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FOXO3和IL-2在干眼患者结膜上皮细胞及泪液中表达及意义

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国际眼科杂志 2022年第9期22卷 1446-1450页

作者：徐艳唐晓蕾韩双羽刘雪莲四川中医药高等专科学校眼耳鼻咽喉科教研室四川省绵阳市621000 四川省绵阳市中心医院眼科 621000 四川中医药高等专科学校内科学教研室四川省绵阳市621000

目的:探究叉头框蛋白O3(FOXO3)、白细胞介素-2(IL-2)在干眼(DE)患者结膜上皮细胞及泪液中的表达及意义。方法:前瞻性研究。选择2019-03/2021-03收治的DE患者106例,另选同期85位健康体检者为对照。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结... 详细信息

目的:探究叉头框蛋白O3(FOXO3)、白细胞介素-2(IL-2)在干眼(DE)患者结膜上皮细胞及泪液中的表达及意义。方法:前瞻性研究。选择2019-03/2021-03收治的DE患者106例,另选同期85位健康体检者为对照。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结膜上皮细胞及泪液中FOXO3水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测样本中IL-2水平;分析DE患者治疗前后的泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌试验(SⅠt)、角膜荧光素染色(CFS)等眼表临床指标变化;Pearson相关性分析DE患者结膜上皮细胞、泪液中FOXO3和IL-2水平的相关性以及二者与临床指标的关系。结果:与对照组相比,DE组患者结膜上皮细胞及泪液中FOXO3水平均明显降低,IL-2水平均明显升高(均P结膜上皮细胞及泪液中FOXO3水平明显上调,IL-2水平明显下调(均P结膜上皮细胞、泪液中FOXO3和IL-2水平均呈显著负相关(r=-0.531、-0.469,均P结膜上皮细胞FOXO3水平与BUT、SⅠt均呈正相关(r=0.431、0.457,均P结膜上皮细胞及泪液中FOXO3水平降低,IL-2水平升高,二者与患者眼表指标存在密切的联系,有望成为DE临床监测和预后评估的实验室辅助指标。

关键词：叉头框蛋白O3(FOXO3) 白细胞介素-2(IL-2) 干眼结膜上皮细胞泪液

干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4和sST2的表达情况及临床意义

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国际眼科杂志 2023年第6期23卷 904-907页

作者：陈耀华顾佩霞江苏省南通市中医院眼科 226001

目的:探讨干眼患者结膜上皮细胞及泪液中干扰素调节因子4(IRF4)、可溶性致癌抑制因子2(sST2)表达情况及其临床意义。方法:选取本院2019-01/2021-12期间收治的94例干眼患者作为干眼组,同期选取97例行眼科检查的体检者作为对照组,收集研... 详细信息

目的:探讨干眼患者结膜上皮细胞及泪液中干扰素调节因子4(IRF4)、可溶性致癌抑制因子2(sST2)表达情况及其临床意义。方法:选取本院2019-01/2021-12期间收治的94例干眼患者作为干眼组,同期选取97例行眼科检查的体检者作为对照组,收集研究对象结膜上皮细胞及泪液,记录临床指标泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素染色(CFS)评分、基础泪液分泌试验(SⅠt)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结膜上皮细胞IRF4、sST2水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测泪液IRF4、sST2水平,采用Pearson法分析干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平与临床指标的相关性。结果:干眼组治疗前结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均显著高于对照组(P结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均显著低于治疗前(P结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平与治疗前CFS评分均呈正相关,与治疗前BUT、SⅠt均呈负相关(P结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均升高,且与干眼临床指标BUT、SⅠt、CFS评分均呈显著相关性,有潜力成为干眼新的治疗靶点。

关键词：干眼干扰素调节因子4(IRF4) 可溶性致癌抑制因子2(sST2) 结膜上皮细胞泪液

干眼症患者结膜上皮细胞及泪液中CCL1、miR-21-5p表达及临床意义

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徐州医科大学学报 2023年第8期43卷 613-619页

作者：李霞张茂菊恩施土家族苗族自治州中心医院眼科中心湖北恩施445099

目的分析干眼症患者结膜上皮细胞及泪液中趋化因子C-C-基元配体1(CCL1)、微小RNA(miR)-21-5p表达水平及其临床意义。方法以恩施土家族苗族自治州中心医院收治的118例干眼症患者作为干眼组,92例体检健康者作为对照组;根据病情严重程度将... 详细信息

