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四川动物 2024年

作者：蒋安娜刘杨刘桂娜唐业忠陆方四川大学华西医院中国科学院成都生物研究所

蛇毒已被证明具有抗炎活性，其中包含许多免疫原性弱、活性强的短肽小分子。蛇毒腺是分泌毒液的器官，含有毒素成分及调控其分泌过程的大量生物活性成分。缓激肽2型受体（B2R）参与重要的细胞内信号通路，作为炎症的调节因子成为潜在的... 详细信息

蛇毒已被证明具有抗炎活性，其中包含许多免疫原性弱、活性强的短肽小分子。蛇毒腺是分泌毒液的器官，含有毒素成分及调控其分泌过程的大量生物活性成分。缓激肽2型受体（B2R）参与重要的细胞内信号通路，作为炎症的调节因子成为潜在的抗炎药物开发的靶点。为了获得特异性的B2R结合肽，利用尖吻蝮蛇Deinagkistrodon acutus毒腺T7噬菌体文库对靶点B2R进行3轮生物淘选，测序获得了多个具有潜在结合能力的序列。通过序列长度、溶解性预测、稳定性预测和分子对接等一系列生物信息学分析，最终确定1个含25个氨基酸的肽段，命名为DAvp-4。合成该肽段，通过表面等离子体共振技术验证了DAvp-4和B2R的结合能力，在脂多糖诱导的巨噬细胞模型及糖尿病视网膜病变小鼠模型中肯定了其抗炎作用。此研究不但获得了一个具有成药潜力的毒腺多肽，还显示了噬菌体展示技术在筛选天然产物成分研究中的有效性。

关键词：噬菌体展示毒腺表面等离子体共振缓激肽2型受体

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尖吻蝮蛇毒腺的缓激肽2型受体结合多肽的筛选与验证

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四川动物 2024年第4期43卷 361-372页

作者：蒋安娜刘杨刘桂娜唐业忠陆方四川大学华西医院成都610041 中国科学院成都生物研究所成都610041

蛇毒已被证明具有抗炎活性,其中包含许多免疫原性弱、活性强的短肽小分子。蛇毒腺是分泌毒液的器官,含有毒素成分及调控其分泌过程的大量生物活性成分。缓激肽2型受体(B2R)参与重要的细胞内信号通路,作为炎症的调节因子成为潜在的抗炎... 详细信息

蛇毒已被证明具有抗炎活性,其中包含许多免疫原性弱、活性强的短肽小分子。蛇毒腺是分泌毒液的器官,含有毒素成分及调控其分泌过程的大量生物活性成分。缓激肽2型受体(B2R)参与重要的细胞内信号通路,作为炎症的调节因子成为潜在的抗炎药物开发的靶点。为了获得特异性的B2R结合肽,利用尖吻蝮蛇Deinagkistro-don acutus毒腺T7噬菌体文库对靶点B2R进行3轮生物淘选,测序获得了多个具有潜在结合能力的序列。通过序列长度、溶解性预测、稳定性预测和分子对接等一系列生物信息学分析,最终确定1个含25个氨基酸的肽段,命名为DAvp-4。合成该肽段,通过表面等离子体共振技术验证了DAvp-4和B2R的结合能力,在脂多糖诱导的巨噬细胞模型及糖尿病视网膜病变小鼠模型中肯定了其抗炎作用。此研究不但获得了一个具有成药潜力的毒腺多肽,还显示了噬菌体展示技术在筛选天然产物成分研究中的有效性。

关键词：噬菌体展示毒腺表面等离子体共振缓激肽2型受体

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活细胞中AT1R、B1R和B2R高阶聚化的研究

活细胞中AT1R、B1R和B2R高阶聚化的研究

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作者：何春芹曲阜师范大学

学位级别：硕士

肾素-血管紧张素系统（Renin-Angiotensin System，RAS）是血管张力和容量平衡调节的关键系统，与高血压和充血性心力衰竭等心血管疾病有着密切关系。近年来血管紧张素转化酶2（ACE2）的研究扩大了RAS系统在心血管系统以及其他系统中发... 详细信息

肾素-血管紧张素系统（Renin-Angiotensin System，RAS）是血管张力和容量平衡调节的关键系统，与高血压和充血性心力衰竭等心血管疾病有着密切关系。近年来血管紧张素转化酶2（ACE2）的研究扩大了RAS系统在心血管系统以及其他系统中发挥的生物效应，ACE2不仅能将血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ）分解成血管紧张素片段[1-7]，还能作用于激肽释放酶-激肽系统（Kallikrein-Kinin System，KKS）的重要组分缓激肽。这些肽类都是通过相应的G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors，GPCRs）发挥其生物学功能。最新研究发现GPCRs能以同源或异源二聚体，甚至是高阶寡聚体的形式存在，这些形式有不同于单体的特定功能特征。本文探讨人的血管紧张素Ⅱ1型受体（Angiotensin Ⅱ1receptor，AT1R）和缓激肽1型受体（bradykinin receptor1，B1R）以及缓激肽2型受体（bradykinin receptor2，B2R）之间的相互作用。这些结果将为G蛋白偶联受体高阶聚化尤其是AT1R/B1R/B2R的异源三聚化的分子组成提供新的见解，并为探寻相关疾病发生的分子机制提供理论依据。目前用于研究高阶寡聚化的方法主要是多种技术的联合应用，如顺序性共振能量转移（Sequential resonance energy transfer，SRET）技术、双分子发光互补（Bimolecularluminescence complementation，BiLC）联合生物发光共振能量转移（BRET）技术、双分子荧光互补（Bimolecular fluorescence complementation，BiFC）联合生物发光共振能量转移（BRET）技术以及双分子荧光互补（Bimolecular luminescence complementation，BiLC）联合荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer，FRET）技术等。本课题，我们首先成功构建六个真核重组质粒：NRlu-pcDNA3.1、CRlu-pcDNA3.1、Rluc-AT1R-pcDNA3.1、NRlu-AT1R-pcDNA3.1、CRlu-AT2R-pcDNA3.1和CRlu-B2R-pcDNA3.1;然后利用BRET和BiLC技术研究AT1R与B1R、AT1R和B2R的异源二聚化;最后利用SRET和BiLC+BRET技术研究AT1R/B1R/B2R的异源三聚化。本研究发现在共转染AT1R和B1R的HEK293T细胞中，AT1R和B1R能够形成组成型异源二聚体，而且在共转染AT1R、B1R和B2R的HEK293T细胞中，AT1R、B1R和B2R也能形成异源三聚体。本实验结果为与AT1R、B1R以及B2R相关的心血管疾病的发病机制提供了新的理论基础，同时也为开发治疗心血管疾病相关药物提供了新的潜在靶点。

关键词： G蛋白偶联受体缓激肽1型受体缓激肽2型受体血管紧张素Ⅱ1型受体高阶寡聚化

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