有较高的分辨率,对生物分子标记及种群研究具有重要意义;网格蛋白作为生物内吞的关键蛋白,对生物体的生长发育及繁... 详细信息

意大利蝗Calliptamus italicus(L.)是适生于新疆草原的害虫之一,严重威胁了当地农业、畜牧业的发展。微卫星多态性高,具有较高的分辨率,对生物分子标记及种群研究具有重要意义;网格蛋白作为生物内吞的关键蛋白,对生物体的生长发育及繁殖具有重要意义。因此本研究在转录组测序基础上,对意大利蝗SSR位点进行发掘、分析及鉴定;获得意大利蝗网格蛋白重链(Calliptamus italicusi Clathrin Heaven Chain,CiCHC)全长序列,对意大利蝗网格蛋白的时空表达进行探究。一、意大利蝗SSR位点分析及分子标记开发从意大利蝗转录组数据库718 872条unigenes中发掘出有效的SSR位点共156 500个,这些位点分散排列在126 369条unigenes中,发生频率为17.58%。其中,单核苷酸重复为60.88%,主要为A/T(44.38%)。基于筛选的SSR位点设计引物,在10个不同地理种群意大利蝗成虫DNA样品中,随机挑选24对引物,进行PCR扩增,成功筛选出6对有效的引物。二、CiCHC全长克隆及生物信息学分析CiCHC全长序列6 345 bp,其中5 031bp为开放阅读框,根据遗传密码推测,预计编码氨基酸1 677个,编码蛋白分子质量为191.85 k Da。CiCHC具有7个典型的网格蛋白重链重复序列。构建系统进化树表明,意大利蝗与东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis CHC最为接近,同源性比对显示二者序列一致性高达100%。研究结果为进一步阐明意大利蝗网格蛋白在卵黄发生中的调控作用奠定基础。三、CiCHC表达动态分析CiCHC转录水平表达动态与卵黄发生过程密切相关。CiCHC在雌虫羽化后已经开始表达,在卵黄发生前期(羽化后1-7d)表达量持续升高,并在羽化后7d达到峰值(P蛋白水平表达趋势与转录水平类似,但存在延迟。细胞水平表达分析表明,卵黄发生前期,CiCHC在卵母细胞内均匀分布;卵黄发生期,网格蛋白主要聚集在卵母细胞膜周围,与卵黄蛋白共定位。本研究利用转录组数据发掘意大利蝗SSR位点,为意大利蝗分子标记、种群遗传及功能基因等研究奠定基础。获得了意大利蝗CiCHC全长序列,分析了卵黄发生不同阶段CiCHC在转录水平、蛋白水平和细胞水平的表达动态,为意大利蝗生殖生理研究提供了理论依据和数据参考,为意大利蝗绿色控害策略提供新思路。

关键词：意大利蝗卵黄发生 SSR 分子标记网格蛋白

haFGF14-154调控网格蛋白介导的内吞通路促进Aβ内吞和清除的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

haFGF14-154调控网格蛋白介导的内吞通路促进Aβ内吞和清除的机制...

作者：满剑慧暨南大学

学位级别：硕士

目的:β-淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide,Aβ)的产生和清除失衡会引发阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)。星形胶质细胞既能产生Aβ,也能摄取并降解细胞外环境中的Aβ,但是具体的作用机制目前尚未明确。本研究建立体外AD细胞模型,... 详细信息

目的:β-淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide,Aβ)的产生和清除失衡会引发阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)。星形胶质细胞既能产生Aβ,也能摄取并降解细胞外环境中的Aβ,但是具体的作用机制目前尚未明确。本研究建立体外AD细胞模型,探究人类酸性成纤维细胞生长因子(human acidic fibroblast growth factor,haFGF)调控细胞内吞和清除Aβ的作用机制,为寻求有效的作用靶点以及将haFGF用于AD等神经退行性疾病的治疗提供依据。方法:(1)免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测提取的大鼠原代皮质星形胶质细胞阳性率,筛选纯度大于95%的星形胶质细胞;(2)用Aβ寡聚体建立体外AD模型,并用10、100、1000 ng/m L浓度的haFGF处理星形胶质细胞24 h,Western Blot检测Aβ及其代谢相关蛋白(APP、ADAM10、BACE1、IDE)的表达,RT-q PCR检测Adam10 m RNA的表达,验证haFGF对Aβ代谢的调控作用;(3)IF共定位分析星形胶质细胞在加药处理3 h和6 h后Aβ和溶酶体的标记物LAMP1的分布,筛选Aβ内吞的作用时间;IF、Western Blot、RT-q PCR检测网格蛋白和其它内吞相关蛋白(α-adaptin、AP2M1和VPS35)的表达以及内吞相关基因(Ap2m1和Vps35)的m RNA表达,研究haFGF调控Aβ内吞的作用机制;(4)RT-q PCR检测mi R-133a-3p的表达水平,考察haFGF对mi R-133a-3p的调控作用;用mi R-133a-3p mimic或inhibitor处理星形胶质细胞后,检测内吞相关蛋白和基因的表达,探究mi R-133a-3p对它们的调控作用;双萤光素酶报告基因实验验证mi R-133a-3p与Clta具有靶向调控关系。结果:(1)成功分离出纯度达到98%以上的原代星形胶质细胞;(2)haFGF显著减少星形胶质细胞内Aβ沉积,显著上调ADAM10和IDE的蛋白表达,显著下调BACE1的蛋白表达,对PS1的蛋白表达也有所下调,但对APP的蛋白表达调控不明显;haFGF对提高Adam10的m RNA表达没有显著性差异;(3)加入haFGF和Aβ寡聚体孵育3 h后,haFGF处理组的细胞较Aβ组摄取了更多的Aβ;而加入haFGF和Aβ寡聚体6 h后,haFGF处理组细胞内Aβ的量比Aβ组明显减少;(4)高剂量的haFGF在基因和蛋白水平上显著上调了星形胶质细胞的网格蛋白、α-adaptin、AP2M1和VPS35的表达;低剂量的haFGF显著上调Ap2m1和Vps35的m RNA表达;(5)haFGF下调mi R-133a-3p的表达;mi R-133a-3p对网格蛋白、α-adaptin、AP2M1和VPS35具有负向调控作用;mi R-133a-3p与Clta具有靶向调控关系。结论:haFGF通过下调星形胶质细胞内mi R-133a-3p的水平,减少其与Clta m RNA的结合,从而促进了Clta m RNA翻译合成网格蛋白,进而介导Aβ内吞,并将Aβ从早期胞内体传送到溶酶体进行降解;另外一部分进入细胞内的Aβ被IDE降解;haFGF上调ADAM10的蛋白表达、下调BACE1的蛋白表达,减少了内源性Aβ的产生。

关键词：阿尔茨海默病人类酸性成纤维细胞生长因子 β-淀粉样蛋白内吞网格蛋白 miR-133a-3p