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ERK1/2在H_2S后处理缺氧复氧心肌细胞中的表达及意义

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重庆医科大学学报 2015年第4期40卷 506-511页

作者：张立羽杨双强重庆医科大学附属第一医院胸心外科重庆400016

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在硫化氢后处理缺氧复氧心肌细胞中的表达及意义。方法:建立心肌细胞株H9C2缺氧复氧模型并进行硫化氢后处理。实验分5组:缺氧复氧组(H/R)、硫化氢后处理组(H... 详细信息

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在硫化氢后处理缺氧复氧心肌细胞中的表达及意义。方法:建立心肌细胞株H9C2缺氧复氧模型并进行硫化氢后处理。实验分5组:缺氧复氧组(H/R)、硫化氢后处理组(H2S)、硫化氢后处理并ERK抑制剂组(H2S+PD)、ERK抑制剂组(PD)和对照组(Control)。各组心肌细胞使用real-time PCR检测ERK1/2 m RNA的表达,Western blot检测细胞ERK1/2蛋白的表达,细胞增殖-毒性检测法(cell counting Kit-8,CCK-8)检测细胞的增殖率,并通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:real-time PCR结果显示ERK1/2 m RNA基因表达在H2S组(1.374±0.270)心肌细胞与H/R组(0.590±0.046)、H2S+PD组(0.895±0.106)以及PD组(0.211±0.025)比较差异有统计学意义(F=23.000,P=0.000);H2S组(1.374±0.270)大鼠H9C2细胞ERK1/2m RNA出现相对明显表达(P=0.005),而H2S+PD组(0.895±0.106)较H/R组(0.590±0.046)表达明显(P=0.027);同样ERK1/2蛋白表达在H2S组(ERK1:1.986±0.184;ERK2:1.993±0.175)的心肌细胞与H/R组(ERK1:1.317±0.179;ERK2:1.062±0.161)、H2S+PD组(ERK1:1.615±0.12;ERK2:1.328±0.047)以及PD组(ERK1:0.925±0.42;ERK2:0.735±0.369)表达组间差异有统计学意义(F1=5.15,P1=0.016,F2=5.44,P2=0.045);在CCK-8法检测结果显示H2S组的心肌细胞较其余各组增殖率明显增加;流式细胞仪检测结果提示H2S组的心肌细胞凋亡率较其余各组明显降低。结论:经硫化氢后处理的缺氧复氧心肌细胞ERK m RNA以及ERK蛋白表达明显上调,增殖率明显提高,凋亡率差异明显。可能是由于加入外源性信号因子硫化氢激活缺氧复氧心肌细胞ERK1/2信号转导通路,有利于心肌细胞损伤的修复,进而产生心肌保护作用。

关键词：细胞外调节蛋白激酶硫化氢(H2S) 缺氧复氧 H9C2大鼠心肌细胞株

超氧化物歧化酶对内皮细胞缺氧复氧损伤的防护作用

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生理学报 1997年第6期49卷 644-648页

作者：董建文时安云北京医科大学病理生理教研室北京100083

体外培养的家兔胸主动脉内皮细胞（endotheliacell，EC）缺氧30min后复氧10min，可以发现缺氧后复氧可引起细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞悬液丙二醛（MDA）含量增加，谷胱甘肽过氧化酶（GSH－Px）活性降低，细胞合成释放一氧化氮... 详细信息

体外培养的家兔胸主动脉内皮细胞（endotheliacell，EC）缺氧30min后复氧10min，可以发现缺氧后复氧可引起细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞悬液丙二醛（MDA）含量增加，谷胱甘肽过氧化酶（GSH－Px）活性降低，细胞合成释放一氧化氮（NO）减少，细胞内钙离子浓度明显升高；EC的这些损伤在缺氧期间即有表现，复氧后更为加剧。而在缺氧前预先加入终浓度为200U／ml的超氧化物歧化酶（SOD）可改善细胞的抗氧化能力，减轻缺氧复氧（H／R）对EC的损伤。上述结果表明，缺氧后复氧产生的大量氧自由基是造成细胞损伤的主要因素，SOD通过清除氧自由基减轻缺氧复氧对细胞的损伤。

关键词：内皮细胞缺氧复氧损伤超氧化物歧化酶

人参皂苷Re对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞缺氧复氧损伤的保护作用

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解剖学杂志 2022年第4期45卷 310-314页

作者：庞亚南李敏周小娟浙江省立同德医院药学部杭州310012 浙江大学药物信息学研究所杭州310058

目的:探讨人参皂苷Re对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:采用缺氧复氧法制备SH-SY5Y细胞损伤模型,分为对照组、模型组、Re 6.25μg/mL组和Re 12.50μg/mL组。采用MTT法测定细胞存活率,四甲基罗丹明甲酯(TMRM)染... 详细信息

