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羊口疮病毒主要基因组编码蛋白及其功能

动物医学进展 2022年第4期43卷 96-101页

作者：张孟然丛潇顾月月刘少冰刘欣超李文超顾有方动物营养调控与健康安徽省重点实验室安徽凤阳233100 安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100

羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus, ORFV)引起的一种接触性传染病,绵羊与山羊是主要宿主。该病属于自限性疾病,当不发生继发性感染时,机体调节就可以控制疾病发展,逐渐恢复痊愈。该特性可能与病毒的基因组结构有关,因此,重点阐述了... 详细信息

羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus, ORFV)引起的一种接触性传染病,绵羊与山羊是主要宿主。该病属于自限性疾病,当不发生继发性感染时,机体调节就可以控制疾病发展,逐渐恢复痊愈。该特性可能与病毒的基因组结构有关,因此,重点阐述了羊口疮病毒基因组编码的蛋白及其功能。此外,还对羊口疮病毒的流行病学、病原学、临床诊断与防控进行了概述,为羊口疮病毒的进一步研究提供了信息与参考。

关键词：羊口疮病毒基因组结构编码蛋白蛋白功能

血清4型禽腺病毒及其主要编码蛋白对宿主Toll样受体mRNA转录水平影响的研究

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血清4型禽腺病毒及其主要编码蛋白对宿主Toll样受体mRNA转录水平...

作者：石勇丽广西大学

学位级别：硕士

血清4型禽腺病毒(FAdV-4)对3～6周龄肉鸡具有高致病性,感染通常引起心包积水-肝炎综合征(HHS),该病2015年起在我国河南、山东和广西等地陆续暴发,给养禽业造成惨重的经济损失。Toll样受体(TLRs)是一种典型的模式识别受体,当有病原入侵机... 详细信息

血清4型禽腺病毒(FAdV-4)对3～6周龄肉鸡具有高致病性,感染通常引起心包积水-肝炎综合征(HHS),该病2015年起在我国河南、山东和广西等地陆续暴发,给养禽业造成惨重的经济损失。Toll样受体(TLRs)是一种典型的模式识别受体,当有病原入侵机体,它就立即识别病原保守的相关分子模式,随后诱导一系列的级联反应,引起I型干扰素和炎性因子等表达,以抵抗和清除病原。已有研究证实,病原入侵机体后TLRs mRNA表达量会发生变化。监测TLRs表达量变化,有助于阐明病原的致病机理。但有关FAdV-4感染对TLRs mRNA表达量的影响欠缺系统研究。因此本研究将FAdV-4广西分离株(FAdV-4-GX2019-010)感染鸡肝癌细胞(LMH)和SPF鸡,检测10种禽源TLRs mRNA表达量的动态变化,随后继续检测FAdV-4主要编码蛋白(fiber1、penton、22K、52K)对10种TLRs及8种信号通路相关分子mRNA表达量的影响,为进一步研究FAdV-4的致病机理奠定基础。具体研究内容如下:一、FAdV-4感染LMH细胞对Toll样受体mRNA转录水平的影响将FAdV-4-GX2019-010以最佳的MOI感染LMH细胞,收集感染后12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、84 h、96 h、108 h和120 h的细胞样品,利用荧光定量PCR检测病毒增殖情况和10种禽源TLRs mRNA表达量变化。结果显示,LMH细胞在72 h出现变亮变圆和脱落等典型病变,病毒在12～48 h快速增殖,随后缓慢增殖,到96 h达到高峰。10种禽源TLRs mRNA表达量在感染后72～120 h均出现不同程度上调,其中chTLR21上调倍数最大(56.71倍),其次是chTLR4、chTLR1a、chTLR1b,提示它们是体外细胞抵抗FAdV-4感染的重要受体。二、FAdV-4感染SPF鸡对组织器官中Toll样受体mRNA转录水平的影响通过肌肉注射将FAdV-4-GX2019-010感染SPF鸡,感染后1、3、5、7和10天解剖观察组织病变,采集心脏、肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊,利用荧光定量PCR检测各组织中的病毒载量和10种禽源TLRs mRNA表达量变化。结果显示,感染组鸡出现心包积液和肝脏肿大黄染等特征性剖检病变。肝脏中病毒载量最高,在第5天达到10copies/μL,其次是心脏、脾脏、法氏囊和胸腺。感染后5～7天,10种禽源TLRs mRNA表达量在5种组织出现不同程度上调:肝脏有9种TLRs上调,其中chTLR4上调倍数最大(31.86倍),其次是chTLR2a、chTLR3等;心脏有5种TLRs上调,其中chTLR4上调倍数最大(30.26倍),其次是chTLR15、chTLR1b等;脾脏有4种TLRs上调,其中chTLR21上调倍数最大(8.92倍),其次是chTLR4、chTLR3等;胸腺有9种TLRs上调,其中chTLR4上调倍数最大(10.37倍),其次是chTLR21、chTLR3等;法氏囊有8种TLRs上调,其中chTLR7上调倍数最大(11.49倍),其次是chTLR4、chTLR21等。提示chTLR4、chTLR7、chTLR21是体内参与抵抗FAdV-4感染的重要受体。三、FAdV-4主要编码蛋白对Toll样受体及信号通路相关分子mRNA转录水平的影响将FAdV-4-GX2019-010的编码蛋白fiber1、penton、22K和52K克隆到真核表达载体p EF1α-HA上,经间接免疫荧光和Western blot验证目的蛋白成功表达后,将其转染LMH细胞,转染后24 h接种FAdV-4-GX2019-010,继续培养48 h收集细胞样品,利用荧光定量PCR检测TLRs及信号通路相关分子的mRNA表达量变化。结果显示,fiber1蛋白表达后chTLR1b、chTLR3、chTLR7和chTLR21显著上调,通路相关分子MyD88、IRF3/7和IFN-β也显著上调;penton蛋白表达后chTLR21显著上调,通路相关分子NF-κB和IL-1β显著下调;而22K和52K蛋白表达后对TLRs及信号通路相关分子的mRNA表达量变化不显著。提示编码蛋白fiber1和penton在FAdV-4致病过程中发挥重要作用。综上,FAdV-4-GX2019-010感染LMH细胞和SPF鸡后chTLR4和chTLR21上调倍数均较大,提示它们是机体抵抗FAdV-4感染的重要受体。进一步发现编码蛋白fiber1能促进chTLR1b、chTLR3、chTLR7和chTLR21介导的信号通路,上调MyD88、IRF3/7和IFN-β表达;penton蛋白能影响chTLR21介导的信号通路,抑制NF-κB和IL-1β表达。提示fiber1蛋白和penton蛋白在FAdV-4致病过程中发挥重要作用。本研究从体