目的分析干眼症患者结膜上皮细胞及泪液中趋化因子C-C-基元配体1(CCL1)、微小RNA(miR)-21-5p表达水平及其临床意义。方法以恩施土家族苗族自治州中心医院收治的118例干眼症患者作为干眼组,92例体检健康者作为对照组;根据病情严重程度将干眼症组分为轻度组(39例)、中度组(46例)及重度组(33例)。收集2组对象结膜上皮细胞及泪液并检测CCL1、miR-21-5p表达水平,比较2组CCL1、miR-21-5p表达水平以及泪膜破裂时间(BUT)值、泪液分泌试验(SIT)值、角膜荧光素染色(CFS)评分差异。分析CCL1、miR-21-5p表达水平与SIT值、BUT值、CFS评分的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析CCL1、miR-21-5p诊断干眼症的效能。结果干眼组患者结膜上皮细胞中CCL1、miR-21-5p表达水平为(353.26±70.45)ng/L、1.67±0.38,显著高于对照组的(263.16±49.27)ng/L、1.01±0.12(P结膜上皮细胞、泪液CCL1、miR-21-5p表达水平及CFS评分逐次升高,SIT值、BUT值逐次降低(P结膜上皮细胞及泪液中CCL1与miR-21-5p表达水平呈正相关(r=0.706、0.752,P=0.000),结膜上皮细胞及泪液CCL1、miR-21-5p与SIT值、BUT值呈显著负相关,与CFS评分呈正相关(P结膜上皮细胞CCL1、miR-21-5p以及CCL1联合miR-21-5p诊断干眼症的价值分别为0.850、0.869、0.937。泪液CCL1、miR-21-5p以及CCL1联合miR-21-5p诊断干眼症的价值分别为0.907、0.881、0.964。结论干眼症患者结膜上皮细胞及泪液中CCL1、miR-21-5p表达水平均升高,CCL1、miR-21-5p均与病情以及SIT值、BUT值、CFS评分有关,联合检测结膜上皮细胞或泪液CCL1、miR-21-5p表达水平有助于干眼症的辅助诊断。

关键词：干眼症 C-C-基元配体1 微小RNA-21-5p 结膜上皮细胞泪液诊断

腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因体外转染兔结膜上皮细胞

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第二军医大学学报 2008年第12期29卷 1499-1502页

作者：苏莉崔红平李艳红高新蕊上海交通大学附属第一人民医院眼科上海200080 同济大学附属上海市第十人民医院眼科上海200072

目的:研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 2,rAAV2)载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)对体外培养兔结膜上皮细胞的转染和表达情况,为后续研究提供依据。方法:体外培养... 详细信息

目的:研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 2,rAAV2)载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)对体外培养兔结膜上皮细胞的转染和表达情况,为后续研究提供依据。方法:体外培养兔结膜上皮细胞,rAAV2-EGFP按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为104、105、106转染第2代兔结膜上皮细胞,转染后第1、3、5、7日倒置荧光显微镜下观察细胞中EGFP表达情况,计算转染率。MTT方法检测rAAV2-EGFP转染对细胞增殖的影响。结果:随着MOI值增大及转染时间延长,EGFP表达效率逐渐增高,转染后第7～8日达到高峰并维持。MTT检测各MOI组与对照组差别无统计学意义。结论:rAAV2载体可以介导EGFP基因高效稳定转染兔结膜上皮细胞,并且对细胞增殖无影响。

关键词：腺相关病毒绿色荧光蛋白结膜上皮细胞荧光蛋白质示踪

多西环素对培养的人结膜上皮细胞炎性反应及凋亡的影响

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中华眼科杂志 2005年第9期41卷 842-846页

作者：肖启国刘祖国张梅郑健樑张志红罗丽辉陈家祺中山大学中山眼科中心中山大学眼表疾病研究中心

目的探讨多西环素对体外培养的人结膜上皮细胞细胞黏附分子1(ICAM1,CD54)、人类白细胞抗原DR(HLADR)、白细胞介素1β(IL1β)表达及凋亡的影响。方法混合消化液培养法培养人结膜上皮细胞,免疫组织化学方法进行细胞鉴定。培养至第3代或第4... 详细信息