目的:探讨人参皂苷Re对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:采用缺氧复氧法制备SH-SY5Y细胞损伤模型,分为对照组、模型组、Re 6.25μg/mL组和Re 12.50μg/mL组。采用MTT法测定细胞存活率,四甲基罗丹明甲酯(TMRM)染色评估细胞线粒体膜电位变化,DAPI染色观察细胞凋亡率,并进一步采用免疫印迹检测各组细胞核因子NF-E2相关因子2(Nrf-2)、Bax和p53的蛋白表达。结果:人参皂苷Re对SH-SY5Y细胞活力无显著影响;缺氧复氧条件下,细胞存活率显著降低,而人参皂苷Re在6.25、12.50μg/mL浓度下预保护可显著提高细胞存活率。缺氧复氧损伤后,人参皂苷Re6.25、12.50μg/mL能显著提高SH-SY5Y细胞的线粒体膜电位水平和抑制SH-SY5Y细胞的凋亡率。人参皂苷Re能够提高Nrf-2的蛋白表达,抑制Bax和p53蛋白的表达。结论:人参皂苷Re可以抑制缺氧复氧损伤细胞的凋亡和氧化损伤,对缺氧复氧诱导的神经细胞具有显著的保护作用。

关键词：人参皂苷Re SH-SY5Y细胞缺氧复氧线粒体膜电位凋亡

促红细胞生成素对缺氧复氧心肌细胞caspase-3表达及Omi/HtrA2转位变化和Omi/HtrA2沉默时对其的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2015年第4期36卷 439-443页

作者：张杰波刘映峰缪绯刘芃南方医科大学珠江医院心血管内科广东广州510282

目的观察促红细胞生成素(EPO)及/或进一步沉默Omi/HtrA2表达时对缺氧复氧(H/R)心肌细胞的影响,探索相关抗细胞凋亡机制。方法培养乳鼠心肌细胞株(H9C2细胞),分组(对照组、H/R组及各浓度的EPO干预组)处理后,酶标仪检测各组细胞上清液中... 详细信息

目的观察促红细胞生成素(EPO)及/或进一步沉默Omi/HtrA2表达时对缺氧复氧(H/R)心肌细胞的影响,探索相关抗细胞凋亡机制。方法培养乳鼠心肌细胞株(H9C2细胞),分组(对照组、H/R组及各浓度的EPO干预组)处理后,酶标仪检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率,Western blot检测细胞内cleaved caspase-3、Omi/HtrA2蛋白表达变化;并观察Omi/HtrA2在胞质和线粒体的表达变化(转位情况)。再经脂质体法将Omi/HtrA2特异性siRNA干扰片段转染至H9C2细胞中,RT-PCR和Western blot验证siRNA对Omi/HtrA2表达的沉默效应后,分组同前干预,分别检测各组细胞LDH释放率及cleaved caspase-3表达变化。结果与H/R组相比,EPO干预组细胞上清液LDH释放减少,cleaved caspase-3表达减弱;H/R组Omi/HtrA2蛋白表达在胞质中表达较对照组增多(向胞质发生转位),而EPO(20IU/mL)组其胞质转位减少。经siRNA干扰后,与H/R组相比,LDH释放降低,cleaved caspase-3表达减弱,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 EPO可能通过减少Omi/HtrA2蛋白的转位,抑制caspases-3通路激活,而发挥细胞保护作用。

关键词：缺氧复氧促红细胞生成素(EPO) 细胞凋亡 Omi/HtrA2 RNA干扰 caspase-3 缺血/再灌注损伤

TLR4基因小干扰RNA对缺氧复氧诱导BV-2细胞炎症因子分泌的影响

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中华急诊医学杂志 2009年第3期18卷 270-273页

作者：孙鹏韩继媛张清张景辉田元华中科技大学同济医学院附属协和医院急诊科武汉430622

目的研究Toll样受体4（TLR4）基因小干扰RNA（siRNA）对体外缺氧复氧条件下诱导BV-2细胞分泌TNF-α的抑制作用。方法小鼠小胶质细胞株BV-2置于六孔培养板培养，随机分为N组（正常培养组）、H组（缺氧复氧组）、T组（缺氧复氧＋TLR4-siRN... 详细信息