关键词： FAdV-4 LMH细胞 SPF鸡编码蛋白 Toll样受体 mRNA转录水平

Circ＿0036176通过编码蛋白Myo9a-208aa发挥抑制心肌纤维化表型作用的研究

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Circ＿0036176通过编码蛋白Myo9a-208aa发挥抑制心肌纤维化表型作...

作者：黄智琪华南理工大学

学位级别：硕士

多种形式的心血管疾病都会引发心肌纤维化,不可逆的心肌纤维化最终将导致心力衰竭和心源性猝死。环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种特殊形式的长链RNA,可通过吸附微小RNA、翻译多肽或者蛋白质、调节宿主基因表达等多种形式参与多种... 详细信息

多种形式的心血管疾病都会引发心肌纤维化,不可逆的心肌纤维化最终将导致心力衰竭和心源性猝死。环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种特殊形式的长链RNA,可通过吸附微小RNA、翻译多肽或者蛋白质、调节宿主基因表达等多种形式参与多种疾病的发病进程。目前,对于circRNA调节心肌纤维化研究的报道还较为有限,本文将研究来源于人宿主基因肌球蛋白IXA(Myo9a)的circ＿0036176对心肌纤维化相关基因的调控作用。目的:研究circ＿0036176编码蛋白Myo9a-208aa对心肌纤维化表型的调控作用。方法:1.RT-qPCR检测心衰病人心肌组织与外周血中circ＿0036176的表达水平。2.RNase-R消化实验结合放线菌素D干预实验鉴定circ＿0036176的RNA稳定特性。3.荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检测circ＿0036176在人心肌细胞AC16中的核质分布。4.利用定制的抗体(针对翻译蛋白C-端特异氨基酸序列)检测肥厚型心肌病及心力衰竭病人心肌组织中circ＿0036176翻译的蛋白Myo9a-208aa的表达水平。5.利用腺病毒在乳小鼠心肌成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts,mCFs)中分别过表达circ＿0036176和Myo9a-208aa,进行核、质蛋白分离并检测Myo9a-208aa的亚细胞分布。6.RT-qPCR结合Western blot检测过表达circ＿0036176、Myo9a-208aa对mCFs纤维化表型的影响。7.利用流式细胞术、EdU和Trans-well实验检测过表达circ＿0036176、Myo9a-208aa对mCFs增殖、迁移能力的影响。8.利用小干扰RNA敲降Myo9a-208aa阅读框转录本水平,检测对circ＿0036176发挥的抑制mCFs纤维化相关基因表达的影响。9.构建circ＿0036176上编码Myo9a-208aa读框的ATG突变为AG,或读框内7个连续碱基(AAGCACA)缺失的表达载体,Western blot检测两种序列突变的circ＿0036176对翻译的Myo9a-208aa、mCFs纤维化相关蛋白表达及mCFs增殖、迁移能力的影响。结果:1.与健康对照者相比,circ＿0036176在心衰病人心肌组织中高表达,而在外周血中低表达。2.Circ＿0036176在细胞质中富集存在,具有特征性的RNA稳定性。3.用识别Myo9a-208aa C-端特异氨基酸序列的抗体可在肥心病及心衰病人心肌组织中检测到Myo9a-208aa的表达。4.Circ＿0036176翻译的Myo9a-208aa分布于细胞质中。5.过表达circ＿0036176、Myo9a-208aa可一致性地抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的增殖、迁移能力。