目的探讨多西环素对体外培养的人结膜上皮细胞细胞黏附分子1(ICAM1,CD54)、人类白细胞抗原DR(HLADR)、白细胞介素1β(IL1β)表达及凋亡的影响。方法混合消化液培养法培养人结膜上皮细胞,免疫组织化学方法进行细胞鉴定。培养至第3代或第4代,在细胞培养液中分别加入γ干扰素(IFNγ)0U/ml、IFNγ300U/ml、IFNγ300U/ml+多西环素10μg/ml、IFNγ300U/ml+多西环素20μg/ml、IFNγ300U/ml+多西环素40μg/ml、IFNγ300U/ml+地塞米松100μg/ml,24h后收集细胞,流式细胞学检测CD54、HLADR及IL1β的表达,Westernblot检测CD54的表达。72h后收集细胞,碘化丙啶(PI)染色,流式细胞学检测凋亡。结果培养的正常人结膜上皮细胞可以表达少许CD54和IL1β,加入IFNγ后表达明显增加,加入多西环素和地塞米松后CD54和IL1β的表达下降(P结膜上皮细胞未发现明显的HLADR的表达及凋亡的产生,加入IFNγ及多西环素后HLADR的表达及凋亡水平无明显变化(P>0.05)。结论多西环素可抑制培养的正常人结膜上皮细胞CD54和IL1β等炎性相关因子的产生,提示多西环素对干眼等非感染性眼表炎性疾病的治疗可能具有一定的应用前景。

关键词：多西环素细胞培养结膜上皮细胞炎性反应细胞凋亡分子量标志

体外诱导恒河猴皮肤干细胞分化为结膜上皮细胞的实验研究

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中华医学杂志 2005年第36期85卷 2554-2558页

作者：卢蓉葛坚黄冰黄丹平高楠魏雁涛王智崇彭展教育部眼科重点实验室中山大学中山眼科中心广州510060

目的诱导体外培养、纯化的恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化,探索皮肤干细胞的可塑性。方法体外培养恒河猴皮肤干细胞,用Ⅳ型胶原纯化,纯化前后用流式细胞仪检测β1整合素和角蛋白15阳性细胞比例,纯化后的皮肤干细胞用细胞免疫荧光... 详细信息

目的诱导体外培养、纯化的恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化,探索皮肤干细胞的可塑性。方法体外培养恒河猴皮肤干细胞,用Ⅳ型胶原纯化,纯化前后用流式细胞仪检测β1整合素和角蛋白15阳性细胞比例,纯化后的皮肤干细胞用细胞免疫荧光和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术鉴定β1整合素和角蛋白15。皮肤干细胞转染绿色荧光蛋白基因,24h后挑选出有荧光的细胞,与人结膜上皮细胞共培养10d,再进行结膜上皮细胞的特异性抗原黏蛋白4和角蛋白4的鉴定,检测方法包括细胞免疫荧光和RTPCR。结果体外培养的皮肤干细胞纯化后比例接近90%。细胞免疫荧光和RTPCR检测β1整合素和角蛋白15阳性。转染绿色荧光蛋白基因24h后,细胞呈现绿色荧光,与结膜上皮细胞共培养10d后,细胞免疫荧光和RTPCR检查黏蛋白4和角蛋白4阳性。结论在体外培养纯化的灵长类动物恒河猴皮肤干细胞,在适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞。

关键词：皮肤干细胞可塑性结膜上皮细胞皮肤干细胞恒河猴干细胞分化体外诱导绿色荧光蛋白基因逆转录-聚合酶链反应

“去上皮”羊膜对体外培养结膜上皮细胞的作用

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中国实用眼科杂志 2002年第10期20卷 775-778,T001,T002页

作者：卢蓉黄丹平刘金陵葛坚张洁郑健樑彭鸿钧郑永欣中山大学中山眼科中心 510060

目的 :探索羊膜基底膜对结膜上皮细胞形态功能的影响。方法 :把“去上皮”羊膜按照基底膜或实质面向上分为两组 ,接种结膜上皮细胞 ,同样条件下培养。取培养 14天的两组标本进行组织学 (HE和PAS染色 ) ,透射电镜 ,以及免疫组化检查 (包... 详细信息