目的研究Toll样受体4（TLR4）基因小干扰RNA（siRNA）对体外缺氧复氧条件下诱导BV-2细胞分泌TNF-α的抑制作用。方法小鼠小胶质细胞株BV-2置于六孔培养板培养，随机分为N组（正常培养组）、H组（缺氧复氧组）、T组（缺氧复氧＋TLR4-siRNA转染组，转染质粒pEGFP-H1／TLR4-siRNA）、C组（缺氧复氧＋对照siRNA转染组，转染含对照序列的质粒pEGFP-H1／对照-siRNA）和B组（缺氧复氧＋空白质粒转染组，转染pEGFP-H1空质粒）共5组。其中H组、T组、C组和B组细胞缺氧培养3h后复氧培养24h，运用脂质体转染技术介导质粒转染，流式细胞术检测转染后BV-2细胞EGFP的表达率，RT-PCR方法检测各组BV-2细胞TLR4 mRNA和NF-κB p65 mRNA的表达水平，Western blot方法检测各组BV-2细胞TLR4蛋白表达变化，ELISA方法检测各组上清液中TNF-α含量。采用方差分析进行统计分析。结果转染后BV-2细胞EGFP的表达率为（67．58-＋27．16）％；经缺氧复氧处理后，H组、T组、C组和B组的TLR4 mRNA、NF-κB p65 mRNA、TLR4蛋白水平较N组均明显上调（P〈0．01），各组上清液TNF-α含量较N组也明显升高（P〈0．01）：而T组TLR4 mRNA、NF-κB p65 mRNA、TLR4蛋白表达量和上清液TNF-α含量较H组、C组和B组均明显下调（P〈0．01）；C组和B组分别与H组相比，各项检测指标表达均无明显变化（P〉0．05）。结论针对TLR4 mRNA的小干扰RNA可以有效的抑制缺氧复氧诱导的BV-2细胞的炎症反廊。

关键词：小干扰RNA 缺氧复氧 Toll样受体4 小胶质细胞

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心脏微血管内皮细胞缺氧复氧损伤保护机制的研究

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中国药理学通报 2014年第2期30卷 207-211页

作者：周燕琼张艳美高分飞黄展勤陈一村郑燕珊石刚刚汕头大学医学院药理学教研室广东汕头515041 汕头大学医学院第二附属医院广东汕头515041

目的观察碘化Ⅳ.正丁基氟哌啶醇（N-n-butylhalo-peridol iodide，F2）对培养的内皮细胞缺氧／复氧（anoxia／reoxygenation，A／R）损伤及早期生长反应基因-1（early growth response gene1，Egr-1）蛋白表达的影响。方法应用新生SD大... 详细信息

目的观察碘化Ⅳ.正丁基氟哌啶醇（N-n-butylhalo-peridol iodide，F2）对培养的内皮细胞缺氧／复氧（anoxia／reoxygenation，A／R）损伤及早期生长反应基因-1（early growth response gene1，Egr-1）蛋白表达的影响。方法应用新生SD大鼠进行心脏微血管内皮细胞（cardiacmicrovas．eularendothelialcells，CMECs）原代培养，取3-4代的CMECs建立A／R模型。通过测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及CMECs中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量，观察CMECs损伤程度；应用ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子-d（TNF-α）的含量，观察CMECs炎症反应水平；Westernblot法检测培养CMECs中Egr一1的蛋白表达水平。结果A／R造成CMECs内MDA升高，SOD下降，上清液中LDH、TNF—α含量升高，A／R刺激下细胞Egr-1的蛋白表达水平明显升高；A／R刺激前给予F2：可减轻CMECs的损伤及炎症反应程度，抑制Egr-1蛋白的表达。结论F：对心脏微血管内皮细胞A／R损伤具有保护作用，该作用可能与其抑制Egr-1的表达有关。

关键词：碘化N-正丁基氟哌啶醇大鼠心脏微血管内皮细胞缺氧复氧损伤 Egr-1

GLP-1激动剂通过PI3K/Akt信号通路减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的实验研究

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中华内分泌代谢杂志 2018年第1期34卷 61-66页

作者：易志刚陈津瀚李津郭文安吴娟黄上萌厦门大学附属第一医院干部保健病房 361003

目的研究胰升糖素样肽1（GLP-1）激动剂对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响及具体的分子机制。方法将H9C2细胞株分为对照组、缺氧复氧（H/R）组、H/R＋GLP-1组、H/R＋GLP-1＋磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002组。检测细胞增殖活力、... 详细信息

目的研究胰升糖素样肽1（GLP-1）激动剂对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响及具体的分子机制。方法将H9C2细胞株分为对照组、缺氧复氧（H/R）组、H/R＋GLP-1组、H/R＋GLP-1＋磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002组。检测细胞增殖活力、细胞凋亡率、培养基中心肌酶含量以及凋亡相关基因的表达量。建立心肌缺血再灌注损伤（I/R）的动物模型，给予GLP-1激动剂、PI3K抑制剂干预并检测血清中心肌酶的含量。结果H/R显著降低心肌细胞的增殖活力以及细胞中磷酸化PI3K、磷酸化蛋白激酶B（Akt）、Bcl-2的蛋白表达量，增加细胞凋亡率、细胞培养基中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量以及细胞中Bax、Caspase-3的蛋白表达量，而这可被GLP-1所改善（均P〈0.05）；H/R＋GLP-1＋LY294002组心肌细胞的增殖活力以及细胞中Bcl-2的蛋白表达量显著低于H/R＋GLP-1组，细胞凋亡率、细胞培养基中CK、CK-MB、LDH的含量以及细胞中Bax、Caspase-3的蛋白表达量显著高于H/R＋GLP-1组（均P〈0.05）。I/R组大鼠血清CK、CK-MB、LDH含量显著高于对照组和I/R＋GLP-1组，I/R＋GLP-1＋LY294002组大鼠血清中CK、CK-MB、LDH的含量显著高于I/R＋GLP-1组（均P〈0.05）。结论GLP-1激动剂能够通过激活PI3K/Akt信号通路来减轻心肌细胞缺氧复氧损伤。