6.敲降Myo9a-208aa阅读框转录本水平可逆转circ＿0036176对mCFs中纤维化相关蛋白表达的抑制作用。7.Circ＿0036176上编码Myo9a-208aa读框的ATG突变为AG,或读框内7个连续碱基缺失后,可阻断Myo9a-208aa的正确翻译,且对mCFs中纤维化相关基因表达及mCFs的增殖、迁移能力的抑制作用明显降低。结论:1.Circ＿0036176可特异编码Myo9a-208aa。2.Myo9a-208aa在心衰病人心肌中呈高表达并介导circ＿0036176发挥抑制心肌纤维化表型的作用。

关键词：心肌纤维化编码蛋白 CircRNA 心肌成纤维细胞

长链非编码RNA HCP5编码蛋白影响乳腺癌细胞对阿霉素敏感性的作用机制研究

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长链非编码RNA HCP5编码蛋白影响乳腺癌细胞对阿霉素敏感性的作用...

作者：邢佳妮东南大学

学位级别：硕士

目的：化疗是乳腺癌的常见治疗方法，对三阴性乳腺癌（triple-negativebreastcancer，TNBC）尤甚。然而，肿瘤细胞通常会对化疗药物产生耐药性，严重影响患者的预后和生存时间。研究发现长链非编码RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）在... 详细信息

目的：化疗是乳腺癌的常见治疗方法，对三阴性乳腺癌（triple-negativebreastcancer，TNBC）尤甚。然而，肿瘤细胞通常会对化疗药物产生耐药性，严重影响患者的预后和生存时间。研究发现长链非编码RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）在乳腺癌耐药中发挥重要作用。随着蛋白质组学和高通量技术的发展，人们发现lncRNA序列上存在一些开放阅读框（openreadingframe，ORF），其编码产物已被证明与肿瘤进展和治疗有关。因此，本研究旨在探讨lncRNAHCP5编码蛋白对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响及作用机制，为临床治疗提供参考和实验依据。　　方法：（1）几种lncRNA编码预测工具用于测试ORF的存在;（2）免疫组化方法检测乳腺组织芯片和乳腺癌细胞系中lncRNAHCP5编码蛋白的表达水平;（3）慢病毒转染敲低或质粒转染过表达乳腺癌细胞中lncRNAHCP5编码蛋白的ORF;（4）CCK-8和集落实验检测细胞的增殖和集落形成情况;（5）CCK-8检测阿霉素刺激的细胞生长抑制率和半数最大抑制浓度;（6）透射电镜和激光共聚焦检测自噬形成和脂质活性氧的积累;（7）RNA测序和Westernblot检测降低HCP5-132aa表达影响的自噬信号通路。　　结果：在乳腺癌MCF-7阿霉素耐药细胞和TNBC中，一种由lncRNAHCP5编码的蛋白HCP5-132aa表达上调。降低HCP5-132aa表达的乳腺癌细胞集落形成和增殖被抑制，且经阿霉素处理时会发生更多的自噬性死亡，表现为LC3-Ⅱ蛋白水平的增加，胞浆空泡化的形成和脂质活性氧的产生。降低lncRNAHCP5编码蛋白表达可以引起ERK磷酸化，并抑制mTOR的活性，进而增加下游Beclin1的表达来诱导自噬，提高乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性。　　结论：本研究发现降低lncRNAHCP5编码蛋白的表达能够提高乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性，为改善临床乳腺癌药物治疗效果提供参考和实验依据。