目的 :探索羊膜基底膜对结膜上皮细胞形态功能的影响。方法 :把“去上皮”羊膜按照基底膜或实质面向上分为两组 ,接种结膜上皮细胞 ,同样条件下培养。取培养 14天的两组标本进行组织学 (HE和PAS染色 ) ,透射电镜 ,以及免疫组化检查 (包括抗角蛋白和抗波形蛋白染色 )。结果 :细胞 72小时内贴附在羊膜上。基底膜面接种的上皮细胞顶端见微绒毛 ,单层排列 ,细胞间有丰富桥粒 ,基底膜完整 ,可见半桥粒 ,抗角蛋白染色阳性 ,抗波形蛋白染色阴性 ;实质面接种的上皮细胞胞浆内有大量脂滴 ,表面未见微绒毛 ,细胞松散堆积 ,与羊膜连接不紧密 ,未见桥粒和半桥粒 ,抗角蛋白染色弱阳性 ,抗波形蛋白染色强阳性。结论 :羊膜基底膜是结膜上皮细胞体外培养的良好载体 ,有利于上皮细胞生长、粘附、分化 ,并能减缓上皮细胞老化。

关键词：体外培养羊膜基底膜结膜上皮细胞眼表疾病

2型糖尿病并发干眼症患者结膜上皮细胞凋亡指数和转化生长因子-β_1的表达及其临床意义

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南方医科大学学报 2010年第10期30卷 2417-2418页

作者：孙毓蔓吉林北华大学附属医院内分泌科吉林吉林132011

目的探讨细胞凋亡指数和转化生长因子-β1(TGF-β1)在2型糖尿病(T2DM)并发干眼症患者结膜上皮组织中的表达及临床价值。方法 40例T2DM并发干眼症(观察组)患者和40例单纯T2DM患者(对照组)为研究对象,采用流式细胞仪检测结膜上皮细胞的凋... 详细信息

目的探讨细胞凋亡指数和转化生长因子-β1(TGF-β1)在2型糖尿病(T2DM)并发干眼症患者结膜上皮组织中的表达及临床价值。方法 40例T2DM并发干眼症(观察组)患者和40例单纯T2DM患者(对照组)为研究对象,采用流式细胞仪检测结膜上皮细胞的凋亡指数,采用免疫印迹细胞化学检测结膜上皮细胞TGF-β1的表达,并对TGF-β1的表达和细胞凋亡做相关性分析。结果观察组结膜上皮TGF-β1阳性表达率为85.0%,显著高于对照组(60.0%),相比较有显著性差异(P细胞、死细胞百分率显著高于对照组,活细胞百分率显著低于正常对照组,相比较有显著性差异(P结膜上皮细胞TGF-β1表达与凋亡指数呈显著正相关性(r=0.6812,P=0.002)。结论 TGF-β1在T2DM并发干眼症患者结膜上皮组织中表达异常,上皮细胞凋亡增多,TGF-β1的表达异常和上皮细胞凋亡增多与临床上T2DM并发干眼症密切相关。

关键词：糖尿病干眼症结膜上皮细胞凋亡转化生长因子-β1

Hoechst 33342标记恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第3期28卷 263-267页

作者：卢蓉黄丹平黄冰高楠王智崇葛坚中山大学中山眼科中心//眼科学国家重点实验室广东广州510060

【目的】探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。【方法】在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Tran... 详细信息

【目的】探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。【方法】在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Transwell非接触共培养10d,然后对诱导后的细胞用细胞免疫化学以及流式细胞术检测结膜上皮细胞的特异性表面标志,包括角蛋白4和粘蛋白4,同时检测细胞的Hoechst 33342表达情况。【结果】纯化后的皮肤干细胞比例接近90%。Hoechst 33342标记后的皮肤干细胞胞核显示蓝色荧光。在与结膜上皮细胞共培养10d后,皮肤干细胞显示结膜上皮细胞的标志粘蛋白4和角蛋白4阳性,流式细胞术检测阳性细胞比例分别为49.9%和95.6%,同时细胞还显示胞核的Hoechst 33342表达。【结论】灵长类动物恒河猴的皮肤干细胞,在体外的适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞。

关键词：皮肤干细胞结膜上皮细胞诱导恒河猴