关键词：心肌缺血再灌注损伤缺氧复氧胰升糖素样肽1 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B

痰瘀同治方对缺氧复氧诱导心肌细胞AMPK-mTOR自噬信号通路的影响及机制

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中国中西医结合杂志 2018年第4期38卷 435-440页

作者：唐丹丽石晓雯周明眉朱海燕张华敏中国中医科学院医学实验中心北京100700 中医药防治重大疾病基础研究北京市重点实验室北京100700 上海中医药大学中医方证与系统生物学研究中心上海201203 复旦大学药学院微生物生化教研室上海200433 中国中医科学院中医药信息研究所北京100700

目的研究痰瘀同治方对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞自噬的影响及AMPK-mTOR信号通路在其中可能发挥的作用。方法体外培养H9C2心肌细胞,随机分为空白对照组、H/R模型组(缺氧10 h后复氧2 h)、痰瘀同治方组、血府逐瘀汤组及栝蒌薤白半夏汤组,各... 详细信息

目的研究痰瘀同治方对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞自噬的影响及AMPK-mTOR信号通路在其中可能发挥的作用。方法体外培养H9C2心肌细胞,随机分为空白对照组、H/R模型组(缺氧10 h后复氧2 h)、痰瘀同治方组、血府逐瘀汤组及栝蒌薤白半夏汤组,各组给予相应方剂肠吸收液18 mg/m L孵育2 h后H/R处理。电镜下观察细胞自噬体结构,检测细胞上清液中LDH释放量和SOD活性,蛋白免疫印迹测定细胞内LC3、Beclin-1、P-AMPK和P-mTOR蛋白表达。结果心肌细胞缺氧复氧后自噬体形成并增多。与空白对照组比较,H/R模型组心肌细胞LDH含量、LC3及Beclin-1蛋白表达量增加,p-AMPK表达增强,SOD活性下降且p-mTOR表达减弱(P缺氧复氧可激活心肌细胞AMPK-mTOR信号通路,从而诱导自噬过度表达加重心肌损伤,痰瘀同治方可通过调控AMPK-mTOR信号通路、抑制自噬而起到心肌保护作用。

关键词：痰瘀同治方缺氧复氧自噬腺苷单磷酸活化蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

胰高血糖素样肽-1对大鼠心肌缺血再灌注/细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 858-864页

作者：郭佳边云飞王丽杨慧宇肖传实山西医科大学山西医科大学第二医院心内科山西医科大学第一医院山西太原030001

目的:观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对大鼠心肌缺血再灌注/细胞缺氧复氧损伤的作用并探讨其机制。方法:建立大鼠缺血再灌注模型,分别设假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)和IR+GLP-1(0.030nmol/L、0.16 nmol/L和0.30 nmol/L)组,缺血30 mi... 详细信息

目的:观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对大鼠心肌缺血再灌注/细胞缺氧复氧损伤的作用并探讨其机制。方法:建立大鼠缺血再灌注模型,分别设假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)和IR+GLP-1(0.030nmol/L、0.16 nmol/L和0.30 nmol/L)组,缺血30 min后再灌注3 h,Evan's blue-TTC法检测心肌梗死范围;取左心室游离壁心肌组织,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,同时测定心肌组织中氧化-抗氧化物质超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;培养乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组(control)、单纯缺氧复氧组(HR)、HR+GLP-1(1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L)组,电镜下观察心肌细胞形态的变化,流式细胞术检测心肌细胞的凋亡,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放、SOD活性、MDA含量、活性氧簇(ROS)水平以及线粒体膜电位(MMP)。结果:与IR组相比,IR+GLP-1(0.03 nmol/L、0.16 nmol/L和0.30 nmol/L)组剂量依赖性地减小心肌梗死面积,减轻线粒体超微结构改变及细胞凋亡,增加SOD活性,减少MDA含量(P缺氧复氧损伤;其作用机制可能与增强心肌抗氧化能力及保护线粒体结构和功能有关。

关键词：胰高血糖素样肽-1 缺血再灌注损伤缺氧复氧心肌细胞抗氧化线粒体膜电位