关键词：乳腺癌长链非编码RNA 编码蛋白阿霉素

环状RNA circEPB41L2在膀胱癌中的作用及机制研究

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环状RNA circEPB41L2在膀胱癌中的作用及机制研究

作者：孙恺青岛大学

学位级别：硕士

研究目的:膀胱癌(bladder cancer,BCa)是全球范围内最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率居高不下。研究表明,环状RNA(circular RNA,circ RNA)在肿瘤进展中发挥重要作用,但其调控膀胱癌的作用机制尚未完全阐明。课题组前期通... 详细信息

研究目的:膀胱癌(bladder cancer,BCa)是全球范围内最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率居高不下。研究表明,环状RNA(circular RNA,circ RNA)在肿瘤进展中发挥重要作用,但其调控膀胱癌的作用机制尚未完全阐明。课题组前期通过高通量测序分析12对膀胱癌组织及癌旁组织中circ RNA的表达谱,发现环状RNA circEPB41L2在膀胱癌组织中呈低表达。基于前期成果,我们将circEPB41L2作为研究对象,拟进一步探究circEPB41L2对膀胱癌生存、迁移、侵袭和体内增殖能力的影响,揭示其在调控膀胱癌发生发展中的分子机制。研究方法:1)通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)在50对膀胱癌组织及对应癌旁正常组织中检测circEPB41L2的表达情况;体外培养膀胱癌细胞株和永生化膀胱上皮细胞SV-HUC-1,检测circEPB41L2在其中的表达水平。2)构建过表达circEPB41L2的慢病毒载体并转染入膀胱癌细胞株5637、T24中以构建稳转细胞株;通过PCR实验、抗RNase R酶降解实验及Sanger测序验证circEPB41L2慢病毒是否正确成环;通过核质分离实验及荧光原位杂交实验研究circEPB41L2在膀胱癌细胞株中的亚定位;通过存活实验、划痕实验、基质胶侵袭实验探究过表达circEPB41L2对膀胱癌细胞生存、迁移、侵袭能力的影响;使用si RNA沉默SV-HUC-1细胞中circEPB41L2的表达,通过存活实验、划痕实验探究circEPB41L2对SV-HUC-1细胞生存、迁移能力的影响。3)将过表达circEPB41L2的5637细胞接种至裸鼠的右侧腋窝皮下构建皮下成瘤模型,成瘤后测量瘤体大小并取瘤称重,探究circEPB41L2在体内对膀胱癌增殖能力的影响。4)通过生物信息学、蛋白质免疫印迹(Western blot)实验及蛋白质谱(LC-MS/MS)分析并验证circEPB41L2的蛋白编码能力,将该蛋白命名为circEPB41L2-240aa蛋白;通过免疫荧光实验检测circEPB41L2-240aa蛋白在膀胱癌细胞株中的亚定位;构建过表达circEPB41L2-240aa蛋白的质粒并转染入膀胱癌细胞株中,通过存活实验、划痕实验、基质胶侵袭实验探究上调circEPB41L2-240aa蛋白的表达对膀胱癌细胞生存、迁移、侵袭能力的影响。5)为了进一步探究circEPB41L2是否通过翻译circEPB41L2-240aa蛋白发挥作用,我们将翻译起始密码子突变的circEPB41L2-mutation慢病毒载体转染入膀胱癌细胞中,通过存活实验、划痕实验、基质胶侵袭实验探究失去蛋白翻译功能的circEPB41L2在膀胱癌中的生物学功能。研究结果:1)circEPB41L2在膀胱癌组织中的表达较癌旁正常组织低(p编码一段具有240个氨基酸的蛋白(约27KDa),Western blot实验结果证实过表达circEPB41L2的细胞在25～30KDa处存在明显条带,而空白对照组和circEPB41L2-mutation转染组没有条带;在25～30KDa波段的LC-MS/MS结果中,发现了一段由circEPB41L2编码的特异性蛋白序列“VTLLDGTEYSCDLEHK”;免疫荧光实验证明circEPB41L2-240aa蛋白主要分布在膀胱癌细胞的细胞质中;存活实验、划痕实验及基质胶侵袭实验证明上调circEPB41L2-240aa蛋白的表达可明显抑制膀胱癌细胞的生存(p编码circEPB41L2-240aa蛋白的能力,circEPB41L2-mutation虽仍具有抑制膀胱癌细胞生存、迁移及侵袭的能力,但其抑癌作用受

关键词：膀胱癌环状RNA circEPB41L2 编码蛋白 circEPB41L2-240aa蛋白

circZKSCAN1调控内皮细胞功能和内膜损伤修复的作用和机制

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circZKSCAN1调控内皮细胞功能和内膜损伤修复的作用和机制

作者：邹露青岛大学

学位级别：硕士

背景和目的冠状动脉疾病(CAD)是全世界最常见的死亡原因之一。经皮血管重建术的引入显著提高了CAD患者的治疗效果。目前,经皮冠状动脉介入治疗(PCI),包括经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)和支架植入术和药物涂层球囊(DCB)等,大大降低了伴随... 详细信息

背景和目的冠状动脉疾病(CAD)是全世界最常见的死亡原因之一。经皮血管重建术的引入显著提高了CAD患者的治疗效果。目前,经皮冠状动脉介入治疗(PCI),包括经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)和支架植入术和药物涂层球囊(DCB)等,大大降低了伴随CAD的死亡率,尤其是那些与急性心肌梗死(AMI)相关的病例。但与此同时,支架后再狭窄(ISR)也逐渐成为PCI治疗CAD的主要难题和挑战。目前虽然有针对再狭窄的药物,但是这些药物的输送并不能完全根除ISR,仍然有血管内膜损伤和增生的风险,所以ISR新的治疗靶点和治疗方案的探索仍有待深入研究。环状非编码核酸(Circular RNAs)被报道与心血管疾病关系密切,其中,circZKSCAN1是近些年新发现的一个在血管内膜中高表达的环状RNA分子之一,但与内皮功能和内膜损伤的关系和调控机制未有报道。方法首先我们利用sanger测序、荧光半定量、放线菌酮实验验证circZKSCAN1的环状结构,在ISR临床样本和内膜损伤动物模型中检测circZKSCAN1含量。接着,构建大鼠颈动脉球囊损伤模型并注射sh-circZKSCAN1腺相关病毒进行治疗,收集颈动脉组织并进行HE、组化、免疫荧光和原位杂交实验验证病理变化。然后在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)里过表达或敲低circZKSCAN1进行细胞功能实验,包括细胞增殖和迁移实验、流式实验和PI染色实验等,提取蛋白和RNA检测信号通路。最后,我们探索了circZKSCAN1的调控机制,首先通过生信分析预测出circZKSCAN1可能是IRES或者m6A调控翻译,我们分别设计并构建了IRES突变体和N6-甲基腺苷(m6A)突变体,然后进行了荧光素酶基因报告实验和western blot实验验证这两种突变体是否编码蛋白。最后,在编码蛋白被抑制的条件下进行内皮细胞功能实验。结果首先我们明确了circZKSCAN1是一个稳定的环状结构。在健康和支架后再狭窄股动脉里进行的荧光原位杂交和免疫荧光试验证实circZKSCAN1在血管内膜中特异性表达且表达差异显著。同时,circZKSCAN1在内皮细胞里含量明显多于血管平滑肌细胞。在接下来的体内治疗测试中,我们首先验证了circZKSCAN1在大鼠颈动脉球囊损伤模型中的敲低效率,HE和马松染色发现损伤血管内膜增厚,胶原沉积,而治疗组得到显著缓解。免疫荧光结果显示敲低circZKSCAN1可以显著抑制内皮细胞的增殖,同时,我们首次发现增厚内膜内坏死显著发生,且敲低circZKSCAN1后坏死标记物RIP3,p-RIP3,p-MLKL表达量都显著降低,即坏死得到抑制,这是首次发现内膜增生和坏死有关系。体外实验中,在HUVECs里过表达circZKSCAN1可以促进增殖、迁移和坏死,敲低circZKSCAN1时结果相反。接下来,我们探究了circZKSCAN1发生功能的分子机制。通过生信网站预测发现circZKSCAN1能够编码蛋白,我们设计并构建了带有flag序列的过表达质粒,western blot检测发现circZKSCAN1确实能够编码蛋白,我们把编码蛋白命名为circZKSCAN1-203aa。根据预测,circZKSCAN1可能通过IRES或m6A编码蛋白。所以,我们设计了IRES突变体,荧光素酶基因报告实验发现IRES没有活性,即circZKSCAN1不通过IRES编码蛋白。接下来我们对预测的两个m6A位点构建了突变体,WB检测发现m6A的325位点突变后flag条带表达量被显著抑制,即circZKSCAN1是通过m6A的325位点翻译蛋白。同时,m6A的325位点突变后,HUVECs的增殖、迁移和坏死也被显著抑制。最后,为了进一步明确调控m6A修饰的酶,我们敲低了m6A翻译起始因子eIF4G2和m6A读码蛋白YTHDF3之后,发现circZKSCAN1的编码蛋白显著减少,且HUVECs的增殖、迁移和坏死也被同时抑制。这一结果明确了eIF4G2和YTHDF3是调控m6A介导circZKSCAN1编码蛋白的主要调控酶。结论CircZKSCAN1能够通过影响HUVECs的增殖、迁移、坏死进而调控血管内膜的损伤修复。机制上,circZKSCAN1的功能主要是通过eIF4G2和YTHDF3调控m6A修饰介导的circZKSCAN1编码蛋白实现的。

关键词：环状RNA 编码蛋白坏死内皮细胞支架后再狭窄

猪圆环病毒2型与猪圆环病毒相关性系统疾病的回顾及展望

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生物工程学报 2015年第6期31卷 880-891页

作者：顾金燕邢刚雷静刘斐周继勇南京农业大学动物医学院

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起猪的免疫抑制,是猪圆环病毒相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的主要病原,给养猪业带来了巨大的经济损失。文中从PCV2的进化历程、编码蛋白、对免疫系统的影响及技术防... 详细信息

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起猪的免疫抑制,是猪圆环病毒相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的主要病原,给养猪业带来了巨大的经济损失。文中从PCV2的进化历程、编码蛋白、对免疫系统的影响及技术防控四方面入手,对PCV2及PCV2-SD进行了全面回顾与展望。

关键词： PCV2 PCV2-SD 进化历程编码蛋白免疫

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长链非编码RNA与淋巴瘤

中华血液学杂志 2017年第11期38卷 997-1000页

作者：房莹王黎赵维莅上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室上海血液学研究所200025

人类基因组中仅有1．5％～2．0％编码蛋白的基因得以稳定转录，而剩余的绝大多数RNA无编码蛋白的功能。长链非编码RNA（IncRNA）是一类异质性的非编码RNA，根据IncRNA的功能，可将其分为信号分子、诱饵分子、引导分子和骨架分子类。

关键词：非编码RNA 长链淋巴瘤人类基因组信号分子编码蛋白异质性分子类

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒编码蛋白的相互作用研究

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海洋与湖沼 2016年第1期47卷 205-212页

作者：陈沈雪魏永伟苗亮陈炯宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211

采用Matchmaker酵母双杂交系统,将对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infection hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)编码蛋白NS1、NS2和CP序列分别构建到酵母猎物载体p GADT7和诱饵载体p GBKT7上,分别转化至酵母AH109以检测重组猎物载体和诱饵载体的自激活作用及对宿主的毒性作用,发现无自激活作用和毒性作用,随后将重组猎物载体和诱饵载体两两共转至酵母AH109中,涂布于SD/-Leu/-Trp固体培养基上,再点种至SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal固体培养基以鉴定编码蛋白间的相互作用。表型鉴定结果显示,只有共转化有p GADT7-CP/p GBKT7-CP的酵母重组子能够在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上生长并显蓝,而其它重组子均不能在其上生长,表明病毒的CP能够自身互作,而其他编码蛋白间无相互作用。为了进一步研究病毒CP自身互作的作用位点,分别从CP的N端和C端截短若干个氨基酸序列,结果发现CP的自身互作是高度敏感的,任何较少氨基酸序列的缺失都将导致其自身互作的丧失。本研究为深入探讨病毒的组装机制和致病机理奠定了理论基础。

关键词：传染性皮下及造血组织坏死病毒编码蛋白相互作用自身互作酵母双杂交